人表皮细胞分离培养最佳条件的选择

目的 确定表皮细胞分离培养的最佳条件，为进一步将其作为皮肤组织工程种子细胞奠定基础。方法 采用组织块法培养表皮细胞；分别以胰蛋白酶和分散酶分离表皮细胞，有血清培养法和无血清培养法进行表皮细胞的培养，并以克隆形成试验检测细胞存活和生长情况。结果 （1）表皮细胞以分散分离可量在多数基底细胞，且成纤维细胞污染少，而胰蛋白酶得到的表皮细胞少，且混杂有大量的成纤维细胞。（2）组织块法可观察到表皮细胞生长，但成纤维细胞污染严重，且不易得到成片生长的表皮。（3）有血清培养法表皮细胞需在3T3细胞的滋养层上生长，存在3T3细胞污染的可能。（4）无血清培养方法简便易行，更有利于表皮细胞的生长。结论 采用无血清培养法培养表皮细胞条件的最终确定，为进行相关的研究，尤其是皮肤组织工程的研究奠定了基础。     

电磁脉冲对兔眼晶状体辐射损伤的研究

目的探讨电磁脉冲(EMP)对兔眼晶状体的损伤作用.方法6×104V/m场强的EMP重复照射青紫蓝兔5次,于照后不同时间应用裂隙灯、光镜、激光扫描共聚焦显微镜和图像分析技术对兔眼晶状体辐射损伤进行检测.结果EMP辐射后30 d兔晶状体上皮细胞数目减少,胞核深染、固缩,AgNOR和DNA含量下降.照后90d晶状体上皮细胞增生,AgNOR和DNA含量升高,晶状体后囊水肿、空泡形成,白内障发生.结论高场强EMP辐射可导致晶状体损伤及白内障发生,辐射引起上皮细胞增殖异常是白内障发生的重要原因.     

单纯和放射复合伤伤口愈合中外周血T淋巴细胞亚群的变化及其与愈合延迟的关系

目的研究放射复合伤口愈合中外周血T淋巴细胞亚群的变化规律及其与愈合延迟的关系.方法用碱磷酶免疫组织化学方法检测T淋巴细胞亚群.结果伤口区病理形态学观察表明,大剂量局部照射后能导致伤口愈合延迟;照射后白细胞数出现下降,伤后3～5d降低较为明显,显著低于单纯伤口组;伤后两组动物外周血T淋巴细胞及其亚群均出现降低,然而照射组始终低于单伤组,至伤后28d仍然有显著性差别.结论照射后外周血T淋巴细胞及其亚群的降低和白细胞数的下降是辐射延迟伤口愈合的重要原因     

照射复合创伤愈合伤口成纤维细胞TGFβ1、TGFβR1蛋白及TGFβ1mRNA的表达与意义

目的：探讨局部照射对创伤愈合过程中伤口（Fb)TGFβ1及TGFβR1表达的影响及意义。方法：将132只Wistar大鼠分为单纯创伤组（对照组）和照射复合创伤组（照射组），用免疫组织化学，原位杂交和图像分析方法检测两组伤口愈合过程中伤后1－60d各时间点伤口成纤维细胞中TGFβ、TGFβR1蛋白及TGFβ1mRNA表达的变化规律，结果：单纯且口成纤维细胞TGFβ1、TGFβR1表达有明显的时相性，伤后2－21d可见表达，10d为表达高峰，照射复合创伤组其表达减弱，且表达时相延长，伤后28d仍有表达，结论：照射抑制伤口成纤维细胞内源性TGFβ1和TGFβR1的表达，表明照射使成纤维细胞自分泌TGFβ1功能减弱并对外源性TGFβ1的反应性减弱。     

高功率微波辐照对心肌细胞和心脏间质细胞生存能力和细胞活力的影响

目的：研究高功率微波(high power microwave，HPM)对心肌细胞和心脏间质细胞生存能力和细胞活性的影响。方法：实验选用出生后1～3d的二级Wistar大鼠，体外培养Wistar大鼠乳鼠心肌细胞和心脏间质细胞，于HPM辐照后，用流式细胞仪检测细胞凋亡和坏死；用MTT实验测定细胞活力。结果：HPM明显影响心肌细胞和间质细胞功能和形态结构，辐照后细胞活力降低，凋亡和坏死。辐照后6h，心肌细胞和间质细胞凋亡率分别为(36．76&;#177;5．12)％和(42．38&;#177;6．0)％，坏死率分别为(34．14&;#177;6．5)％和(22．98&;#177;7．4)％，与对照组相比，有显著的统计学意义(P&;lt;0．001)。结论：心脏是微波辐照的靶器官之一，HPM可对心肌细胞和间质细胞功能和形态产生明显影响。结果提示在探讨HPM对心脏损伤时，应同时关注对心脏间质细胞的影响。     

碱性成纤维细胞生长因子及bFGFR—3在皮肤溃疡组织中的表达及对溃疡形成的影响

目的 研究碱性成纤维细胞生长因子（bFGF)及bFGFR-3在急性放射性皮肤溃疡组织中的表达及对溃疡形成的影响。方法 采用Wistar大鼠，以γ射线局部照射法建立皮肤溃疡动物模型，以手术法建立皮肤伤口模型，采用免疫组化、原位杂交等方法检测伤口及皮肤溃疡组织中bFGF及bFGFR-3的转录和表达水平。结果 皮肤受照区多种细胞中bFGF及bFGF-3的表达水平均较正常皮肤组织有所增强，但与单纯伤口组比较，溃疡组织中两的转录和表达水平明显降低。结论 辐射诱导的皮肤溃疡组织中bFGF及bFGFR-3的表达水平降低可能与溃疡发生及难愈合的分子机制相关。     

高功率微波对原代培养心肌细胞的影响

目的：观察高功率微波(high Power microwave，HPM)对心肌细胞的影响及细胞内钙高于浓度的变化，探讨HPM对心肌细胞损伤的发生机制。方法：以功率密度950mW／cm^2的HPM辐照心肌细胞后，用荧光染料Fluo—3／AM负载，于激光扫描共聚焦显微镜下观察心肌细胞形态和[Ca^2 ]i的变化；用FITC—膜联蛋白(annexin)V／PI双染色法，于流式细胞仪检测心肌细胞的坏死和凋亡。结果：HPM辐照后，细胞内钙高于浓度明显降低，与对照组相比差异显著(P＜0．01)。心肌细胞发生坏死和凋亡，与对照组相比差异显著(P＜0.01)。结论：HPM辐照可引起心肌细胞[Ca^2 ]i明显降低，提示HPM辐照可引起心肌细胞膜的损伤，从而造成[Ca^2 ]i的大量漏出和细胞的死亡。     

放射复合伤口愈合中外周血淋巴细胞凋亡及其与愈合延迟的关系

为研究放射复合伤口愈合中外周血淋巴细胞凋亡规律并探讨其与愈合延迟的关系，将120只大鼠随机分为单纯创伤组与创伤复合照射组，用原位末端标记（TUNEL）方法检测细胞凋亡，碱磷酶免疫组织化学方法检测Bax,Bcl-2蛋白表达，结果发现，创伤复合照射组动物白细胞数出现下降，伤后3天降至最低，伤后5天仍显著低于单纯创伤组；伤后两组动物中血淋巴细胞凋亡率均升高，但创伤照射组凋亡率始终高于单纯创伤组；伤后不同时间淋巴细胞Bax蛋白出现升高，创伤照射组明显高于单纯创伤组，而Bcl-2呈现相反的变化趋势，该结果提示，照射后外周血白细胞数的降低和淋巴细胞凋亡的增加是辐射延迟伤口愈合的重要原因，Bax和Bcl-2蛋白参与了淋巴细胞凋亡的调控。     

不同放疗方案对大鼠伤口瘢痕愈合影响的病理研究

目的：研究3种不同放疗方案对于大鼠伤口瘢痕愈合过程的影响，为临床瘢痕放疗采取更加合理的治疗方案提供实验依据。方法：大鼠外科切口法制备动物模型，直线加速器照射，采用宏观、光镜(观察胶原纤维)及免疫组化(检测TGF-β1表达的变化)等方法，动态观察3种放疗方案对于大鼠创伤愈合影响的病理变化过程。结果：各照射组创面愈合均延迟，胶原纤维含量及组织中TGF-β1的表达降低，300cGy(单次剂量300cGy，1／d，连续照射5次)照射方案组效果较好：结论：直线加速器放射治疗影响TGF-β1表达和胶原形成的效果与照射剂量有关，小剂量分次照射的效果优于大剂量照射的效果。     

急性放射性皮肤溃疡形成早期应用生物生长因子的意义

目的 探讨急性放射性皮肤溃疡形成早期b-FGF、VEGF及其受体的表达和意义。方法 以50Gy^60Coγ射线单次局部照射建立急性放射性皮肤溃疡动物模型，以手术方法建立单纯皮肤伤口动物模型，采用免疫组化、原位杂交等方法检测伤口及溃疡组织内b-FGF、VEGP及其受体的表达。结果 创伤组织后5－10d，肉芽组织内b-FGF、VEGF表达呈强阳性；照射后21－28d，放射性溃疡肉芽组织内b-FGF、VEGF表达呈阳性，但较创伤后5－10d明显减弱。结论 辐射诱导的b-FGF、VEGF表达减弱与急性放射性皮肤溃疡愈合延迟有关。