猕猴输精管注射高分子聚合物HFMC的抗生育试验初报

本文介绍一种高分子聚合物HFMC注入输精管,遇体液即合成有孔隙（孔径2-16 μ）的固态聚合物,附着管壁并缓慢释放适度的H[+],以改变精子存活环境,从而达到狒猴非阻断性的输精管避孕。在狒猴配对试验中证明,输精管注入HFMC 30 mg×2（n=2）,在注射后47-50天精液品质即逐渐恢复,已有致孕能力;输精管注入HFMC 60 mg×2（n=4）,在300天后,有些个体精液品质才逐渐恢复,注后348-353天之间已有50%的雄猴配对致孕;另有50%的雄猴在注入854天时精液品质仍处于不育水平。实验结果还表明：HFMC对精子具有致死,致畸率高及使精子活力显著下降,这种作用随HFMC剂量的增大而加强,这种影响也随时间的后移而逐渐减弱;HFMC对输精管具有可通性及可复性。今后如能在注入剂量,自溶稳定性方面再改进,HFMC有可能成为男性节育较为理想的一种新型避孕剂。     

干扰附睾液正常微环境的形成开避男性避孕的新途径

囊性纤维变性跨膜传导调控器（cystic fibrosis transmembrane conductance regulator,CFTR)在附睾液微环境的形成中具有很重要的作用。我们实验室的最新研究结果显示此蛋白在发育中听精原细胞中也有表达,说明CFTR还可能参与精子的发生。因此,进一步了解CFTR在男性生殖系统的作用和通过药理学的方法干扰它的功能,将为男性避孕研究开辟的一个新的领域。     

卵透明带ZP3的研究及其应用

卵透明带蛋白围绕在卵母细胞外,在受精过程中起着重要作用。ZP3蛋白是卵透明带蛋白家族中的重要成员,在功能上,ZP3作为初级精子受体,起始精卵结合和顶体反应。由于ZP3在受精中的重要作用,它成为免疫避孕的有效靶点。ZP3蛋白疫苗和DNA疫苗可以诱导机体产生较强的免疫反应,导致生育降低,同时带来一定程度的副作用。本文重点介绍了ZP3的免疫特性及其应用。     

分子佐剂C3d3增强hCGβ蛋白疫苗免疫原性及其抗血清中和hCG生物学活性的作用

本文观察分子佐剂C3d3增强hCGβ蛋白避孕疫苗体液免疫效力的能力。采用分子生物学技术以phCMV1为载体分别构建分泌型、带有6个组氨酸纯化标签的真核表达质粒phCMV1-6His-hCGβ-C3d3和phCMV1-6His-hCGβ,在CHO细胞中获得重组蛋白的稳定、高效表达,并用镍柱和凝胶过滤层析对其进行分离、纯化。分别用hCGβ-C3d3融合蛋白、hCGβ 弗氏佐剂和单用hCGβ免疫生育期雌性BALB／c小鼠,共免疫两次,间隔4周。ELISA测定血清中抗hCGβ抗体滴度,并对各组小鼠产生的抗血清中和hCG生物学活性的能力进行比较。结果表明hCGβ单独免疫组在加强免疫后才见抗体生成,其抗体滴度比hCGβ-C3d3融合蛋白免疫组低1995倍,C3d3的佐剂能力是弗氏佐剂的10倍(初次免疫)-32倍(再次免疫),并且hCGβ-C3d3融合蛋白免疫小鼠产生的抗血清具有很强的中和hCG生物学活性的作用。实验证明通过分子佐剂C3d3可以大幅提高机体对hCGβ的体液免疫应答能力。     

恒河猴CGβ亚基(rmCGβ)DNA在HeLa细胞中的表达及其对小鼠免疫反应的诱导

为了探讨人绒毛膜促性激素hCGβ亚基DNA避孕疫苗的可能性,以恒河猴绒毛膜促性腺激素rmCGβ亚基全长氨基酸编码序列的cDNA片段构建了真核质粒表达载体pCMV4-rmCGβ,通过脂质体转染的方法导入HeLa细胞,采用RT－PCR方法检测rmCGβ在mRNA水平上的表达,实验证明HeLa细胞在转梁后24h表达最强,48h和72h表达依次减弱,利用ELISA方法检测了pCMV4-rmCGβ在HeLa细胞中rmCGβ蛋白的表达,rmCGβ蛋白主要以细胞内或膜结合的形式存在,其含量可达0.5ug/10^6细胞,pCMV4-rmCGβDNA免疫接种雌性BALB／c纯系小鼠,能诱导小鼠产生强烈的体液免疫应答,滴度最高可达1：6000以上,高滴度的免疫反应持续10周以上,且免疫反应的强度与pCMV4-rmCGβDNA无剂量依赖关系。     

ZNF185基因抗原表位分析及合成肽免疫避孕效果研究

目的:预测ZNF185基因的抗原表位,并研究相应合成多肽诱导的免疫应答和免疫避孕效应。方法:应用DNA Star软件预测ZNF185蛋白二级结构、亲水性、可塑性、表面可及性与抗原指数。合成携带ZNF185抗原表位的多肽,进行小鼠免疫实验,检测小鼠血清中IgG抗体水平、交配率、妊娠率及每窝产仔数,并观察生殖器官是否发生病变。结果:筛选ZNF185两段氨基酸序列合成多肽,该多肽能够诱导小鼠产生较高的抗体水平,实验组小鼠交配率和妊娠率显著低于对照组,生殖器官并无发生明显的组织病理学变化。结论:ZNF185具有一定的抗生育作用。     

抗人绒毛膜促性腺激素避孕疫苗的研制

<正>一、研制避孕疫苗的童义: 计划生育是我国的一项基本国策,它关系到我国各族人民的健康和繁荣。我国现有11亿多人口,占世界人口的1/4,而国土面积只占全世界的1/7,人口增长速度过快已经制约了国民经济的发展。为了依法推行计划生育,控制人口数量,提高人口素质,使人口增长与国民经济发展相适应,必须研究有效的避孕方法。     

国产避孕疫苗研究现状和前景

国产第１代避孕疫苗已经研制成功。疫苗构建是采用妊娠特异性强、妊娠期短暂出现的糖蛋白激素－－人类绒毛膜促性腺激素（ｈｕｍａｎ ｃｈｏｒｉｏｎｉｃ ｇｏｎａｄｏｔｒｏｐｉｃ ｈｏｒｍｏｎｅ,ｈＣＧ）为靶抗原,应用蛋白质工程技术研制的。抗原不但保留了ｈＣＧ的生物活性,而且不与垂体的其他３种激素交叉,并克服了“自身免疫耐受性”,使免疫系统对它作为“非自身”而产生抗体反应。以此构建的第１代避孕疫苗原型,经临     

小鼠β-防御素30的原核表达和纯化

目的:在原核细胞中表达小鼠β-防御素30(DEFB30),并对表达产物进行鉴定和纯化。方法:用RT-PCR方法扩增小鼠Defb30的cDNA序列,将2个拷贝的cDNA序列串联连入原核表达载体pET28(a),构建重组表达载体pET28(a)-Defb30,并将重组表达载体转化至大肠杆菌Rosetta(DE3),IPTG诱导表达,以Western印迹分析表达产物His-DEFB30,用Ni-NTA亲和柱纯化融合蛋白。结果:构建了Defb30基因的原核表达载体,经IPTG诱导,相对分子质量约15×103的融合蛋白获得表达,Western印迹分析证实此蛋白即为目的蛋白,经Ni-NTA柱亲和纯化,获得了高纯度的融合蛋白His-DEFB30。结论:获得了在大肠杆菌中表达的DEFB30,为研究该蛋白的免疫避孕效果、抗菌活性奠定了基础。