漆酶LAC表达与鸭梨果心褐变的关系

【目的】探究在不同成熟度和降温贮藏方式下,LAC表达模式与鸭梨果心褐变的关系,为进一步解析鸭梨果心褐变机制提供理论依据。【方法】以鸭梨作为材料,通过对不同成熟度（早采、中采和晚采）的鸭梨进行急速降温（急降）和缓慢降温（缓降）处理,观察贮藏期间鸭梨果心褐变情况,测定漆酶（Laccase,LAC）活性及其基因LAC的相对表达量,研究LAC在鸭梨果心褐变过程中的参与作用。【结果】冷藏60 d时,晚采鸭梨出现褐变,晚采缓降处理的鸭梨果心褐变指数为0.32,是同期急速降温处理的2.56倍;在贮藏90 d时,中采缓降处理的褐变指数是0.24,中采急降处理的褐变指数仅为0.01。各个处理组在贮藏期间LAC活性多数表现为先逐渐升高后下降的趋势,晚采的果实在贮藏60 d时出现活性高峰,褐变发生;早采和中采鸭梨LAC活性高峰均在90 d时出现,褐变程度低于晚采鸭梨。在贮藏期间,缓慢降温处理的LAC活性高于急速降温处理。鸭梨LAC14和LAC7表达量呈先上升后下降的趋势,LAC6表现为先下降后上升再降低的变化趋势;中采、晚采鸭梨在贮藏60 d时,LAC14和LAC7表达量最高。【结论】与缓慢降温相比,急速降温处理减少了鸭梨果心褐变的发生。在整个贮藏期间,LAC活性呈先上升后下降然后又上升的趋势,其峰值时的活性高低次序为：晚采>中采>早采,这与果心褐变趋势一致;LAC在鸭梨果心褐变过程中上调表达。相比缓慢降温处理,急速降温处理具有较低的LAC7、LAC14和LAC6表达量。急速降温结合适时采收能够抑制LAC的上调表达,减少鸭梨果心褐变发生。     

漆树酶在漆酚树脂上的固定化研究

介绍了漆酚树脂吸附金属离子后对漆树酶的固定化方法，比较了Ｆｅ＾３＋和Ａｌ＾３＋、漆酚树脂和漆酚－水杨酸接枝树脂对漆树酶的固定化结果显示，漆酚－水杨酸－Ａｌ螯合树脂对漆树酶的固定化活力最高，测定了溶液ＰＨ，环境温度对固定化漆树酶活性的航固定化漆酶的重作用性。另外，测定了固定化漆树酶的米氏常数，Ｋｍ＝４．９×１０＾－３，并讨论了Ｋｍ小于天然漆树酶的米氏常数的原因。     

辣椒疫霉漆酶基因Pclac3克隆表达

辣椒疫霉是一种侵染性植物病原,能引起多种茄科及葫芦科植物的病害。利用同源克隆法从辣椒疫霉基因组内克隆了漆酶基因Pclac3,该基因全长1 881个核苷酸,编码626个氨基酸,与已知的真菌漆酶基因具有较高的同源性,并且具备漆酶基因的保守区域。利用PCR将该基因克隆于pPIC9K载体,并转化于毕赤酵母GS115,经过1%甲醇诱导表达获得其异源表达产物。将表达产物进行SDS-PAGE检测,获得分子量大约为90 kDa的特异蛋白。利用ABTS法对Pclac3的表达产物粗酶液进行酶活性分析发现,其活性在第11天时最大,达到45 U/mL。这为研究辣椒疫霉漆酶基因家族及探索卵菌漆酶生物活性及其潜在的应用提供了理论依据。     

Triton X-100对漆酶处理苯酚的影响

研究了Triton X-100对漆酶氧化去除水溶液中苯酚的作用.苯酚和漆酶浓度分别是50 mg/L和 0.05 mg/mL时，提高苯酚去除率的Triton X-100最佳浓度是155 μM．Triton X-100的浓度从31~930 μM时漆酶活性随之增长，在930 μM Triton X-100存在时有最大增值17%.苯酚的初始浓度分别为50, 100, 200, 400和600 mg/L 时，155 μM Triton X-100作用下6 h后，苯酚去除率分别是对照组的1.2, 1.6, 3.4, 4.5和5.7倍.结果表明Triton X-100可以作为水处理或修复过程的添加剂来提高由漆酶催化的苯酚去除率.     

漆酶催化活性中心结构及其特性研究进展

漆酶是一种多酚氧化酶，参与木质素的降解或聚合，具有氧化木质素的能力，但不同来源的漆酶其氧化降解木质素的能力相差很大。漆酶的结构决定了漆酶的特性，因而也就决定了漆酶氧化降解木质素的能力。本文综述了近10年来漆酶分子催化活性中心的结构与功能及其特性的研究进展。     

漆树酶的固定化——Ⅰ聚丙烯酰胺包埋法固定化漆树酶

漆树酶(BC.1.10.3.2)从生漆中提取后,用聚丙烯酰胺包埋固定化。研究了固定化的条件,以及固定化漆树酶的重复使用性和耐热性,测定了它的米氏常数,并与天然漆树酶进行了比较。固定化漆树酶的活力回收可达30％;重复使用十多次后其活性还保留约80％;在干燥状态下,固定化漆树酶非常耐热。     

漆树酶的固定化——Ⅳ.固定化漆树酶催化陈漆复活制备“超级生漆膜”

研究了两种固定化漆树酶(聚丙烯酰胺包埋漆树酶和ABSE-交联琼脂共价偶联漆树酶)催化陈漆漆酚氧化聚合,实现了“陈漆复活”。首次制备了室温自干的“超级生漆膜”。它的8项物理性能指标:流平性、干燥不受湿度的影响性、实干速度、色泽、光泽值、冲击强度、柔韧性(弹性)和附着力在不同程度上均超过了一般生漆膜。这种固定化漆树酶催化漆酚氧化聚合的技术路线使本来纠缠在一起的复杂的生漆成膜过程分解为比较单一的漆酚氧化、聚合过程和线性聚合物交联过程,因而有利于彻底弄清生漆成膜的反应机理,也有利于阐明天然生漆各组分如胶质(树胶质)等对生漆成膜的贡献。     

白腐菌糙皮侧尔漆酶性质及其对蒽醌染料脱色性能的研究

白腐菌糙皮侧尔(Pleurotus ostreatus strain 3.42)分泌胞外漆酶，但未发现分泌木质素过氧化物酶(LiP)和锰过氧化物酶(MnP)、每升反应液以0．5mmol 2，2′-连氮-二(3-乙基苯并噻唑-6-磺酸)(ABTS)和0．1mmol的Cu^2 为诱导剂可明显提高漆酶酶活，酶活分别可达1000和800U／mL。与其它真菌漆酶相比，该酶最适反应pH值为3．5，在pH值4．0～6．0之间酶活性稳定；最适反应温度为65℃，在醋酸缓冲液(pH值5．0)中，反应温度低于50℃时，漆酶非常稳定；该酶对对-甲氧基酚的氧化速度要快于邻-甲氧基酚。叠氮化钠对该漆酶有强烈的抑制作用。蒽醌染料活性艳蓝KN-R(RBBR)可被该漆酶(30U／mL)直接脱色，12h脱色率为70％；添加小分子的介体物质ABTS(5μmol／L)，可使染料完全脱色。     

漆酶处理条件对枫香湿法纤维板强度的影响

为消除人造板的游离甲醛污染,开发一种无胶人造板生产工艺,以漆酶和枫香纤维为原料,进行纤维板的工艺研究.以湿法生产纤维板,并检测板材的内结合强度(IB),结果表明:漆酶处理纤维板的IB值高于对照板;处理温度、时间和酶用量对纤维板的IB均有显著影响;最佳处理条件为pH 3.0,50 ℃,2 h,20 U/g纤维.     

漆酶处理对未漂硫酸盐浆抗张强度和纤维表面的影响

探讨了漆酶处理对未漂硫酸盐浆抗张强度的影响,研究了漆酶处理的主要工艺参数对纸页湿抗张强度的影响;并采用扫描电镜(SEM)对漆酶处理前后纤维表面微细结构的变化进行了研究。结果表明,漆酶可以改善纸浆的湿抗张强度,但对于抗张强度不起作用;提高纸浆湿强度的最佳酶促反应条件为:酶用量16U(以每克绝干浆计),温度45℃,pH值4.5,处理时间2h。扫描电镜分析表明,漆酶处理使得纤维表面变得粗糙,纤维之间产生了黏结性,湿强度得以提高。