载氧血红蛋白纯化工艺研究

目的改善心脑血管缺氧载氧药物是一种创新药物。由于它半径比红细胞小400~1 000倍,易于通过毛细血管,给缺血组织及时供氧,迅速缓解或纠正缺氧状态,达到治疗抢救目的。血红蛋白的纯化工艺是载氧药物研制的重要工艺步骤。方法本研究建立了一套通过热敏法分离纯化人脐带血血红蛋白的工艺以及较为完善的纯化血红蛋白质量检测指标。结果与现有的纯化方式相比,热敏法操作简便,仪器设备造价低廉,纯化与病毒灭活同时进行,得到的纯化产品损失少,纯度高,各项理化指标达到国际水平。结论本工艺适用于规模制备纯化血红蛋白,为进一步研制治疗心脑血管缺氧载氧药物创造了有利条件。     

Purification of rabbit, rat and mouse protein C with the use of monoclonal antibody to human protein C, PC01

Ca(++)-dependent monoclonal antibody specific to gamma-carboxyglutamic acid (Gla) domain of protein C was produced. It did not cross-react to the other vitamin K-dependent plasma proteins but to protein C of the other species. Using this monoclonal antibody, PC01, rabbit (170 micrograms), rat (60 micrograms) and mouse (40 micrograms) protein Cs were isolated from 100 ml of their plasma by affinity chromatography. All of these protein Cs were two chain form linked by disulfide bond as well as human protein C and activated by thrombin-thrombomodulin complex. Rat and mouse protein Cs showed similar characters to human protein C. On the other hand rabbit protein C had different M(r) of heavy and light chains and showed lower anticoagulant activity compared with human protein C.     

大鼠骨髓巨噬细胞的分离,纯化,培养以及鉴定

目的：为深入研究骨髓巨噬细胞的生物学功能，探索一种简便的骨髓巨噬细胞的分离，纯化和培养的方法。方法：分离获取大鼠骨髓细胞，在60％DMEM培养液，20％马血清，20％(v／v)L929培养上清的诱导条件下进行体外贴壁培养，6～7天时获得纯度较高的贴壁细胞。采用倒置显微镜下观察生活状态、Wrights染色光镜观察、电子显微镜观察检测贴壁细胞形态学；酸性磷酸酶及非特异性酯酶染色测定细胞内酶的表达；吞噬鸡红细胞及墨汁颗粒实验检测其吞噬功能；免疫细胞化学染色观察细胞表面标志等生物学技术鉴定培养的贴壁细胞性质。结果：获得高纯度的巨噬细胞，且具有良好的吞噬功能，并且具备巨噬细胞的形态特征，特有的水解酶类及特有的表面标志-CD68。结论：本法是一种简易实用的体外分离、纯化、培养骨髓巨噬细胞的方法。     

猪肾碱性磷酸酶的提纯及性质研究

目的：从猪肾中提取碱性磷酸酶(ALP)，并对其能否作为参考品进行研究。方法：从猪肾皮质中分离刷状缘微绒毛膜，用正丁醇溶解膜结合的酶，经硫酸铵沉淀，DEAE-Sephacel、ConA-Sepharose、Sephadex G-200及抗γ-谷酰基转移酶(GGT)免疫亲和层析提纯ALP。结果：提纯的ALP比活达402kU／g蛋白，几乎不含杂酶(未检出ALT、AST、ChE、AMY、CK、LDH，GGT仅含2U／780U ALP)。其对底物4-硝基磷酸酚(4-NPP)的Km值为1．35mmol／L，最适pH值为10．40。结论：提纯的猪肾ALP与人血清中的ALP酶动力学特性非常相似，为进一步研制ALP参考品奠定了基础。     

大鼠肝脏Kupffer细胞的分离、纯化

目的建立简单、有效而稳定的大鼠肝脏Kupffer细胞分离、纯化的实验方法。方法①大鼠肝脏的胶原酶离体灌注；②Percoll液不连续梯度离心分离Kupffer细胞；③选择性贴壁纯化Kupffer细胞；④吞噬墨汁实验、DAB染色，光镜、电镜下观察鉴定Kupffer细胞。结果最终获得的大鼠肝脏Kupffer细胞活性〉90％，纯度为95％，光镜下Kupffer细胞具有较强的贴壁及吞噬碳粒能力，DAB染色呈黄色煎蛋样结构；新分离的Kupffer细胞呈圆形，形态大小一致；2d后，细胞发生伸展，呈多角形或星形。电镜下观察可见典型特点：有伪足及杯口状改变，有丰富的溶酶体和吞噬体。结论本实验建立的大鼠肝脏Kupffer细胞的分离培养方法效果稳定，同时培养的细胞具有良好的生物学性状。     

中空纤维超滤膜净化水质的效果评价

对中空纤维超滤膜净化水质效果的检测和评价结果显示，它能有效的滤除水中细菌，改善水质的感官性状，去除部分水中有机物，降低水中致突变活性物质的含量。提示它在预防水的生物性污染，改善水质感官性状及控制有机物污染等方面具有较高的使用价值。     

人心肌肌钙蛋白T的提取、纯化及鉴定研究

目的 :探究一种简便易行的人心肌肌钙蛋白T(cTnT)的提纯方法并进行鉴定。　方法 :采用匀浆、离心、70℃加热、冰浴、饱和硫酸铵盐析、透析、DEAE 纤维素层析等方法提纯cTnT ,并进行鉴定和免疫活性检测。　结果 :1 0 0g心肌组织中获得cTnT 2 1 .35 6mg ,纯度最高达 91 .7%。　结论 :建立的方法能成功提取纯度较高 ,且具有免疫活性的人心肌cTnT ,为建立适用于临床的cTnT检测方法奠定基础     

Expression and Purification of the Major Outer Membrane Protein of Chlamydia Trachomatis in Prokaryotic Cell

Chlamydiatrachomatis(C.trachomatis)isanobligate intracellularbacterialpathogen.Ocularinfectionwith C.trachomatisserovarsA,B,BaandCleadstotracho ma,aleadingcauseofpreventableblindnessinmanyde velopingcountries[1].Urogenital tractinfectionwithC. trachomat…     

p53蛋白的免疫亲和层析纯化

建立了ｐ５３单克隆抗体ｐＡｂ１８０１的免疫亲和层极法纯化ｐ５３蛋白，所纯化的ｐ５３蛋白经Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔ（ＥＣＬ法）检测证明：用此法从ｐ５３阳性的ＳＷ４８０细胞中分离到ｐ５３蛋白。银染显示ｐＨ２．０甘氨酸缓冲液比ｐＨ２．８的甘氨酸缓冲液洗脱效果好，这种方法的建立将为分离肿瘤细胞中引起ｐ５３蛋白功能失活和研究肿瘤发生机制提供一种有效途径。     

人血清载脂蛋白H的纯化与鉴定

为了研究载脂蛋白H（apoH)与疾病的关系，分别用HClO4,(NH4)2SO4沉淀、DEAE－纤维素离子交换层析，从人血清中纯化了载脂蛋白Ho用测定分子量，分析氨基酸组成和N－端氨基酸测序三个方面进行鉴定。用SDS－PAGE测得其相对分子量对54000。用高效液相色谱测定其中15种氨基酸的相对含量（mol/10^3mol残基）如下：Asp119.8,Glu108,Thr94.8,Ser78.6,Phe64.9,Gly1008,Ala57.2,Val57.2,Met10.6,Ile50.3,Leu77.1,Tyr31.9,His15.2,L-ys81.4,Arg39.4;d PE-ABI公司生产的475A型气相蛋白质测序仪上测得其N端10个氨基酸残基顺序如下：NH2－Gly-Arg-Cys-Pro-Asp-Asp-Leu。纯化得到的apoH与肝素有高的亲和性，还能与乙肝表面抗原结合。纯化apoH的方法相对比较简单，能达到测序的要求。