MicroRNAs 调控肺癌发生发展的研究进展

MicroRNAs( miRNAs)为小非编码单链RNA片段,约22 ～ 24个核苷酸长度,通过与绑定的mRNA3'端非翻译区的碱基配对来调控mRNAs的翻译和降解[1].MicroRNAs可以通过同一通道调控多个目标而放大其生物学效应,一个miRNAs可以作用于上千个mRNAs,因此,即使相对较小的miRNAs表达的改变即可产生重要的生物学效应[2].MicroRNAs作为一种重要的生物分子,对细胞的生长、分化、增殖、细胞凋亡等具有重要的调控作用[3].     

结核性胸膜炎胸液T淋巴细胞亚群、黏附分子变化分析

目的回顾性分析结核性胸膜炎时胸膜腔局部的免疫反应和炎症状态。方法利用单克隆抗体、采用流式细胞仪测定35例结核性胸膜炎患者外周血和胸液中表面标记CD3、CD4、CD8I、CAM-1、23、、VCAM-1的淋巴细胞、进行比较。结果胸液中CD3、CD4类淋巴细胞及亚群CD4/CD8比值明显高于外周血,而CD8淋巴细胞则明显低于外周血。黏附分子ICAM-12、3、、VCAM-1在外周血和胸液中淋巴细胞表面表达比例并无差异。黏附分子和T淋巴细胞亚群的以上分布情况在病程不同的患者中无差异性。结论结核性胸膜炎胸腔积液中以CD4淋巴细胞反应为主,而淋巴细胞表面黏附分子表达则无明显变化。     

靶向血管新生肽修饰的氧化铁纳米粒对荷瘤裸鼠磁热疗的研究

目的:制备一种具有靶向新生血管特点的葡聚糖包覆超顺磁性氧化铁纳米粒(superparamagnetic iron oxide nanoparticles,SPIONs),观察其与人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells, HUVECs)的亲和力以及对肿瘤组织的靶向结合能力,观察在外加交变电场条件下对荷瘤裸鼠进行肿瘤局部磁热疗的效果.方法:采用化学共沉淀法制备葡聚糖包覆的SPIONs,并将其共价偶联靶向血管新生肽RGD10,命名为RGD-SPIONs.电子显微镜下观察RGD-SPIONs的形态,纳米粒度分析仪检测其大小,原子吸收分光光度计法检测铁含量,与细胞和组织结合后利用普鲁士蓝法进行铁染色鉴定.在外加交变电场的条件下,观察RGD-SPIONs对HUVECs的热杀伤作用,以及静脉注射后对荷瘤裸鼠进行肿瘤局部磁热疗的效果.结果:RGD-SPIONs形态近似圆形,直径为30～40 nm,核心铁颗粒直径为8～10 nm,铁含量为(1.71±0.16) g/L.SPIONs利用RGD肽与整合素的亲和力结合在HUVECs表面,其结合率为(54.4±8.2)%,用交变电场处理后,显示有(38.4±9.8)% HUVECs发生凋亡.小鼠肿瘤冰冻组织切片观察发现,RGD-SPIONs与肿瘤组织有较好的亲和力.局部热疗后荷瘤小鼠的抑瘤率为54.8%,与对照比较,差异有统计学意义(P<0.05).结论:RGD-SPIONs在大小和性能上符合热疗要求,与HUVECs有较好的亲和力,具有肿瘤组织靶向结合能力,局部热疗后对肿瘤生长具有一定的抑制作用.     

靶向肺癌的紫杉醇长循环脂质体抑瘤作用研究

目的:构建靶向肺癌的紫杉醇长循环纳米脂质体,改善紫杉醇的体内分布,提高其安全性和抑瘤作用。方法:采用固相合成法合成精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(arginine-glycine-aspartic acid,RGD)-6-氨基己酸(ε-amino hexanoic acid,EACA)臂-棕榈酸(palmitate,Pal)复合物(RGD-EACA-Pal)。采用薄膜超声分散法制备空间稳定性紫杉醇脂质体(sterically stabilized liposome of paclitaxel,SSL-PTX)和主动靶向肺癌的空间稳定性紫杉醇脂质体(active lung cancer-targeting sterically stabilized liposome of paclitaxel,T-SSL-PTX),并测定其包封率和物理性状。构建肺腺癌细胞A549的荷瘤裸鼠模型,分别尾静脉注射紫杉醇注射液(商品名为泰素)、SSL-PTX和T-SSL-PTX,分析它们在体内的药代动力学、组织分布及抑瘤作用。另外,分别将昆明小鼠尾静脉注射泰素、SSL-PTX和T-SSL-PTX,观察各药物的最大耐受量(maximum tolerance dose,MTD)。结果:成功构建主动靶向肺癌组织的紫杉醇长循环纳米脂质体,包封率为95%以上,透射电子显微镜下观察其外观基本呈圆整状且均匀分散,SSL-PTX与T-SSL-PTX的粒径分别为(83.4±36.7)nm和(94.7±41.2)nm。药物动力学结果表明,紫杉醇脂质体剂型相比泰素有较好的长循环作用,且T-SSL-PTX和SSL-PTX的药代动力学参数无明显差异。组织分布检测显示,T-SSL-PTX的肿瘤组织靶向效率较SSL-PTX及泰素均有提高,而其他器官中药物分布相对降低。紫杉醇脂质体2个剂型的最大耐受量均高于泰素。体内抑瘤实验结果显示,以相同的紫杉醇剂量给药,T-SSL-PTX相比SSL-PTX及泰素,其抑瘤作用更明显(P<0.05);且T-SSL-PTX以低剂量给药或延长给药间隔,均能达到优于SSL-PTX及泰素的抑瘤作用。结论:本研究构建的靶向肺癌的紫杉醇长循环纳米脂质体能改善紫杉醇传统剂型的药物动力学和组织分布,提高了紫杉醇在体内的安全性和抑瘤作用。     

肺癌单抗的^99mTc直接标记及其生物分布研究

本文从还原剂ＳｎＣｌ３用量，反应体系ｐＨ值，ＭｃＡｂ使用浓度等方面研究了＾５５ｍＴｃ直接法标记单克隆抗体的最佳条件，并探讨了ＶｉｔＣ对标记反应的影响。β－ＭＥ法的单抗，三氯乙酸沉淀法测定标记率，上行纸层析法测定标记产物胶体含量。结果表明，＾９０ｍＴｃ直接标记中还原剂ＳｎＣｌ２浓度以０．０１－０．０４ｍｇ／ｍｌ为宜，反应最适ｐＨ值在５．６－６．８，ＭｃＡｂ最低使用浓度应为５００μｈ／ｍｌ以上，适量Ｖ     

大鼠颅脑外伤后胰岛素与胰岛素受体的变化

目的：探讨颅脑外伤不同伤情与伤后不同时间胰岛素和胰岛素受体结合率的变化规律。方法：雄性ＳＤ大鼠８０只，随机分为轻、中、重型颅脑伤及对照组４组，液压致伤。分别在伤后６，２４，７２ｈ处死动物，测定血液中胰岛素和红细胞膜上胰岛素受体的变化。结果：轻型和中型脑伤组红细胞胰岛素受体结合率均升高，但在重型颅脑伤大鼠，胰岛素受体结合率反而显著下降。全部颅脑伤大鼠的血液红细胞胰岛素受体结合率，在伤后６和２４ｈ均非     

吉非替尼获得性耐药细胞株对不同化疗药物的敏感性分析

目的 探讨吉非替尼获得性耐药细胞株对不同化疗药物的敏感性,为分子靶向治疗失败的患者选择化疗方案提供临床前的依据.方法 体外培养人肺腺癌细胞株PC9和吉非替尼获得性耐药株PC9/G,采用二苯基溴化四氮唑蓝(MTT)法测定PC9和PCg/G细胞对不同药物的敏感性以及细胞的增殖抑制率;采用流式细胞仪检测药物对PC9和PCg/G细胞凋亡的影响及P-170蛋白的表达;采用基因芯片技术分析PC9和PC9/G细胞的表达基因谱差异;采用Western blot法检测PC9和PC9/G细胞中总Akt、磷酸化Akt和整合素β1的表达.结果 MTT和凋亡检测的结果 表明,与PC9细胞相比,吉非替尼获得性耐药细胞株PC9/G对顺铂的耐药指数为5.4,细胞凋亡减少,联合LY294002后对顺铂的敏感性显著增加(P＜0.05).PC9/G细胞对多西紫杉醇较PC9细胞更为敏感,培美曲塞对两株细胞的IC50及凋亡影响的差异无统计学意义(P＞0.05).PC9/G细胞中P-170蛋白的表达水平为5.32,与PC9细胞(7.18)比较,差异无统计学意义(P＞0.05).基因芯片分析显示,PC9/G细胞中,整合素β1及DNA修复基因的表达上调,有丝分裂期基因表达下调.PC9/G细胞中总Akt、磷酸化Akt及整合素β1的蛋白表达水平分别为1.32、1.82和1.59,PC9细胞巾总Akt、磷酸化Akt及整合素β1的蛋白表达水平分别为0.83、0.87和0.57.结论 在吉非替尼获得件耐药细胞株中存在P13K的表达上调及激活、整合素β1及DNA修复基因的表达上调,其表达土调与顺铂耐药相关;表皮生长因子受体-酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKI)治疗失败的患者在选择化疗方案时应避免使用铂类药物,可选择给予多西紫杉醇或培美曲塞治疗.     

托瑞米芬与表阿霉素联用对A549、H1299细胞生长与凋亡的影响

目的：探讨托瑞米芬（TOR）与表阿霉素（EADM）联用对人肺癌细胞株A549、H1299细胞生长与凋亡的影响及其机制.方法：用MTT比色法检测TOR的化疗增敏作用,用流式细胞仪检测细胞周期的变化及p-gp在两种肺癌细胞中的表达.结果：TOR（≥20μmol/L）能直接抑制两种细胞的生长,低剂量的TOR（5、10μmol/L）与EADM联用后的抑制率均低于单用EADM组（P＜0.01）,并呈现浓度依赖性.两者联用可引起两种肿瘤细胞凋亡,呈现浓度依赖性.两种细胞周期均发生明显变化.13.1?49细胞有p-gp的存在,44.9%H1299细胞有p-gp的存在.结论：低浓度的托瑞米芬与表阿霉素联用对两种细胞有明显的协同作用.A549细胞的TOR对EADM的协同作用较H1299细胞强.其化疗增敏效应可能与增加肿瘤细胞凋亡、改变细胞周期分布有关.P53基因可能参与了TOR对两种细胞的化疗增敏及逆转耐药的调节.     

VEGF受体KDR克隆及其对内皮细胞增殖和血管新生的影响

目的：克隆VEGF受体KDR基因膜外5-7区,探讨其生物学活性。方法：提取脐静脉血管内皮细胞总RNA,克隆KDR基因膜外部分5-7区,并使之在QIA表达系统进行表达;镍柱亲和层析纯化、复性、生物学活性鉴定。结果：该系统能表达KDR基因片段,表达量约占菌体蛋白总量的5%左右。经复性,可溶性蛋白具有与VEGF特异结合功能,并能抑制VEGF促使脐静脉内皮细胞增殖和鸡胚绒毛尿囊膜血管生成的作用。结论：KDR基因片段能在QIA表达系统中得到表达,复性后表达蛋白具有与VEGF结合的生物学功能。