磷脂酶A2水解卵磷脂研究的新方法

磷脂酶A2(Phosphatide a-acyl-hydrolase, EC3.1.1.4)是一类催化磷脂二位酰基水解的脂肪酶,广泛存在于细菌、植物哺乳动物的组织、细胞和分泌物中,具有产生炎性介质、参与磷脂重建、促进血液凝固等作用.研究证明,在肺脏、心血管、胃肠道、皮肤、骨骼等系统的急、慢性炎症中,磷脂酶A2活性均有增高并介导一系列病理、生理过程[1].另外,磷脂酶A2水解卵磷脂形成的溶血性卵磷脂在化学、制药和食品工业方面有重要的用途.     

中科院广州生物医药与健康研究院:丙肝病毒包装释放研究获进展

正近期,中科院广州生物医药与健康研究院发现,人肝细胞核因子-4α(HNF4α)在丙型肝炎病毒(HCV)的包装和释放过程中发挥着重要作用,其下游因子磷脂酶A2GXIIB(PLA2GXIIB)和微粒体甘油三酯转运蛋白(MTP)共同参与其对HCV包装和释放过程的调控。该研究提示了HCV可能利用HNF4α来挟持VLDL通路为己所用。相关研究成果已于近期在病毒学杂志(Journal of Virology)上在线发表。HNF4α是表达量最高的肝细胞     

微重力对蛋白质晶体结构的影响

为了考察微重力对蛋白质晶体结构的影响，对空间和地面结晶实验生长出的蛋白质晶体进行了结构测定，并进行了比较研究，在完成对鸡蛋清溶菌酶晶体结构研究的基础上，又对酸性磷脂酶Ａ２晶体结构做了测定和比较，从目前的研究结果可以得到这样的结论：微重力可能不足以改变蛋白质肽链的构象，但微重力能够改善与蛋白质分子联系罗弱的有序水分子的空间排布状况，这应该是微重力改善蛋白质晶体质量的一个重要因素，另外，上述两种蛋白晶     

黑老虎醇提物对尖吻蝮蛇毒主要酶类的抑制作用

【目的】探究中草药黑老虎(Kadsura coccinea)醇提物对尖吻蝮(Deinagkistrodon acutus)蛇毒中主要酶类的抑制作用。【方法】用体积分数为75%的乙醇溶液浸泡黑老虎后再进行超声波处理得到醇提物；通过体外酶活抑制实验分别检测醇提物对尖吻蝮蛇毒中磷脂酶A2、蛋白水解酶、透明质酸酶、类凝血酶的抑制作用。【结果】黑老虎醇提物对尖吻蝮蛇毒中的蛋白水解酶、磷脂酶A2和透明质酸酶具有明显的抑制作用。当蛇毒与醇提物的质量比分别为1∶100，1∶10和 1∶5时，后者能抑制蛇毒中98%磷脂酶A2活性、79%蛋白水解酶活性和65.14%透明质酸酶活性。同时，醇提物能够明显抑制尖吻蝮蛇毒水解纤维蛋白原和类凝血酶的活性。【结论】研究结果证实了黑老虎醇提物能有效抑制尖吻蝮蛇毒中的主要酶类，为深入研究黑老虎药材的抗蛇毒机制提供了理论依据。     

不同因素对泡囊水溶液中磷脂酶A2活性的影响

首次在泡囊水溶液中研究磷脂酶A2 催化水解卵磷脂并考察了各种因素对该反应的影响.研究结果表明:在泡囊水溶液中磷脂酶A水解卵磷脂的最佳温度为 50℃.     

sPLA_2cDNA表达载体的选择和亚克隆

目的：选择适当的载体,启动Ca~(2 )依赖分泌型磷脂酶A2（SecretaryphospholipaseA2sPLA2）cDNA的表达,为进一步研究各种因素对该酶活性的影响奠定基础。方法：首先从sPLA2-pGEM7重组体（这一重组体不能在转染的真核细胞中表达）获得人sPLA2cDNA,克隆该片断进入中间载体BSSK（使aPLA2cDNA两端出现XbaI、Hind3酶切位点）,选择antisensesPLA3-BSSK重组体进行扩增,双酶消化上述重组体及PRC／CMV,电洗脱回收aPLA2片断及线性化的载体PRC／CMV,定向连接sPLA2-PRC/CMV,重组体转染鼠巨噬细胞,筛选,扩增阳性克隆;提取RNA,Northem杂交法检测sPLA22mRNA。结果：应用定向克隆方法,成功地制备了sPLA2-PRC/CMV重组体。用这一重组质粒转染鼠巨噬细胞后,Northem杂交检测到了sPLA2－mRNA的表达。结论：SPLA_2－PRC／CMV是一有效的表达系统。     

磷脂酶D产生菌株的筛选及其转磷脂化反应特性

采用磷脂平板筛选法,从土壤中筛选出一株1株能够降解磷脂的菌株SNUPLD-6.经验证SNUPLD-6产的磷脂酶为胞外酶含有高效磷脂酶D(PLD).对该菌形态特及ITS序列进行分析,将其鉴定为地霉属的白地霉(Geotrichum candidum).对该菌的生长条件及该菌产的PLD的转磷脂反应的条件进行优化,实验结果表明:该菌株的最适生长温度为30℃,最适pH为6,最适碳源为葡萄糖,最适氮源为牛肉膏和蛋白胨各50%.该菌产PLD最适发酵周期为3d.该PLD的转磷脂化反应最适反应温度为32℃,最适pH为5.5,最适的反应缓冲液为0.02M的醋酸-醋酸钠缓冲液,最适的金属离子激活剂为Ca2+、Zn2+.     

尖吻蝮蛇蛇毒酸性磷脂酶A2三维结构的计算机模拟研究

利用同源模建方法,借助于分子力学优化和分子动力学模拟,构建了尖吻蝮蛇蛇毒酸性磷脂酶Ａ２Ｉ和Ａ２Ⅱ的三维结构,用Ｐｒｏｆｉｌｅ－３Ｄ和Ｐｒｏｓｔａｔ检测模建蛋白的结构以确证其合理性,并把模建蛋白与知同源蛋白的空间结构进行了比较,对模建蛋白的结构与的关系进行了讨论,认为在钙离子 度相同的情况下,钙离子的结合可能使酸性磷脂酶Ａ．ａＡＰＬＡ２Ⅱ中ＴｒＰ的荧光强度比Ａ．ａＰＬＡ２Ⅰ中Ｔｒｐ的荧光强度变化大。     

胞内型磷脂酶A2基因亚克隆与基因表达

目的 研究花生四稀酸在细胞中的释放及前列腺素的合成,构建与花生四稀酸释放相关的表达系统。即胞内型磷脂酶Ａ２（ｃｙｔｏｓｏｌｉｃ ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐａｓｅ ｃＰＬＡ２）ｃＤＮＡ－ｐＲＣ／ＣＭＶ。方法 从克隆载体ｐＭＴ２用Ｓａｌ１制备ｃＰＡＬ２ｃＤＮＡ;平末端连接ｃＰＡＬ２－ｐＲＣ／ＣＭＶ;转染鼠巨噬细胞及筛选正向阳性克隆;ｎｏｒｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ检测ｃＰＬＡ２ ｃＤＮＡ基因表达。结果 人ｃＰＬＡ