体外诱导人脐静脉间充质干细胞分化为神经元样细胞的实验研究

探讨来源于人脐静脉内皮及内皮下分离的间充质干细胞(MSCs)向神经元样细胞分化的可能性,以期为脐静脉MSCs的神经移植提供理论依据。通过在无菌条件下收集正常足月剖宫产新生儿脐带并对脐静脉进行胶原酶消化,将获取的内皮及内皮下贴壁细胞进行培养。经传代培养及免疫细胞化学鉴定后,取第2代细胞用β-巯基乙醇和二甲基亚砜诱导其向神经元方向分化,并以免疫细胞化学方法对分化细胞进行鉴定。结果表明脐静脉经胶原酶消化后的贴壁细胞主要表现为间充质样细胞和内皮细胞;传2代后,间充质样细胞可得到纯化和扩增。免疫细胞化学染色显示诱导前细胞不表达血管性血友病因子(vWF),诱导后MSCs表达巢蛋白(nestin)和神经元特异性烯醇化酶(NSE),而不表达胶质纤维酸性蛋白(GFAP)。以上结果提示,来源于脐静脉内皮及内皮下的MSCs在体外可以培养、扩增,并具备在诱导剂的作用下向神经元样细胞分化的潜能,可作为神经系统疾病细胞移植治疗的备选来源。     

hUCMSCs与VEGF联合移植对MCAO大鼠治疗的影响

目的 将体外培养的人脐带间充质干细胞(hUCMScs)与血管内皮生长因子(VEGF)联合植入大脑中动脉栓塞(MCAO)模型大鼠脑内,观察缺血体积变化及缺血区血管新生情况.方法 选择180只SD大鼠随机分为假手术组、MCAO组、hUCMScs组、VEGF组、hUCMSCs+ VEGF联合组.HE、Niss1染色比较缺血前后组织学的变化;缺血后7、14、28d3个时间点分别用免疫组化法检测脑缺血半暗区微血管密度;TTC染色法计算并比较缺血体积变化.结果 缺血前后的组织学上有明显变化;在缺血后7、14、28 d时,hUCMSCs组、VEGF组微血管密度与MCAO组有差异,联合组最大;各组3个时间点的缺血体积逐渐减小,其中联合组28 d梗死体积最小.结论 hUC-MSCs和VEGF联合植入MCAO大鼠脑内,可增加其缺血半暗区血管新生,减小缺血体积,促进神经功能恢复.     

阿柏西普对碱烧伤大鼠角膜新生血管的抑制作用

目的　探讨阿柏西普对大鼠角膜碱烧伤后新生血管的抑制作用。方法　制备SD大鼠角膜碱烧伤动物模型,随机分成4组,每组各9只,A组、B组与C组分别给予20 g·L^-1、25 g·L^-1、30 g·L^-1的阿柏西普滴眼液,D组为生理盐水组（给予生理盐水）,每组每天2次滴眼治疗,共14 d。分别于碱烧伤后第3天、7天、14天,观察角膜新生血管（corneal neovascularization,CNV)情况并计算CNV面积。碱烧伤后第14天,处死全部小鼠,进行组织学和免疫组织化学检测各组CD34、VEGF蛋白表达情况。结果　碱烧伤后第 3天、7天和14天,A组、B组与C组的CNV面积均小于D组,差异均有统计学意义（均为P<0.05）;B组与C组在各时间点上CNV面积差异均无统计学意义（均为P>0.05）;但B组和C组与A组相比,差异均有统计学意义（均为P<0.05）。HE 染色及免疫组织化学染色结果显示:角膜碱烧伤后第14天,各组角膜CD34和VEGF蛋白表达增强,与A组、B组、C组比较,D组CNV旺盛致密,CD34和VEGF蛋白表达较强。A组CNV较B组和C组多,CD34和VEGF蛋白表达增强;B组和C组棕黄色颗粒分布无明显差异。碱烧伤后第14天,酶联免疫吸附试验测定结果显示:A组、B组和C组房水中TNF-α蛋白表达水平均低于D组,差异均有统计学意义（均为P<0.05）,B组、C组与A组比较,房水中TNF-α蛋白表达水平差异均有统计学意义（均为P<0.05）,但是B组和C组间差异无统计学意义（P>0.05）。结论　阿柏西普对碱烧伤后大鼠CNV形成具有抑制作用,且25 g·L^-1阿柏西普的治疗效果最佳。     

提高局部解剖学实验教学效果的思考

<正>解剖学是一门极其重要的医学基础课。医学中有1/3以上的名词来自解剖学。恩格斯说过:"没有解剖学就没有医学。"由此可见,解剖学得好坏,     

siRNA沉默HLA-A2表达的hMSCs对人异体T淋巴细胞分泌IFN-γ和IL-2功能的影响

目的探讨应用siRNA技术下调HLA-A2表达的人骨髓间充质干细胞(human mesenchymal stemcells,hMSCs)对人异体T淋巴细胞分泌功能的调节作用。方法从成人骨髓中分离和培养hMSCs,并且通过免疫细胞化学检测其表面标志;利用人工合成HLA-A2靶向小分子干扰RNA转染至第3代hMSCs,然后将转染前后的hMSCs,与经植物血凝素(PHA)刺激的人异体T淋巴细胞共同培养。用ELISA分别检测各培养上清液中T淋巴细胞分泌IFN-γ和IL-2的水平。结果原代培养3d后,约70%hMSCs贴壁生长,7d后细胞迅速增殖,进入对数生长期,14d左右进入平台期,第3代细胞多呈梭形生长,形态比较均一,hMSCs表面抗原CD44、CD166阳性。HLA-A2靶向小分子干扰RNA转染3天后,可见少量细胞死亡,免疫荧光染色可见细胞核和部分胞浆呈阳性表达。转染HLA-A2靶向小分子干扰RNA的和未转染的hMSCs均能抑制人T淋巴细胞分泌IFN-γ和IL-2,转染后的hMSCs抑制作用强于未转染的hMSCs(<0.05)。结论体外沉默HLA-A2基因表达可增强hMSCs抑制PHA刺激人T淋巴细胞分泌因子。     

显微手术结合伽玛刀治疗颅咽管瘤的疗效

<正>颅咽管瘤主要临床特点侵袭周围的组织,如视交叉、垂体柄等,故常引起下丘脑-垂体功能紊乱、颅内压增高、视力及视野障碍、尿崩症以及神经和精神症状〔1〕。临床诊断主要依赖于影像学检查,如CT或MRI扫描可明确诊断〔2〕。目前治疗手段主要为手术切除,常用的手术方式为显微切除,但是存在切除不全、术后并发症较高、复发率高等缺点〔3〕,伽马刀借助影像学技术对肿瘤进行定位,并进行精确照射,从而可以提高临床疗     

端粒酶反义寡核苷酸对肝癌细胞生长抑制作用

目的本研究将互补于hTR模板区的全硫代修饰型反义寡核苷酸（PS-ASODN）经lipotap脂质体转染作用于肝癌细胞系BEL-7402,观察其对肝癌细胞端粒酶活性的影响,同时检测其对癌细胞的生长抑制作用,旨在探讨PS-ASODN对肝癌的治疗价值,为临床治疗肝癌提供一定的试验数据。方法分别采用MTT法、流式细胞术、酶联免疫吸附（ELISA）法检测不同浓度PS-ASODN对bel-7402的细胞增殖、细胞凋亡和端粒酶活性的作用。结果PS-ASODN能抑制BEL-7402细胞的生长,降低其端粒酶活性并诱导细胞凋亡。结论端粒酶与BEL-7402增殖活性有关,抑制端粒酶活性可能成为肝癌基因治疗的新靶点。     

局灶性脑缺血中脑组织和血清中白细胞介素6及肿瘤坏死因子α表达的研究

目的:研究在大鼠局灶性脑缺血的动物模型中脑组织白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达变化及血清中IL-6和TNF-α的含量的变化。方法:采用线栓法建立大鼠局灶性脑缺血的动物模型,在缺血后6,12,24,48h断头取脑,并采静脉血。分别以逆转录-聚合酶链式反应和放射免疫方法检测脑组织中IL-6和TNF-αmRNA的变化及血清中IL-6和TNF-α的含量变化。结果:缺血脑组织中IL-6的mRNA的表达水平升高,6h达到高峰,48h恢复到基础水平。血清中IL-6的含量在脑缺血后同样升高,12h达到高峰。而脑组织TNF-αmRNA的表达在12h达到高峰,血清中的TNF-α水平48h内仍继续升高。结论:局灶性脑缺血可以诱发血清和脑组织中IL-6和TNF-α的高表达。     

人脐静脉间充质干细胞体外诱导分化为神经元的可行性*★

目的：探讨来源于人脐静脉内皮及内皮下层间充质干细胞体外诱导分化为神经元样细胞的可行性，分析体外分离纯化、原代及传代培养的最佳条件，为神经组织修复选择理想的种子细胞来源。 方法：实验于2006-04/12在辽宁医学院解剖学实验室完成。①对象：取正常健康产妇顺产或剖宫产的新生儿脐带20条，由辽宁医学院附属第一医院提供，产妇及其家属均签署知情同意书，实验经医院医学伦理委员会批准。②实验方法：无菌条件下用1 g/LⅠ型胶原酶消化脐静脉内皮及内皮下层，收集的细胞按5×107 L-1，1×108 L-1，5×108 L-1，1×109 L-1，3×109 L-1密度接种进行原代培养，待细胞80%融合时胰酶消化传代。取第2代细胞，诱导组经含有3 μmo/Lβ-巯基乙醇、20%胎牛血清的DMEM预诱导液处理后，换成含10 g/L二甲基亚砜、100 mmol/L丁化羟基茴香醚的无血清DMEM诱导液进行诱导。未诱导组将诱导液更换为无血清DMEM。③实验评估：记录原代培养过程中不同接种密度细胞贴壁所需时间。免疫细胞化学检测诱导前细胞表面抗原血管性血友病因子、CD166的表达及诱导后细胞巢蛋白、神经元特异性烯醇化酶、胶质纤维酸性蛋白的表达，倒置相差显微镜下计数阳性细胞分化率。 结果：①不同接种密度细胞贴壁所需的原代培养时间比较：5×107 L-1组仅有1孔细胞贴壁呈克隆样生长，但培养至28 d时仍不能传代，其余培养孔均无细胞贴壁生长。与1×108 L-1组比较，5×108 L-1，1×109 L-1，3×109 L-1组细胞贴壁生长的原代培养时间均明显缩短（P < 0.05），且后3组比较差异无显著性意义（P > 0.05）。②贴壁细胞表面抗原检测：CD166呈阳性，血管性血友病因子呈阴性。③诱导分化：诱导组脐静脉间充质干细胞巢蛋白、神经元特异性烯醇化酶呈阳性表达，不表达胶质纤维酸性蛋白。巢蛋白阳性细胞率为（9.5±1.2）%，神经元特异性烯醇化酶阳性细胞率为（15.6±2.6）%。未诱导组以上3种标志均不表达。 结论：①在体外可以成功分离培养获得人脐静脉内皮及内皮下层的间充质干细胞，其原代培养细胞的种植密度以5×108 L-1~ 1×109 L-1为佳。②细胞传2代后性质相对均一，基本无造血细胞和内皮细胞污染，达到纯化目的，具有间充质干细胞特点。③在化学诱导剂β-巯基乙醇、二甲基亚砜、丁化羟基茴香醚联合作用下，其可以向神经元样细胞分化。