糖尿病患者红细胞形态和渗透脆性的初步研究

应用扫描电镜观察了22例糖尿病人4400个红细胞形态的异常百分比，并测定红细胞的渗透脆性。结果表明随着糖尿病病程延长、糖化血红蛋白升高，口形、嵴形红细胞的百分比明显升高（2．64±1．27比4．29±1．03，P＜0.001），细胞渗透脆性明显上升（0．17±0．04比0．33±0．17，P＜0.05）。提示，糖尿病人异常形态红细胞的出现不仅与红细胞的能量代谢障碍外，还可能与红细胞所处的高血糖、高血脂、高血液粘度的环境有关。而影响红细胞的渗透脆性的因素较为复杂，红细胞的圆形隆起在降低其渗透脆性方面起了重要作用。     

干细胞向胰岛素分泌细胞诱导分化的研究进展

近年来,糖尿病的发病率不断上升,而且发病更趋年轻化。文献报道:全世界的糖尿病患者已超过2亿,并且以每年200万人的速度增加。我国的糖尿病患者已经超过4000万,预计到2010年将达到6000万人,其中Ⅰ型糖尿病占5%左右。糖尿病患者虽然采用胰岛素治疗在一定程度上能够改善患者的糖代谢紊乱,然而长期的胰岛素注射不仅给患者带来不便,并且不能有效地防止或逆转糖尿病引起的微血管病变及其并发症。胰岛移植不仅能够纠正糖代谢紊乱,而且还能有效地防止或逆转糖尿病引起的微血管病变及其并发症。     

人胰岛的分离纯化和功能评价

目的 应用Ricordi人胰岛分离技术分离和纯化人的胰岛,并进行功能和安全性的评价.方法 获得6例成人尸体胰腺组织供体,采用胶原酶消化法及密度梯度离心法分离和纯化胰岛,并分析胰岛的数量、纯度和活力.采用免疫荧光法分析胰岛内分泌细胞的组成和分布;检测葡萄糖刺激的胰岛素分泌和胰岛移植后的动物血糖水平.并对分离胰岛的安全性指标进行评价.结果 分离纯化后的胰岛数量为(22.9±3.1)万IEQ,纯度为(59.0 ±8.9)%,活力为(89.0±3.0)%.免疫荧光显示,胰岛由4种内分泌细胞组成并呈正常分布.葡萄糖刺激胰岛素释放的刺激指数为8.1 ±4.0.胰岛移植于糖尿病裸鼠后,血糖在3 d后降至正常水平并维持超过30 d.分离胰岛样本的各项安全性指标在规定范围之内.结论 采用Ricordi人胰岛分离技术分离和纯化的胰岛在形态、结构、数量、纯度、活力、体内外功能以及安全性方面都达到临床胰岛移植的标准,为开展临床胰岛移植奠定了基础.     

瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和凋亡的研究

目的　探讨瘢痕疙瘩的成纤维细胞的增殖和凋亡状态。方法　采用免疫组化和末端脱氧核苷酸转移酶介导的末端标记技术 ,检测 2 4例瘢痕疙瘩和其周围正常皮肤中成纤维细胞的增殖和凋亡状态。以每 10个高倍镜(40 0倍 )视野中成纤维细胞凋亡及PCNA阳性细胞数与总细胞数之比作为凋亡指数和增殖指数 ,利用配对t检验进行统计学处理。结果　 2 4例瘢痕疙瘩成纤维细胞和对照组平均增殖指数、平均凋亡指数、平均凋亡指数 /平均增殖指数 ,经配对t检验具有高度显著性差别。结论　瘢痕疙瘩成纤维细胞的过量增生和凋亡相对减少在瘢痕疙瘩的发生和发展中起着重要作用。     

线粒体分裂对胰岛β细胞功能的影响

目的 探讨线粒体分裂对胰岛β细胞功能的影响.方法 通过可诱导表达野生型动力相关蛋白1(Drp-1 WT)基因和突变型Drp-1(Drp-1K38A)基因的大鼠INS-1 β细胞,分析不同葡萄糖条件下,线粒体分裂对胰岛β细胞功能的影响.结果 在高糖条件下,强力霉素诱导后的Drp-1WT细胞线粒体分裂过程增强,网络状结构部分断裂,多呈点状结构,细胞胰岛素分泌功能降低(P<0.01),线粒体膜电位降低(P<0.05),细胞内ATP含量减少(P<0.05),细胞色素C表达增加,而在Drp-1K38A细胞中,上述变化明显减轻.结论 线粒体分裂增强可抑制胰岛β细胞功能.

Abstract：

Objective To investigate the effect of mitochondrial fission on the function of pancreatic β cells.Methods INS-1 stable cell lines allowing inducible expression of either wild-type dynamin-related protein 1 (Drp-1 WT)or its dominant-negative mutant(Drp-1 K38A)were used.The effect of mitochondrial fission on the function of pancreatic β cells were investigated under different concentrations of glucose.Results There were increased mitochondrial fission and disintegration of the mitochondrial reticulum into multiple punctiform organelles in Drp-1 WT cells induced with doxycycline under high glucose condition.Insulin secretion(P<0.01),mitochondrial membrane potential(P<0.05),and ATP content(P<0.05)were decreased and cytochrome C expression was increased after the expression of Drp-1 WT under high glucose condition while these changes were markedly mild in Drp-1 K38A expression cells.Conclusion The increased mitochondrial fission inhibits pancreatic β cell function.     

大鼠自发性巨大肿瘤的病理分析

目的研究Wistar及GK大鼠巨大自发性肿瘤的病理特征。方法观察发生巨大自发性肿瘤的Wistar及GK大鼠的生长及生存状况,手术切除肿瘤,免疫组织化学染色研究其病理特征。结果两例巨大自发性肿瘤瘤体重分别为502 g和119 g,分别为大鼠体重的64%和24%,肿瘤表面具有完整的包膜,与正常组织边界清晰,没有发现肿瘤含有血管的蒂状结构。病理检查结果显示:确定为良性纤维瘤。结论大鼠自发性巨大肿瘤为良性纤维瘤,除瘤体过大对大鼠的活动产生影响外,对生存状况无显著影响。     

糖基化终末产物诱导大鼠视网膜微血管内皮细胞表型和功能改变

目的 研究糖基化终末产物(AGEs)诱导大鼠视网膜微血管内皮细胞表型和功能的变化及相关机制.方法 SPF级雄性Wistar大鼠20只,7～8周龄,体重260～280 g,分离培养大鼠视网膜内皮细胞,采用免疫荧光染色、流式细胞术和体外形成毛细血管样网络结构的方法进行鉴定.视网膜内皮细胞在AGEs刺激后,用噻唑蓝(MTT)法分析细胞的增殖能力;用膜连蛋白V/碘化丙啶(Annexin V/PI)双染法检测细胞凋亡;采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和流式细胞术检测细胞AGEs受体、人蛋白激酶C(PKC)、细胞间黏附分子1(ICAM-1)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达变化.采用t检验进行统计学分析.结果 分离纯化的大鼠视网膜内皮细胞表达血管性血友病因子(vWF)并在人工基膜上形成毛细血管网络结构.AGEs以时间和剂量依赖的方式抑制大鼠视网膜内皮细胞增殖能力,在200 mg/L的AGEs组培养至第5天时细胞增殖能力低于对照组(t=8.9,P＜0.05),7 d和9 d时抑制作用更明显(t值分别为15.7和46.1,均P＜0.01).400 mg/L AGEs组在第3天开始出现细胞增殖减慢(t=12.5,P＜0.05),从第5天开始增殖速度明显低于对照组(t值分别为22.4、41.5和77.7,均P＜0.01).并且AGEs诱导视网膜内皮细胞凋亡.进一步分析发现AGEs上调了大鼠视网膜内皮细胞AGEs受体、PKC、ICAM-1和iNOS的mRNA表达(t值分别为91.8、9.22、16和42,均P＜0.01)和蛋白水平的表达(t值分别为20.2、12.3、7.7和13.9,均P＜0.01).结论 AGEs可能通过上调AGEs受体诱导大鼠视网膜微血管内皮细胞表型和功能的改变.     

胰腺或胰岛移植防止或逆转糖尿病血管病变的研究进展

糖尿病已成为世界上发病率最高、对人类健康威胁最为严重的疾病之一.近年来,糖尿病的发病率不断上升,而且发病更趋年轻化.因此,糖尿病的防治成为目前医学研究的热点.糖尿病患者由于胰岛素产生障碍或胰岛素不能完全发挥生理作用而引起糖代谢紊乱,导致大血管及微血管病变,进而引发一系列并发症(包括动脉粥样硬化、肢体缺血坏死、视网膜病变和肾功能衰竭).虽然采用胰岛素治疗在一定程度上能够改善患者糖代谢紊乱,然而这种方法并不能有效地防止或逆转糖尿病引起的血管病变及其并发症.     

人胚胎胰腺组织干细胞的分离鉴定和纯化

分离人胚胎胰腺组织中的胰岛细胞于体外培养,应用免疫细胞化学及RT-PCR的方法对其中的胰腺干细胞进行鉴定,并应用免疫磁珠的方法纯化其中的干细胞。结论是人胚胎胰腺组织中存在一定比例的干细胞,可以作为体外向胰岛素分泌细胞诱导分化的细胞来源。     

体外培养人胰岛素瘤细胞的特性

目的分离培养人胰岛素瘤细胞,并研究它的功能特性。方法原代分离人胰岛素瘤细胞,经多次筛选培养进行纯化。通过荧光显微镜观察细胞特有的自发荧光;RT-PCR方法检测胰岛素mRNA的表达和胰岛细胞自身抗原IA-2、IAR和ICAp69的表达;应用MTT方法检测抗人IA-2抗体对胰岛素瘤细胞的杀伤。结果分离的人胰岛素瘤细胞经传40代,在悬浮培养条件下可自发聚集成胰岛样结构,并有自发荧光。该细胞表达胰岛素mRNA并合成胰岛素,但明显低于大鼠胰岛素瘤细胞INS-1。该细胞也表达人胰岛细胞自身抗原IA-2、IAR和ICAp69,并且用抗人IA-2抗体与之孵育后可出现抗体剂量依赖性的细胞杀伤。结论此分离培养的人胰岛素瘤细胞表达人胰岛素和人胰岛细胞自身抗原,因此可以作为研究人Ⅰ型糖尿病发病机制的细胞模型。