超声波辅助农杆菌介导法转化鱼腥草的初步研究

应用超声波直接转化法、农杆菌介导转化法、恒定频率的超声波仪处理植物15 min后再用农杆菌介导法侵染植物和在农杆菌侵染过程中辅助以超声波处理10 s 4种方法对鱼腥草进行转基因研究,结果显示:上述4种转化法对gus基因最大瞬时表达率依次为47%、60%、80%和75%。结论:用恒定频率的超声波仪处理植物15 min后再用农杆菌介导法侵染植物和在农杆菌侵染过程中辅助以超声波处理10 s两种转化法gus基因的瞬时表达率最高,说明超声波辅助农杆菌介导遗传转化方法是一种高效的鱼腥草转基因方法,它实现了外源基因在植物中的高效表达。  

生物技术与葡萄遗传育种

 生物技术的发展和应用已渗透到葡萄遗传育种的各个领域。DNA分子标记为研究葡萄品种起源和育成新品种提供了强有力的工具,特别是SSR标记在葡萄品种鉴别、系谱分析和遗传图谱构建方面已得到广泛应用。基于DNA分子标记遗传图的构建加速了杂种的早期选择,遗传图和物理图的结合可以克隆控制重要性状的功能基因,遗传转化技术的应用可以改良现有的葡萄品种。因此,生物技术正深刻改变着传统的葡萄育种方法。  

转录因子ABP9转化大豆（Glycine max L.） 及遗传转化条件优化

 【目的】将抗逆相关转录因子ABP9基因导入大豆(Glycine max L.)基因组，并对转化系统条件进行探索，为提高大豆遗传转化效率提供依据。【方法】以农杆菌介导的半种法大豆遗传转化系统为基础，对目的基因进行转化；以健康外植体获得率、抗性丛生芽获得率和抗性芽伸长比率为指标，对转化系统条件进行优化。【结果】共培养时保证充足的光照和氧气，外植体生长情况最好；在共培养或诱导丛生芽培养基中加入600 mg•L-1的L-半胱氨酸可以使抗性丛生芽获得率由22.1%提高至32.6%；采用4种植物激素进行正交试验，诱导抗性芽伸长比率最高的激素配比为：6-BA为1.5 mg•L-1，GA3为0.75 mg•L-1，IAA为0.1 mg•L-1，ZT为1.0 mg•L-1。【结论】利用优化的方法进行遗传转化研究已获得转基因再生植株，经PCR和DNA测序等分子检测，证明目的基因ABP9已导入并整合到大豆基因组中；转化率为1.33%。  

HAL1基因转化百脉根(Lotus cirniculatus)的初步研究

以Bar基因为标记基因,以从酵母中克隆的耐盐基因HAL1为目的基因,构建了植物表达载体pCHAL1。以子叶为外植体,用农杆菌介导法转化豆科植物百脉根。抗性再生苗经PCR方法鉴定,HAL1基因阳性率为46.7%。初步证明HAL1基因已整合到百脉根基因组中,且转基因植株的表型正常。  

苹果高效遗传转化受体系统的建立与优化

以嘎拉（Gala）和长富2号（Nagafu No.2）组培苗离体叶片为外植体,进行了不同生长调节剂浓度、叶片成熟度、暗培养时间、叶片极性及抗生素筛选研究。结果表明,嘎拉叶片适宜的再生培养基为MS＋TDZ0.5 mg/L＋NAA 0.4 mg/L,叶片近轴面接触培养基;长富2号叶片适宜的培养基为MS＋TDZ 4.0 mg/L＋NAA 0.6 mg/L,叶片远轴面接触培养基。经过21 d的暗培养后,嘎拉和长富2号叶片再生频率分别可达100%和60%。抗生素筛选浓度为卡那霉素5 mg/L,头孢霉素200-300 mg/L。  

水稻遗传转化研究进展

植物遗传转化是利用重组DNA技术、组织培养技术或种质系统转化等技术,将外源基因导入植物组织或细胞,获得转基因植物.转基因技术可以针对现有植物或品种中存在的不足进行遗传改良,使之更符合人类的需要.因此,该技术在过去的几年内发展迅速.本文综述了近几年水稻遗传转化的研究进展、存在的问题及对策.  

农杆菌介导的MADS-box基因转化黄瓜初步研究

试验通过叶盘转化法,利用根癌农杆菌介导,将从黄瓜中克隆到的MADS-box同源基因—CSMADS06基因,转化到烟草和2种不同品系的黄瓜S06和S52中,经过除草剂筛选获得14株转化烟草和28株转化黄瓜。PCR检测和GFP荧光检测证实,外源的CSMADS06基因已转入这些植株中。阳性率分别为2.36%(烟草),4.1%和2.9%(黄瓜)。抗性植株已开花结果并获得子一代植株。  

花生油酸脱氢酶基因遗传转化体系的建立与表达分析

 【目的】培育高油酸的花生新种质。【方法】以根癌农杆菌为介导将含有油酸脱氢酶基因的植物双元表达载体pFGC/2nd转入花生外植体丛生芽，通过卡那霉素筛选，器官发生再生转化植株;荧光定量PCR检测转基因植株。【结果】丛生芽外植体于OD600为0.6的农杆菌菌液中浸泡8～10 min后，在MS培养基上暗培养3 d效果较好。诱导筛选培养3个月左右，共得到16株转化植株，其中11个转基因植株经PCR检测呈阳性，说明外源基因已整合进入受体植物。进一步的荧光定量PCR检测显示，有4个植株基本上不表达或表达量很低。【结论】建立花生丛生芽遗传转化体系;RNA干扰对内源的油酸脱氢酶基因产生了抑制作用。  

转DREB1A基因提高烟草抗逆性的研究

将拟南芥(Arabidopsis thaliana)DREB1A基因分别在组成型启动子花椰菜病毒35S启动子和逆境诱导型启动子rd29A的驱动下转入烟草中,获得的两种转基因植株对干旱和低温胁迫的抗性均显著提高,但对盐胁迫的抗性无明显变化。研究分析了组成型启动子和逆境诱导型启动子控制的DREB1A转基因植株在形态发育和抗逆性上的差异,对利用DREB1A基因改良作物抗逆性和抗逆基因工程研究中启动子的选择奠定了技术基础。  

转cry1Ab基因抗虫水稻的培育

采用农杆菌介导的遗传转化法,将cry1Ab基因导入优良三系恢复系明恢63,共获得了92个独立转化株,其中13株为单拷贝。通过发芽试验,获得了11个单拷贝转基因纯合系。ELISA检测结果表明:不同株系其Bt蛋白含量不一样,但杂种的Bt蛋白含量与其亲本一致。室内人工接虫试验及田间抗虫性试验初步表明:5个纯合株系表现高度抗性,且农艺性状与原品种没有显著差异。由此说明,所获得的这些单拷贝转基因株系可作为育种材料,用于抗虫水稻的培育。