Wistar大鼠胰岛细胞体外分离、纯化及鉴定

目的 探索Wistar大鼠胰岛分离纯化的最佳条件.方法 采用肝胰管内灌注胶原酶消化分离胰岛及Ficoll 400密度梯度离心纯化.纯化后的胰岛经组织学染色、电镜及放射免疫法鉴定其特异性和活力.结果 组织学染色显示纯化后胰岛的活力和纯度分别在95%和85%以上.电镜显示纯化后的胰岛形态完整,包膜清晰,分泌颗粒丰富.放射免疫结果表明,低糖组和高糖组分泌胰岛素的浓度有显著差异,证明胰岛功能良好.结论 肝胰管内灌注胶原酶消化法是一种好的消化方法.影响胰岛收获量的因素很多,例如胰腺的充分扩张,胶原酶的浓度和活性以及消化的时间等.     

半叶马尾藻多糖的分离纯化与光谱分析

本文对半叶马尾藻多糖采用水提醇沉法粗提，蛋白酶联合Sevag法去蛋白纯化，凝胶过滤柱层析分离得半叶马尾藻纯多糖的不同组分，溴化钾压片红外光谱测定和紫外光谱扫描鉴定分析。结果表明，SHP的苯酚-硫酸呈色反应呈阳性，茚三酮反应呈弱阳性，碘-碘化钾反应呈阴性，说明提取物为非淀粉性多糖。SHP的提取率为8．56％，总糖含量为90．96％。凝胶过滤柱层析结果表明，半叶马尾藻多糖中含有吡喃多糖、木聚糖、半乳糖、阿拉伯糖、葡萄糖、鼠李糖和果糖等。紫外扫描结果显示多糖几乎不含核酸和蛋白质；红外光谱显示SHP主要为吡喃多糖，并显示多糖分子结构中存在β2糖苷键，还存在α-D-半乳吡喃糖的特征吸收峰。     

抗前胃泌素释放肽单克隆抗体的纯化及体外对小细胞肺癌的活性

目的探讨亲和层析法纯化抗前胃泌素释放肽（PGRP）单克隆抗体（MAb）的效果,为该法纯化其他抗体提供数据依据。方法采用蛋白A-琼脂糖亲和层析法纯化含有MAb的腹腔积液,并用SDS—PAGE和酶联免疫吸附（ELISA）法分别检测其纯度和效价,用流式细胞术和免疫组织化学法检测其对小细胞肺癌细胞株NCI—H446的组织切片的生物功能。结果亲和层析法纯化前小鼠腹腔积液蛋白质质量浓度平均为23．62mg／ml;纯化前、后蛋白总量分别为148．79和146．67mg,回收率为98．58％。腹腔积液中MAb质量浓度平均为5．21mg／ml;纯化的MAb纯度达95％以上。纯化后抗体免疫学活性均高于纯化前,提高了6．90～15．40倍。结论蛋白A-琼脂糖亲和层析法可快速、高效地从小鼠腹腔积液中纯化抗PGRPMAb,且抗体具有较高的纯度,免疫学活性明显提高,能够选择性的和小细胞肺癌细胞的PGRP结合。     

飞行时间质谱在生物大分子（HCG）纯化过程中的应用

目的：探讨飞行时间质谱在生物大分子纯化鉴定中的应用。方法：利用飞行时间质谱仪检测自孕妇尿液中提取和纯化人绒毛膜促性腺激素（ＨＣＧ）过程中，不同步骤所获样品的分子量分布。结果：随着提纯过程的进行，粗品ＨＣＧ不断得到净化，质谱图显示信号峰逐渐减少，纯度逐渐提高。结论：飞行时间质谱是一种新型的测定生物大分子分子量分布的仪器，可用于生物大分子的纯化鉴定，具有高灵敏度、高分辨率、快速、重复性好等特点。     

大孔吸附树脂分离獐芽菜中獐牙菜苦苷的研究

以獐牙菜为原料,采用醇提取和大孔树脂进行吸附分离獐牙菜苦苷,结果表明,以60％甲醇40ml置回流提取器上,50℃加热回流提取后上LSA一20树脂分离效果较好,能使獐芽菜苦苷纯度达到59．1％;獐芽菜苦苷得率为72．3％。     

MA104细胞牛轮状病毒受体的提纯及鉴定

目的研究ＭＡ１０４细胞上的牛轮状病毒（ＢＲＶ）受体。方法ＢＲＶ受体的单克隆抗体（单抗）与溴化氰活化的Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ偶联，利用免疫亲和层析法从ＭＡ１０４细胞膜制备物中提纯了ＢＲＶ受体。结果间接酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）及免疫斑点法表明提纯物呈ＢＲＶ受体抗原阳性；ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳显示单抗偶联柱层析洗脱物仅有单一区带与洗脱峰对应；Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ表明提纯物能够免被受体单抗识别；固相分析实验表明纯化物具有结合ＢＲＶ的能力；提纯物的小鼠免疫血清可以阻断ＢＲＶ感染宿主细胞。结论纯化物为ＢＲＶ受体     

梅毒螺旋体Tp0453和TpN47抗原的制备及应用

目的表达纯化梅毒螺旋体Tp0453和TpN47蛋白,评价2种蛋白的检测效果,并建立一种新的梅毒抗体检测方法。方法以梅毒螺旋体Nichols菌株基因组DNA为模板,通过PCR扩增Tp0453和TpN47蛋白基因,构建原核表达载体;转化表达菌株后经IPTG诱导表达,并优化表达条件,大规模培养后采用Ni2+亲和柱纯化目的蛋白;纯化蛋白用过碘酸钠法进行HRP标记,采用双抗原夹心ELISA法分别评价两种蛋白的检测效果,在此基础上,按比例混合两种抗原,并建立双抗原夹心ELISA检测法。结果构建了Tp0453和TpN47蛋白的原核表达载体,在低温(27℃)和低剂量IPTG(0.1mmol/L)诱导条件下,有效的实现了Tp0453和TpN47蛋白的可溶性表达。采用Ni2+亲和纯化方法成功纯化出了高纯度的Tp0453和TpN47融合蛋白,ELISA检测结果显示Tp0453比TpN47具有更强的反应性,两种蛋白混合,建立的双抗原夹心ELISA检测法通过血清学试验表明具有很好的敏感度和特异性。结论实现了梅毒螺旋体Tp0453和TpN47蛋白快速高效的表达,并结合2种抗原优势,建立了一种高效的梅毒双抗原夹心ELISA检测方法。     

大孔树脂纯化绵茵陈中总有机酸和绿原酸的研究

目的:研究大孔树脂分离纯化绵茵陈中总有机酸和绿原酸的最佳工艺条件。方法:通过对绵茵陈总有机酸和绿原酸在9种大孔树脂上的吸附与解吸附特性的比较,筛选最佳树脂;采用正交试验及单因素考察等方法对该树脂纯化绵茵陈提取液中总有机酸和绿原酸的工艺条件进行优选。结果:以HPD200A型大孔树脂为分离载体,树脂柱径高比为1∶6,样品液浓度为1 g/mL,上柱体积流量为1 BV/h(1 BV=1柱体积),吸附量为生药1.5 g/g树脂,先用3 BV水洗脱除杂,再用2 BV 90%乙醇解吸,过柱后总有机酸和绿原酸的精制度分别为588.74%和567.89%。结论:HPD200A型大孔树脂纯化绵茵陈中总有机酸和绿原酸的工艺简便可靠,可用于规模化生产。     

洁净手术室净化空调系统调试

洁净手术室净化空调系统施工,历经前期净化空调方案的论证,经济效益和费用的评价,方案批准后的深化设计,实施阶段的安装和中间验收,最后到达系统调试和综合性能检测阶段。为把方案、安装阶段的优势转化为合乎规范要求的工程综合性能检测指标,必须对净化空调系统调试工作进行深入策划,制定可靠的路线图,按图索骥,严格执行调试流程规范,才能取得洁净手术室建设的丰硕成果。     

广东菲牛蛭中有效抗凝物质的分离纯化

目的从广东菲牛蛭鲜体中分离纯化有效抗凝物质,并对其生化性质进行测定。方法用水提醇沉、离子交换、反相层析法等分离纯化广东菲牛蛭中的抗凝物质,用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定其蛋白的分子质量,并运用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（MALDI—TOF—MS／MS）进行分析。结果从广东菲牛蛭中分离出得到一种电泳纯的活性多肽,其相对分子质量为19．2kDa。所得菲牛蛭抗凝活性多肽每克蛋白所含单位抗凝活性≥2548000ATU,活性回收率约为53％。结论从广东菲牛蛭鲜体中分离出的活性抗凝多肽对凝血酶具有极强的抑制作用,开发应用前景广阔。