酶消化结合组织块培养法用于颞下颌关节盘组织工程细胞扩增的初步研究

目的采用酶消化结合组织块培养法对山羊颞下颌关节（temporomandibular joint，TMJ）盘细胞进行体外培养和扩增，探索TMJ关节盘细胞体外培养及扩增的新方法。方法在无菌条件下，切取一月龄山羊TMJ关节盘，剪至1．0mm^3的碎块，用0．25％胰酶、0．01％I型胶原酶消化关节盘组织块，将消化好的组织块置入6孔板中培养。在倒置显微镜下连续观察细胞的形态变化及贴壁率，甲苯胺蓝染色、I型胶原免疫组化染色进行细胞鉴定，测定其生长曲线。结果原代培养的关节盘纤维软骨细胞4天可观察到贴壁细胞，7天贴壁细胞逐渐增多，第10天时细胞彼此相连，铺满平底，细胞以梭形为主，部分多角形。传代后12小时贴壁率达90％，大部分为多角形，4～5天即可长满瓶底。甲苯胺蓝染色可见异染颗粒，胶原免疫纽化染色胞浆内可见棕黄色颗粒。结论酶消化结合组织块培养法培养的山羊TMJ关节盘细胞具有较强的增殖能力，可作为TMJ关节盘组织工程中获取大量原代细胞的实用方法。     

氯胺酮复合戊巴比妥钠、丙泊酚在羊椎体骨缺损模型中的应用

目的 探讨氯胺酮复合戊巴比妥钠、丙泊酚在制备山羊椎体骨缺损模型中的麻醉效果及安全性。 方法 将18头海南本地山羊纳入研究,氯胺酮肌注进行麻醉诱导,使用氯胺酮复合丙泊酚、戊巴比妥钠静滴维持麻醉,制备山羊腰椎全椎体骨缺损并填入骨水泥动物模型。观察麻醉及手术效果、生命体征和不良反应。结果 所有动物手术均顺利进行,麻醉优良率为100%,无动物死亡,无胃胀、呕吐等不良反应。麻醉诱导期、麻醉期及苏醒期时长分别为15.94±1.76、121.11±9.44、42.44±6.73 min。各麻醉分期内血氧饱和度、体温、呼吸组间比较均无统计学差异（P＞0.05）。麻醉期心率与麻醉前、诱导期及苏醒期相比下降,有统计学意义（P＜0.05）。结论 利用氯胺酮、戊巴比妥钠、丙泊酚复合静肌麻醉,麻醉深度及进程满意,能满足经前路腹膜后行腰椎全椎体骨缺损动物模型的实验操作,且具有术后动物苏醒快,不影响其生理功能,动物存活时间长等优点。     

波杂羊规模化养殖的关键技术及效益分析

对湘西州近几年在山羊规模化养殖方面的成功经验进行归纳和总结,提出波杂羊规模化养殖的关键技术要点,并就养羊效益进行比较分析,以期进一步推动山区山羊产业的发展.     

羊肠毒血症的发生与防治

从１９９６年９月下旬起，会理县鹿厂镇星火村的黑山羊陆续发病，至１９９６年１０月上旬，共发病２８只，死亡１５只．经临床症状观察、尸体剖解和实验室诊断，结合流行病学分析，确诊为羊肠毒血症．通过及时采取防治措施，控制了该病流行     

引入青海的辽宁绒山羊双极胸导联心电图

对34只引入青海的辽宁绒山羊3个双极胸导联心电图进行了描记和分析。结果发现：①在3个双极胸导联心电图上，P波和T波的波向变化甚大；②在CⅡ和CⅢ导联心电图上，QRS综合波多数呈qR型(分别为94．2％和79．5％)，而在CI导联心电图上，QRS综合波呈现9种波型；③各波和间期的时限(s)为：P坡，0．049;P—Q间期，0．107；QRS综合波，0．059;T波，0．072;Q—T间期，0．306；Q—Tc间期，0．373;R—R间期，0．672；④被检山羊窦律不齐的发生率达64．71％。     

山羊精子电穿孔转染外源DNA影响因素及最适条件的研究

本文以山羊精子为材料用电穿孔导入法转染外源基因,为生产转基因山羊奠定基础。用血细胞计数器在显微镜下记数死亡精子数检测精子活力,并用原位杂交实验检测电击精子消化前、后阳性率,以探讨山羊精子电穿孔转染外源DNA的方法及影响因素,摸索并优化电穿孔转染程序和条件。结果显示:电穿孔导入法可用于山羊精子介导转染外源DNA;电场强度、电击时间和电击次数同时影响精子活力,其中电击时间显著影响外源DNA的内化转运(P<0.05),山羊精子最适电穿孔条件为400V、200μs、电击1次,该条件下电击后精子活力和消化前、后阳性率分别为0.45和27.6%、22.5%;最适电穿孔条件下电击洗涤精子比未洗涤精子的消化后阳性率提高14%(P<0.01),将洗涤精子与外源DNA共孵育后再电击比不孵育处理组的消化后阳性率提高5.8%(P>0.05);电穿孔处理消化后阳性率在个体间无显著差异,且电击转染的精子被内化转运到精细胞内的外源DNA分布不规则。结果表明,山羊精子电穿孔转染外源DNA的最适转染条件为对精子充分离心洗涤并与外源DNA共孵育后,在400V/200μs条件下电击1次。     

乐至黑山羊的同期发情研究

乐至型川中黑山羊具有常年发情、产羔率高等优良繁殖特性,但是在极端气候条件下(炎热夏天和寒冷冬天)产的羔羊成活率低,因此,本研究拟建立同期发情率高、受胎率高和产羔率高的山羊同期发情方法以调整产羔季节.研究选取健康黑山羊63只,随机分为A、B、C三个组.在同一时间给每只羊放置CIDR阴道栓,处理13天后撤栓,同时注射PGF_(2α),然后注射不同剂量的PMSG:A组(n=20)不注射,B组(n=20)300IU,C组(n=23)500IU.母羊发情后用公羊自然交配;观测到母羊发情后,颈静脉采血制备血浆,用ELISA法测定血浆生殖激素(FSH、LH、E_2和P_4)浓度.结果发现,撤栓后72h内A、B、C三个组的发情率分别为80.0%、100.0%和82.6%,受胎率分别为68.8%、90.0%和78.9%,产羔率分别为190.9%、238.9%和206.7%.各组间生殖激素(FSH、LH、E_2和P_4)浓度差异不显著.综上所述,本试验优化出乐至黑山羊同期发情方法,即CIDR处理13天,撤栓后肌肉注射PGF_(2α)及300IU的PMSG.     

山羊发情周期的人工模拟实验

将２８只摘除卵巢后６～７周的山羊随机分为４组，按２×２因子实验设计进行处理，实验因子为：①肌肉注射孕酮（Ｐ＿４）：１～５天每天１０ｍｇ；６～１２天每天２０ｍｇ．②肌肉注射雌二醇（Ｅ＿２）：第１３天２０ｕｇ；第１４天４０ｕｇ．对照处理则注射相应体积的玉米油，在第１～１５天每天采１次颈静脉血样，用ＲＩＡ法测定血浆Ｐ＿４和Ｅ＿２水平，结果表明，每天注射１０和２０ｍｇＰ＿４可使血浆Ｐ＿４水平分别维持在３和５ｎｇ／ｍｌ左右，注射２０和４０μｇＥ＿２可分别产生３０和５０ｐｇ／ｍｌ的血浆Ｅ＿２水平。用这种方法，简便而准确地模拟了山羊发情周期中血浆Ｐ＿４和Ｅ＿２水平的变化范型。