星毛冠盖藤乙酸乙酯部位抗三阴乳腺癌的研究

研究星毛冠盖藤乙酸乙酯部位(PTE)对三阴乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响。以MDA-MB-231细胞为研究对象,不同剂量PTE处理,MTT、台盼蓝、TUNEL法分别检测细胞的增殖、凋亡情况,Western blot检测Caspase-3的表达情况。结果显示,PTE对MDA-MB-231的增殖具有剂量依赖的抑制作用;500μg/mL的PTE处理48 h后,PTE组细胞死亡率明显增高;TUNEL染色检测到明亮的绿色荧光颗粒;Western blot检测到明显的Caspase-3激活。由此可见,PTE对MDA-MB-231细胞具有明显抑增殖、促凋亡的作用,其分子机制与Caspase-3的激活有关。     

邻苯二甲酸二乙基己酯对小鼠初级精母细胞氧化应激及凋亡的影响

目的研究邻苯二甲酸二乙基己酯(DEHP)对小鼠初级精母细胞(GC-2 spd)氧化应激及凋亡的影响。方法体外传代培养永生化的GC-2 spd细胞,用二甲基亚砜(DMSO)溶解DEHP,以DMSO浓度为0.1%的细胞孔作为对照组,用DEHP终浓度为50、100和200μmol/L的细胞孔作为低、中、高剂量组染毒24 h。分光光度计法测定GC-2 spd细胞丙二醛(MDA)含量,超氧化物歧化酶(SOD)活力和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力,流式细胞仪检测不同剂量组细胞凋亡情况。结果与对照组比较,DEHP低、中、高剂量染毒组MDA含量依次升高,差异无明显统计学意义(P>0.05);SOD活力在DEHP高剂量染毒组下降,差异有统计学意义(P<0.05);DEHP低、中剂量染毒组GSH-Px活力明显下降,且差异有统计学意义(P<0.05)。DEHP中、高剂量染毒组细胞凋亡明显高于对照组,且差异有统计学意义(P<0.05)。结论 DEHP可通过诱发小鼠生精细胞氧化应激而诱导细胞凋亡。     

可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体在E.coil中的表达、纯化及其生物学活性

目的表达纯化可溶性肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)相关凋亡诱导配体(TNF-related apoptosisinducing ligand,TRAIL)蛋白,并测定其生物学活性。方法利用E.coli中表达C-端带有6×His标签的可溶性TRAIL蛋白,并优化诱导时间(4、6和8 h)和诱导剂IPTG的浓度(0.06、0.125、0.25、0.5、1 mmol/L)。表达产物经Ni亲和层析和离子交换层析纯化后,采用MTT法测定不同浓度TRAIL(终浓度分别为100、200、400 ng/ml)的活性,并检测亲和层析过程中两种洗脱方式(洗脱液4℃留柱过夜后进行洗脱和洗脱液进柱后直接收集流出液)及纯化过程中两次透析的时间(均为24和48 h)对TRAIL活性的影响。结果最佳诱导时间为6 h,最佳IPTG诱导浓度为0.5 mmol/L。表达产物的表达量占菌体总蛋白的20%,相对分子质量为20 000,可与兔抗人TRAIL单克隆抗体发生特异性结合。TRAIL终浓度为100、200和400 ng/ml的实验组的抑制率分别约为36%、53%和73%。亲和层析的两种洗脱方式的TRAIL活性差异无统计学意义(P0.05),透析48 h比透析24 h获得的TRAIL活性显著降低(P0.05)。结论 TRAIL蛋白成功在E.coli中表达,具有抑制肿瘤细胞生长的作用,优化后的TRAIL诱导条件和纯化方法可进一步大量生产高TRAIL蛋白的活性,满足了TRAIL的基础及临床相关研究的要求。     

异甘草素诱导人胶质瘤细胞SHG44自噬及凋亡的实验研究

目的研究异甘草素(ISL)对人胶质瘤细胞SHG44增殖、自噬、凋亡及相关分子信号的影响。方法应用细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测ISL在不同时段、不同浓度下对人胶质瘤细胞SHG44的增殖抑制情况。用流式细胞术Annexin V-IP标记检测ISL(0,20,40,60,80μmol/L)作用于SHG44细胞48 h后细胞凋亡的情况,透射电镜下观测ISL对SHG44细胞内部超微结构的改变,应用免疫荧光染色法观测细胞内部及其周边自噬及凋亡相关蛋白的分布,Western blot检测ISL对SHG44细胞中Caspase-3,Bcl-2以及LC3B等蛋白表达的影响。结果在ISL作用下,SHG44细胞的增殖过程呈现时间及剂量依赖性抑制,ISL(80μmol/L)组在作用72 h后对SHG44细胞的抑制率超过了半数;流式细胞术检测ISL作用SHG44细胞48 h后,细胞凋亡率分别为(1.54±0.85)%,(6.72±2.81)%,(11.82±3.21)%,(16.61±3.79)%,(26.15±3.82)%;透射电镜下可见SHG44细胞内部出现自噬小泡及自噬溶酶体;在荧光显微镜下可见细胞内出现自噬及凋亡相关蛋白的免疫荧光颗粒;Western blot显示ISL作用于SHG44细胞48 h后,LC3-Ⅱ/Ⅰ比值以及Caspase-3的表达呈上升趋势,而Bcl-2表达呈下降趋势。结论 ISL能有效抑制人胶质瘤细胞SHG44的增殖,诱导SHG44细胞发生自噬和凋亡,并且抑制了抗凋亡分子Bcl-2的表达,增加了凋亡相关分子Caspase-3以及自噬相关分子LC3-Ⅱ/Ⅰ的比值。     

188Re诱导肿瘤细胞凋亡的实验研究

采用MTT法，光镜，电镜，流式细胞仪和免疫组化方法研究了^188Re诱导三种肿瘤细胞凋亡的形态学变化，剂量时间效应关系以及凋亡相关基因Bcl-2和Bax在其中的表达情况。结果表明：^188Re对三种肿瘤细胞有明显的杀伤效应，能效导其产生凋亡的形态学变化，并且随着浓度的增大和时间的延长，凋亡率增加，Bcl-24表达减弱，Bax表达增强，二者比值下降;细胞阻滞于G2／M期，三种肿瘤细胞对^188Re的敏感性由高到低依次为PC－3细胞，ER－75－30细胞，A549细胞。     

上海市吴淞工业区大气PM2.5水溶成分的元素分析及细胞毒性研究

通过ICP-MS测定了上海市吴淞地区大气PM2.5水溶成分金属元素含量,通过四唑盐(MTT)测定细胞存活率,通过超氧化歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)两个指标测定细胞氧化损伤,琼脂糖凝胶电泳测定细胞内DNA损伤,流式细胞仪(Flow cytometry)检测细胞凋亡和周期等实验研究了大气PM2.5水溶成分的细胞毒性.实验结果表明:PM2.5可溶成分中Zn元素含量最高,PM2.5在一定浓度范围内能导致细胞死亡,引起细胞的氧化损伤,影响DNA的复制,阻碍细胞增殖,但没有诱导细胞凋亡.PM2.5中可溶金属离子对细胞毒性表现为联合作用.     

浓缩~(235)U诱发免疫细胞凋亡的电镜和琼脂糖凝胶电泳研究

研究了浓缩235U内照射诱发人淋巴细胞白血病细胞株Molt－4细胞和巨噬细胞株Ana－1细胞的细胞调亡。估算了浓缩235U在不同阶段培养细胞中的辐射累积吸收剂量。通过电镜对免疫细胞的形态观察，发现Molt－4和Ana－1细胞在受235U内照射作用下可呈现核染质边聚，DNA链断裂和膜包裹的凋亡小体形成。对Molt－4和Ana－1细胞的DNA抽提，进行DNA琼脂糖凝胶电泳也显示出阶梯状条带形成的细胞调亡特征。从而证实了浓缩235U内照射可导致免疫细胞Molt－4和Ana－1细胞的凋亡发生。     

热休克蛋白70与神经系统疾病的相关性的研究进展

热休克蛋白70是在高温或应激作用下被表达出来,在细胞内发挥作用的一种高度保守的分子伴侣蛋白,大量的研究发现热休克蛋白70在炎症因子的表达,抑制蛋白质聚集,抑制细胞凋亡,肿瘤免疫等方面发挥作用,与神经系统疾病的发病机制关系密切,目前发现热休克蛋白70与脑血管疾病,阿尔兹海默症,癫痫,帕金森病等神经系统疾病具有相关性。本文就热休克蛋白70与神经系统疾病的相关性进行简述。     

表达重组人可溶性TRAIL的毕氏酵母发酵工艺

目的优化rhsTRAIL毕氏酵母工程菌在5L发酵罐中的发酵表达工艺参数。方法研究培养基种类、细胞密度、甘油含量、pH值、甲醇浓度、甲醇流加速率及诱导时间等参数对工程菌生长及目的蛋白表达的影响,并用电镜观察其诱导肿瘤细胞凋亡特征。结果在无机盐培养基中,按10%接种A600=8～12的种菌后,24h酵母菌增殖至A600=76;甘油含量为1%时,菌体生长速度快(A600=160);培养基pH值5.0,甲醇终浓度为1%时,诱导96h表达量最高达到120mg/L,并具有诱导肿瘤细胞凋亡特征。结论rhsTRAIL毕氏酵母的发酵工艺参数为无机盐培养基,pH值5.0,接种10%A600=8～12的种菌,甘油含量1%,甲醇终浓度1%,诱导96h。     

外源紫杉醇作用下南方红豆杉细胞凋亡及其动力学研究

利用光学显微照相技术、细胞总DNA琼脂糖凝胶电泳和TUNEL标记等手段 ,研究了外源紫杉醇(Taxol)作用下南方红豆杉细胞的凋亡及其动力学。研究结果表明 ,外源紫杉醇能显著提高南方红豆杉细胞凋亡的速率和发生率 ,表明高浓度紫杉醇不利于细胞的生长。凋亡动力学研究对指导大规模植物细胞培养生产紫杉醇具有重要意义