A型肉毒毒素和A型肉毒神经毒素的非临床安全性评价

目的分析注射用A型肉毒毒素和注射用A型肉毒神经毒素活性药用成分(active pharmaceutical ingredient,API)的纯度、N-末端氨基酸序列和相对分子质量,并通过多个非临床研究试验,评价两种制品在药理、毒理特性等方面的一致性。方法采用SDS-PAGE法检测注射用A型肉毒毒素(衡力~,Lantox~,以下简称复合物)和注射用A型肉毒神经毒素(Chintox~,以下简称神经毒素)的纯度;对其N-末端氨基酸序列进行测序,并将测序结果与NCBI blast数据库中A型肉毒梭菌Hall株的氨基酸序列比对,确证其各组分的成分;毛细管凝胶电泳(capillary gel electrophoresis,CGE)检测其在非还原及还原条件下各组分的相对分子质量;单次肌肉注射、静脉注射、灌胃给予大鼠及单次肌肉注射给予食蟹猴的试验评价复合物和神经毒素的急性毒性;重复肌肉注射给予食蟹猴39周和恢复期12周的药理毒理试验评价复合物和神经毒素的长期毒性;家兔红细胞的体外溶血试验评价两者的溶血性;肌肉注射给予大鼠Ⅰ、Ⅱ段生殖毒性试验评价肉毒毒素的生殖毒性。结果神经毒素组:非还原条件下,神经毒素相对分子质量约152 000,N-末端氨基酸序列ALNDLQINVN,为完整的A型肉毒神经毒素;还原条件下,由相对分子质量约101 000,N-末端氨基酸序列ALNDLQINVN的重链和相对分子质量约51 000、N-末端氨基酸序列PFVNKQFNYK的轻链组成;复合物组:非还原条件下,含A型肉毒神经毒素(Mr 152 000)、非毒素非血凝素蛋白(non-toxic non-HA,NTNH)(Mr 136 000)、HA70组分(Mr 57 000、17 000)、HA33组分(Mr 30 000、28 000)和HA17组分(Mr 15 000),还原条件下,则含有重链、轻链、NTNH、HA70、HA33和HA17组分。注射用A型肉毒毒素、注射用A型肉毒神经毒素单次肌肉注射和静脉注射给予大鼠,肌肉注射的最大耐受剂量≥100 U/kg,静脉注射的最大耐受剂量≥30 U/kg;单次肌肉注射给予食蟹猴所产生的急性中毒反应与死亡情况一致,最大耐受剂量均为20 U/kg,近似致死剂量为40 U/kg;反复肌肉注射给予食蟹猴的试验中,未见明显毒性作用剂量(no observed adverse effect level,NOAEL)均为16 U/kg;在体外对家兔红细胞无溶血作用,不引起红细胞凝聚;Ⅰ段生殖毒性试验对雄鼠生育力的NOAEL为4U/kg,对雌鼠生育力的NOAEL为8 U/kg,对孕鼠早期胚胎发育的NOAEL为16 U/kg;Ⅱ段生殖毒性试验对孕鼠的NOAEL为1 U/kg,对胚胎-胎仔毒性和致畸性的NOAEL为16 U/kg。结论注射用A型肉毒毒素和注射用A型肉毒神经毒素在食蟹猴和大鼠的急性毒性、长期毒性等试验中,剂量、动物病理解剖结果一致,进一步说明A型肉毒毒素和A型肉毒神经毒素的药理毒理特性是相同的,且在反复肌肉注射给予食蟹猴的长期毒性试验中发现,A型肉毒神经毒素更不易产生抗体。在神经毒素灌胃试验中半数致死剂量高于复合物,表明其安全性更好。     

仔猪水肿病的诊断与防治

仔猪水肿病是仔猪的一种急性致死性疾病,是由某些溶血性大肠杆菌引起的传染性疾病。大肠杆菌可产生神经毒素和致水肿毒素,毒素作用于中枢神经及血管,引起断奶仔猪全身或局部麻痹、共济失调和眼睑部水肿为主要特征的疾病,因此将该病称为水肿病。该病是危害仔猪生产的重要疾病之一,多发于仔猪断奶后1～2周。1.流行病学本病多见于仔猪断奶前后,以4月—5月和9月—10月     

蛇毒α-神经毒素的同源模建

利用生物信息学的方法分析蛇毒α-神经毒素蛋白的一级结构序列信息及空间结构，并利用同源建模建立了该蛋白的三维结构，同时分析该蛋白功能区域、位于作用表面的氨基酸分布特点，如所带电荷、极性等。由于在蛋白质结构数据库（PDB）中无此蛋白的晶体结构信息，因此以上预测及分析的结构信息，为该蛋白的理论研究和实验设计提供了重要的参考。     

抗衰老生物活性物ARGIRELINE

肉毒杆菌神经毒素(BoNTs)是一种非常有效的抗皱去皱生物活性物，它通常通过对人体的局部注射来实现其抗衰老性能，它的发明代表着化妆品的一次技术性革命，但由于它的剧毒性限制了其应用。所以有必要开发一种无毒、又有BoNTs功能的生物活性物，Lipotee、S.A公司开发的ARGIRELINE正符合了这种需求。ARGIRELINE是一种乙酰己肽物，通过志愿者人体实验，使用10％ARGIRELINE O／W乳液30天后，眼部皱纹减浅了30％，它的作用机理类似于BoNTs，即通过抑制钙依赖性接受体SNARE的形成，阻止神经递质素起作用，虽然ARGIRELINE不及BoNTs强，但实验证明，ARGIRELINE是一种无毒、无任何刺激性，甚至大剂量用量，且有很好的抗衰老效果，可以说，ARGIRELINE是BoNTs一种生物安全性的替代品。     

尖吻蝮蛇凝血样酶及蛇毒神经毒素的碘化标记

蛇毒凝血样酶(TLE)和蛇毒神经毒素(NT)都具有致死的毒性,但适宜的剂量能成为某些顽症的有效药物。为了研究它们的毒理、半致死剂量、药理、有效剂量以及在动物体内滞留代谢过程、生物半衰期等,我们制备了~(125)I标记的TLE和NT。     

治疗用A型肉毒梭菌神经毒素全基因克隆及序列分析

目的对我国治疗用A型肉毒毒素生产用菌株Hall株神经毒素(BoNT)全基因进行克隆及序列分析,了解其遗传特性,为该制剂的质量控制提供依据。方法取生产用主代种子、工作种子,通过PCR扩增BoNT全基因片段,将其克隆至载体pGEM-T中,构建重组克隆质粒pGEM-T-BoNT,对克隆的BoNT基因进行序列测定与分析。结果测得的Hall株BoNT全基因序列3891bp,共编码1297个氨基酸。4种核苷酸的比例分别为:A:40.58%,G:16.17%,T:33.13%,C:10.13%;GC含量为26.29%,AT含量为73.71%。主代种子、工作种子核苷酸序列3591位的G变成A,为无义突变,未导致其推导的氨基酸的改变。序列测定结果与GenBank中登录的Hall标准株进行比较,主代种子、工作种子核苷酸和氨基酸序列的同源性分别为99.99%和100%。结论 A型肉毒梭菌Hall株在实验室长期的保存和生产传代过程中,BoNT基因遗传特性非常稳定。     

B型肉毒神经毒素重链C-端片段的修饰及表达

目的修饰、克隆B型肉毒神经毒素重链C-端(BoNT/b HC)片段,并在大肠杆菌中进行表达。方法以B型肉毒梭状杆菌8806株基因组DNA为模板,PCR扩增B型肉毒神经毒素重链的转膜区和结合区,并以高频密码子替换BoNT/bHC基因N-端的5个低频密码子。将目的片段克隆入表达载体pET-42b,转化E.coli BL21(DE3)PlysS,IPTG诱导表达后,进行Western blot鉴定及可溶性分析。结果重组表达质粒经PCR及酶切鉴定证明构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约为80000,表达量占菌体总蛋白的32.6%,主要以包涵体形式存在;重组蛋白可被相应的抗BoNT/b全毒素的多克隆抗体所识别。结论已成功修饰并表达了B型肉毒神经毒素重链C-端片段,为进一步研制重组疫苗及高特异性的诊断试剂奠定了基础。     

北京市供水水源微囊藻毒素检测及调查

1前言 随着蓝藻水华在世界范围的淡水和咸水水体中的频繁发生，水华污染带来的水质问题已成为全球性关注的环境问题。水华污染不仅能使水质产生异味，某些藻类还能够释放水溶性肝毒素和神经毒素，其中主要的是由微囊藻、念珠藻、鱼腥藻和颤藻等产生的微囊藻毒素（microcystins，以下简称MC）     

采用纳米管检测致命气体的探测器诞生

MIT的化学工程师们采用碳纳米管已制造出了最敏感的电子探测器,可用来检测致命气体,如神经毒剂沙林。这项技术也能探测芥子气、氨气和VX神经毒剂,有潜力制成低成本、低能量器件放在口袋里或安装在建筑物内来监测危险化学物品。Charkes＆HildaRoddey副教授MichealStrano设计的传感器已展示出了对模拟有机磷酸盐神经毒素（如沙林）分子的灵敏度记录.     

蛇毒α-神经毒素的同源模建

利用生物信息学的方法分析蛇毒α-神经毒素蛋白的一级结构序列信息及空间结构,并利用同源建模建立了该蛋白的三维结构,同时分析该蛋白功能区域、位于作用表面的氨基酸分布特点,如所带电荷、极性等.由于在蛋白质结构数据库(PDB)中无此蛋白的晶体结构信息,因此以上预测及分析的结构信息,为该蛋白的理论研究和实验设计提供了重要的参考.