基于准静态同轴探头模型的土壤复介电测量方法

末端开路同轴探头法测量土壤复介电值用于表征土壤含水率具有准确、快捷的优点。针对目前土壤介电同轴探头集总测量模型没有充分考虑探头的参数以及土壤体积对测量结果影响等问题，基于电磁场理论，对末端开路同轴探头建立了准静态数学模型，适用于土壤的复介电常数准确测量。通过全波软件仿真和模型计算结果对比，以无水乙醇介电实测值和理论值对比，验证模型的准确性。采用本文介电测量模型对不同含水率的黄绵土进行测量计算，复介电常数实部与实测土壤含水率二阶多项式拟合决定系数大于0.965，表明本文所提土壤介电测量方法适用于土壤复介电常数和含水率的测量。     

基于qPCR和LAMP技术的马铃薯晚疫病菌快速检测方法

马铃薯晚疫病菌（Phytophthora infestans）能侵染多种茄科植物,它引起的马铃薯晚疫病,是马铃薯生产中的第一大病害。为了开发能在田间快速检测马铃薯晚疫病病原的方法,利用P. infestans T30-4基因组测序数据的contig 1.18131,设计qPCR和LAMP引物,优化扩增条件后得到引物的特异性和灵敏度,最后通过检测田间收获薯块,比较形态学传统方法、qPCR及LAMP的差异。特异性检测结果发现,qPCR和LAMP仅在含有P. infestans DNA模板的体系有阳性扩增,在寄主和其他微生物DNA中均无扩增;在优化的条件下,qPCR和LAMP的检测下限可达1×10 ^-6ng/μL,在有寄主和其他微生物DNA存在的条件下,引物的灵敏度没有显著差异。利用两种快速方法对在大理、丽江及昆明3个地区田间收获薯块上检测发现,qPCR和LAMP方法得到的检出率差异极为不显著（P=0.420）,两种快速检测方法和形态学鉴定方法检出率差异极显著（P=0.009）。在大理、丽江及昆明3个地区的薯块中,两种分子检测方法检出率均比形态学方法高。其中,qPCR检测方法比形态学方法分别提高了12.00%、2.00%、8.70%;LAMP检测方法比形态学方法分别提高了11.30%、2.00%、8.70%。     

一种基于RPA的番茄褪绿病毒检测方法

番茄褪绿病毒Tomato chlorosis virus(ToCV)引起番茄褪绿病毒病,给番茄生产造成严重危害。开发快速准确的检测方法对该病害的防控具有重要意义。利用番茄褪绿病毒外壳蛋白(CP)基因序列,设计特异性引物,建立了ToCV的重组酶聚合酶等温扩增(recombinase polymerase amplification, RPA)检测方法,同时分析了该方法的灵敏度和特异性。结果表明,建立的ToCV-RPA方法在38℃恒温下40 min可从ToCV阳性的番茄样品中扩增出246 bp的特异性条带。扩增时间短,对设备要求低,且与番茄其他病毒无交叉反应,特异性好,灵敏度可达到PCR方法的10倍,适用于ToCV的快速检测。     

多重PCR检测猪瘟病毒、猪细小病毒、猪伪狂犬病病毒

根据猪瘟病毒(CSFV)、猪细小病毒(PPV)和猪伪狂犬病病毒(PRV)3种病原体的基因保守序列，分别设计了与CSFV的E2基因、PPV的VP2基因和PRV的gⅡ基因序列互补的3对引物。用这3对引物对人为混合的样品中的PPV和PRV的DNA模板及CSFV反转录后的cDNA模板进行多重PCR扩增和多重PCR反应奈件的优化，结果同时得到3务与试验设计相符的288bp(CSFV)、575bp(PPV)700bp(PRV)特异性条带；敏感性检测结果表明，该多重PCR可以检测到14．5ng／L的CSFV、27．1pg／L的PPV、31．4ng／L的PRV的核酸模板。     

Compatible measurements of volumetric soil water content using a neutron probe and Diviner 2000 after field calibration

Field calibrations for a neutron probe and a capacitance sensor (Diviner 2000) for measuring the soil water content of a shrinking–swelling clay soil were substantially different from commonly used default values. Using our field calibrations, the two instruments estimated similar changes in the cumulative water content of a soil profile (0–1 m depth) over one growing season.     

强毒小肠结肠耶氏菌生物素标记基因探针的研究

在构建的小肠结肠耶氏菌毒性质粒DNA基因文库pYB1～8与pYP1～6的基础上,筛选出了pYB7和pYP6克隆株.用限制性内切酶Bam HI消化pYB7,Pst消化pYP6,可分离出3.8kb和6.4kb的插入性DNA片段.以这两个基因片段为目的基因,用生物素化dUTP和光敏生物素标记,获得了生物素标记的基因探针.该探针能检出10pg以上的强毒小肠结肠耶氏菌DNA,不与无毒小肠结肠耶氏菌及大肠杆菌、鼠伤寒沙门氏菌、金黄色葡萄球菌等18种对照菌反应,具有高度的特异性和敏感性.pYB7与pYP6探针对不同血清型及来源的小肠结肠耶氏菌检测,其结果与自凝性试验、依钙试验等结果相符;对小肠结肠耶氏菌强毒株与无毒株检定的准确率为100%.     

应用生物素标记的NDV－cDNA探针检测感染尿囊液中NDV－RNA的初步研究

本文应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术从构建的新城疫病毒（ＮＤＶ）ｃＤＮＡ文库中扩增含编码Ｆ糖蛋白前体──Ｆｏ酶切位点序列的３５９ｂｐ的Ｆ蛋白基因ｃＤＮＡ片段。将此３５９ｂｐｃＤＮＡ片段经光敏生物素标记后,即成ＮＤＶ－ｃＤＮＡ探针。该探针能特异性地从感染的尿囊液中检测出ＮＤＶ强毒株和疫苗毒株的基因组ＲＮＡ,而不与ＩＢＤｖ－ｄｓＲＮＡ、ＡＩＢｖ－ｓｓＲＮＡ、ＥＤＳ７６－ｄｓＤＮＡ、ＭＤＶ－ｄｓＤＮＡ,ＦＰＶ－ｄｓＲＮＡ及ＡＩＬＶ－ｄｓＤＮＡ发生交叉杂交反应。试验结果表明：尽管该探钎含有编码Ｆｏ蛋白酶切位点序列的碱基顺序,但它还是不能把ＮＤＶ的强、弱毒株区分开。这说明ＮＤＶ强、弱毒株比区域内的碱基存在着相当大的同源性。不过,此探针对ＮＤＶ来说具有特异性,这就为ＮＤＶ的诊断技术开创了基因水平检测的新途径。     

加热光纤法同步测定土壤水热参数误差分析

土壤水热参数是研究土壤水热传输的基本物理参数。当前热脉冲探针法（HPP）可同步测定土壤水热参数,但该方法仅限于在点尺度下测定。与其具有相同理论基础的加热光纤法（SPHP-DTS）,可将测定尺度增大至田间千米尺度,但其测定精度尚未得到有效验证。为了探知SPHP-DTS法的误差,本研究进行了SPHP-DTS法与HPP法测定土壤水热参数的对比试验。结果表明,以HPP为标准,加热光纤法测定热导率的精度RMSE为0.13 W?m-1?℃-1。SPHP-DTS法测定的热导率显著高于HPP法,主要原因在于加热光纤时产生的温度效应。通过热导率法测定土壤含水率时,在热导率测定误差的影响下,SPHP-DTS法的测定精度明显低于HPP法。SPHP-DTS法测定土壤水热参数的其他误差来源包括光纤与土壤之间多个界面的接触热阻、光纤的温度敏感性、噪音干扰以及温度梯度驱动下的水分迁移。本研究可为SPHP-DTS法提升土壤水热参数测定精度提供理论参考。     

Cloning of p15INK4b related gene CCRG and expression analysis in the renal carcinoma

AIM and METHODS:To analysis the factor that involved in renal carcinogenesis, we used the bait gene AK001518 to screen GenBank. To understand the relationship between cell cycle related gene(CCRG) and p15, we did RT-PCR and Northern Blot experiments. Then we examined CCRG expression level in renal carcinogenesis. RESULTS:Gained a function unknown gene CCRG that was 67% a mino acid identical with the gene AK001518 that was regulated by p15. It was shown that the CCRG mRNA was dramatically decreased when p15 gene was over-expressed. CCRG expression level was much higher in tumor tissues and cells than normal tissues and cells. CONCLUSION:The novel gene CCRG expressed highly in the renal carcinoma, which might play a significant role in the renal carcinogenesis.     

Identification of ALS inhibitor‐resistant Amaranthus biotypes using polymerase chain reaction amplification of specific alleles

Summary Polymerase chain reaction (PCR) amplification of specific alleles (PASA) was adapted as a molecular marker‐based method for the rapid detection of point mutations in Amaranthus retroflexus and Amaranthus rudis leading to ALS inhibitor resistance. Two pairs of primers were designed for the specific amplification of alleles of the ALS gene of susceptible and resistant biotypes. The allele‐specific primer matched the desired allele, but mismatched the different allele at its 3′ end. Differentiation was carried out by comparison of the amplified DNA fragments in gel electrophoresis after PASA‐PCR. In A. rudis, differentiation was possible with one PCR and genomic DNA as probe. A ‘nested’ PCR was necessary for the differentiation of sensitive and resistant A. retroflexus. PASA is useful for the identification of resistant weed biotypes and also as a monitoring tool to map resistance occurrence and distribution. Advantages include the fast and clear separation of those plants with and without mutations at an early stage of development, its easy and consistent performance and quick results compared with existing resistance detection tests. These advantages, when combined with management strategies, enable further activities to reduce herbicide resistance.