胃癌雌激素受体表达及新一代抗受体药物在胃癌治疗中的探讨

目的　探讨胃癌雌激素受体 (ER)实际表达率 ,为临床使用新一代抗ER药物 (toremifene ,TOR)治疗胃癌提供临床病理依据。方法　用免疫组化法对 349例胃癌标本进行ER的检测 ,其中 2 99例用ABC(avidinbiotinperoxidasecomplex)法 ,5 0例用葡聚糖聚合物技术二步法进行检测。在检测ER的同时也检测 p5 3及PCNA的表达。结果　两种检测方法的ER阳性率分别为 2 .3% (7/ 2 99)及 0 % (0 / 5 0 ) ,p5 3阳性率 37.1% (111/ 2 99)及 4 6 %(2 3/ 5 0 ) ,PCNA 94 .3% (2 82 / 2 99)及 96 % (48/ 5 0 )。结论　胃癌细胞可表达ER但实际表达率很低 ,而且存在质和量的变化。tamoxifen (TAM )及TOR的抗胃癌效应需要进一步研究     

表达前列腺特异性膜抗原的DNA疫苗对肿瘤细胞的抑制作用

目的构建表达前列腺特异性膜抗原（PSMA）的DNA疫苗，观察其在体外对肿瘤细胞的免疫攻击和在体内对肿瘤细胞攻击的免疫保护作用。方法通过稳定转染构建表达PSMA的小鼠黑色素瘤细胞系B16-PSMA，将DNA疫苗pCDNA3．1-PSMA通过肌肉注射导入C57BL／6小鼠体内，分离小鼠脾细胞，检测细胞毒性T淋巴细胞（cytotoxic T lymphocytes，CTL）反应。以B16-PSMA细胞攻击免骺小鼠，观察免疫动物的无瘤生存期和肿瘤体积增长情况，评价DNA疫苗的抗肿瘤作用。结果DNA疫苗可诱导小鼠脾淋巴细胞CTL活性，经过免疫后的小鼠成瘤率降低，无瘤生存期延长，肿瘤生长缓慢，肿瘤组织内有较多淋巴细胞浸润，表明产生较强的抗肿瘤反应。结论表达PSMA的DNA疫苗能够诱导小鼠产生特异性免疫反应，对表达PSMA的肿瘤细胞的攻击产生免疫保护作用，为前列腺癌的预防和免疫治疗提供了新的思路。     

金属蛋白酶组织抑制剂1（TIMP—1）的克隆与序列分析

目的：用基因工程技术构建金属蛋白酶组织抑制剂的克隆质粒。方法：从人乳腺癌细胞中分离提取总RNA,经逆转录PCR（RT－PCR）扩增出金属蛋白酶抑制因子1（TIMP－1）的c DNA,插入经NdeI和XhoI双酶切的PET19b载体中,构建了克隆质粒PET19bTIMP－1。结果：对此克隆质粒进行了限制性酶切鉴定和DNA序列分析,结果在扩增出的cDNA中624个碱基中与发表的TIMP－1cDNA序列相比,除361位碱基由A变为G外,其余均完全相同。结论：该突变导致编码的氨基酸由苏氨酸变为丙氨酸,不影响本课题后期用该克隆化基因表达蛋白作为抗原制备单克隆抗体的目的。该DNA全长624bp,编码207个氨基酸。     

大鼠肝纤维化模型中基质金属蛋白酶-2及其抑制物的表达

目的了解基质金属蛋白酶－２（ＭＭＰ－２）及其组织型抑制剂（ＴＩＭＰ－２）在纤维化过程中的变化,分析它们在始动阶段的作用。方法用免疫组化和酶图法,在异种血清诱导的大鼠肝纤维化模型不同阶段,作肝细胞内ＭＭＰ－２、ＴＩＭＰ－２、酶降解底物Ⅳ型胶原（ＣｏｌⅣ）以及结蛋白（Ｄｍ）定位和半定量研究。结果实验鼠于４周末形成细胞间隔,８周末发展为肝纤维化,含细胞－纤维间隔或纤维间隔,１２、１６周仍为纤维间隔。酶图法表明４周末ＭＭＰ－２活性升高２．５倍左右,８周末仍高于对照鼠。免疫组化显示４周末ＭＭＰ－２阳性细胞数最多,连续切片观察ＭＭＰ－２与Ｄｍ阳性细胞（活化的肝星状细胞）几乎重叠。８周末阳性细胞数有所减少,１２周末明显减少。半定量变化趋势与酶图法一致。ＴＩＭＰ－２于８周末表达开始升高,１２周末达最高。２周末ＣｏｌⅣ表达开始上升,４周末达高峰,以后缓慢下降。结论肝纤维化早期ＭＭＰ－２活性增高,继而ＴＩＭＰ－２分泌过多,ＭＭＰ－２活性受抑,ＥＣＭ降解受阻,纤维化进一步发展。     

磷酸镁骨黏合剂生物学固定强度及组织学的实验研究

目的研究磷酸镁骨黏合剂(MPC)植入家兔骨内的生物学固定强度,并作组织学观察。方法①生物力学部分:双侧股骨髁上钻孔后,分别植入MPC和磷酸钙骨水泥(CPC),术后分别饲养1、2、3、4、6和8 周后取出股骨下段作推出试验。②组织学部分:家兔右股骨髁上钻孔后填入MPC,术后分别饲养24 h、1、2周和 1、2、3个月,分批处死后取出标本,作不脱钙病理切片。结果①生物力学部分:在不同时间,MPC组的生物学固定强度均显著大于CPC组(P<0．05)。②组织学部分:2周时MPC开始吸收,2个月时MPC已完全吸收,骨孔愈合良好。结论 MPC的生物学固定强度比CPC大,且MPC可降解,可用于骨折黏合固定。     

Caveolin-1对喉鳞状细胞癌抑制作用的体内外研究

目的探讨caveolin-1对喉鳞状细胞癌（简称鳞癌）细胞生长的影响。方法通过脂质体法转染喉鳞癌细胞株Hep-2细胞，筛选出稳定高表达caveolin-1的克隆，并用实时定量逆转录-聚合酶链反应和免疫印迹法鉴定；用四甲基偶氮唑蓝法检测细胞的体外增殖能力；免疫印迹法检测细胞中表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor，EGFR）、磷酸化EGFR、细胞外信号调节激酶1、2（extracellular signal-regulated kinase，Erk1、2）、磷酸化Erk1、2，caveolin-1蛋白的表达；免疫共沉淀法检测caveolin-1和EGFR的结合情况；转染后的细胞接种至裸鼠皮下，观察肿瘤的生长情况，裸鼠移植瘤中caveolin-1、磷酸化EGFR、磷酸化Erk1、2的蛋白表达用免疫组织化学法检测。结果成功筛选到稳定高表达caveolin-1的克隆；与对照组相比，转染后的细胞体外增殖能力明显减弱；细胞接种到裸鼠皮下，未转染组和转染空载组中裸鼠均形成肿瘤（100％，4／4），稳定转染caveolin-1的Hep-2-CAV1-2组中裸鼠未形成实体肿瘤（0％，0／4），Hep-2-CAVl-3组中4只裸鼠中只有3只形成肿瘤（75％，3／4），但肿瘤生长缓慢，最终生成肿瘤的重量与未转染组相比明显减小（t=3．05，P〈0．05）；免疫共沉淀显示caveolin-1与EGFR在Hep-2细胞中是结合的；免疫印迹法和免疫组织化学法发现转染caveolin-1后细胞中EGFR和Erk1、2的磷酸化水平降低。结论caveolin-1能够抑制喉鳞状细胞癌细胞株Hep-2的生长，抑制EGFR-MAPK信号通路可能与其抑癌作用相关。     

滑膜肉瘤32例临床病理分析

目的 探讨滑膜肉瘤的形态特点和鉴别诊断。方法 收集原诊断为滑膜肉瘤的病例66例、恶性周围神经鞘膜瘤10例、纤维肉瘤6例、平滑肌肉瘤13例，进行形态学观察，并采用10种抗体做免疫组化染色。结果 66例原诊滑膜肉瘤的病例中，最终确诊为滑膜肉瘤者27例，诊断准确率40．9％。最易误诊为滑膜肉瘤的肿瘤是恶性周围神经鞘膜瘤，占31．8％。5例滑膜肉瘤最初误诊为其他梭形细胞肉瘤。组织学双向分化是其主要特点，分单相纤维型，双相型和低分化型，未见单相上皮型病例。免疫组化瘤细胞表达CK和／或EMA，同时vimentin阳性，S－100和PGP9.5也有一定阳性率。bcl-2蛋白阳性率高，多为弥漫性。其他几种梭形细胞肉瘤不表达CK和EMA，bcl-2蛋白阳性率低或局灶阳性。结论 滑膜肉瘤是一种容易误诊的软组织肉瘤，免疫组化同时表达上皮性和间叶性标记。最易误诊的肿瘤是恶性周围神经鞘膜瘤。bcl-2蛋白检测对滑膜肉瘤鉴别诊断有一定帮助。     

胎儿炎症反应综合征1例报道及文献复习

胎儿炎症反应综合征(fetal inflammatory response syndrome,FIRS)这一概念首先由Gomez和Romero等~([1,2])提出.在临床上,FIRS的诊断依据包括羊水和脐血中的炎症因子(如IL-6、IL-1、TNF-α)的检测~([2,3]),而最终病理学的诊断包括了胎盘绒毛血管炎和/或脐带血管炎~([3-5]).     

MnSOD基因转染对SGC79001胃癌细胞增殖的影响

目的观察改变胞内MnSOD基因表达水平对SGC7901胃癌细胞增殖的影响。方法采用电穿孔方法将反义和正义MnSOD cDNA真核表达载体pHβA-SOD(-)／pHβA-SOD( )转染SGC7901胃癌细胞，400mg／LG418筛选稳定表达克隆并用RT-PCR及Western杂交法鉴定后扩大培养。用pHβA空质粒转染作为对照。放射免疫法检测正义、反义及空载SGC7901胃癌细胞株内的铜锌超氧化物歧化酶(CuZnSOD，SOD1)蛋白含量。分别用直接细胞计数法、四唑蓝(MTT)比色法、平皿克隆形成率试验及裸鼠移植瘤模型测定3组细胞在体外、体内的增殖活性。结果与空载组(Vector-7901)相比，转染正义质粒的MnSOD-7901胃癌细胞呈现抑增殖效应：(1)生长曲线示增殖速度减慢；(2)在平皿上的集落形成能力下降；(3)在裸鼠体内的成瘤性明显受抑制。转染反义质粒的MnSOD-AS7901胃癌细胞则出现促增殖效应：(1)生长曲线示增殖速度加快；(2)在平皿上的集落形成率上升；(3)裸鼠移植瘤生长加速。结论通过基因转染提高胞内MnSOD的表达可抑制胃癌细胞的增殖，MnSOD可能是胃癌基因治疗的一个新靶点。     

血小板源性生长因子对肺纤维母细胞前胶原合成的影响

观察血小板源性生长因子（ＰＤＧＦ）对肺纤维母细胞增殖、胶原合成的影响。以改良Ｋｕｍａｒ法，分离培养了大鼠肺纤维母细胞，并采用ＭＴＴ、免疫细胞化学、原位分子杂交等方法。结果：ＰＤＧＦ对肺纤维母细胞具有促增殖作用，其浓度在１～１０μｇ／Ｌ之间呈剂量依赖性。ＰＤＧＦ作用下的纤维母细胞胞浆内线粒体和粗面内浆网明显增多，树状突起和棘状突起也较对照组增多，ＰＤＧＦ作用２４ｈ，肺纤继母细胞Ⅰ、Ⅲ型前胶原ｍＲＮＡ表达增强，作用４８ｈ胞浆内布满Ⅰ、Ⅲ、Ⅴ型前胶原蛋白，作用７２ｈ，大量前胶原则被分泌到细胞外基质中。结论：ＰＤＧＦ不仅可以促进大鼠肺纤维母细胞增殖、合成代谢旺盛和信息传递活跃，而且使其Ⅰ、Ⅲ、Ⅴ型前胶原合成增加。其调控机制之一是在转录水平上增强了前胶原ｍＲＮＡ表达的结果。