新型三聚β肽对人肝癌细胞系迁移和侵袭能力的影响

在肿瘤侵袭转移过程中，肿瘤细胞首先脱离原位，与基底膜和细胞外基质中的大分子蛋白成分黏附，并激活与基质蛋白溶解相关的蛋白水解酶类如基质金属蛋白酶(MMPs)，降解基底膜和细胞外基质，从而细胞移动并穿过基底膜和血管壁进入血液循环。在肿瘤细胞与细胞外基质的黏附过程中，整合蛋白起了非常重要的作用。Liu等根据整合蛋白β亚基和部分α亚基的保守序列设计的抗黏附β肽能阻断肿瘤细胞与基质的相互作用，对高转移的人肝癌裸鼠模型LCID20肝癌切除术后肝内转移和肺转移也具有强大抑制作用。     

上皮钙粘蛋白（E—cadherin）在高侵袭性肝细胞癌中的表达

目的旨在探讨上皮型钙粘蛋白（Ｅ－ｃａｄｈｅｒｉｎ）与肝癌侵袭的关系。方法选择２５例原发性肝细胞癌及相应癌旁组织、２例门静脉癌栓标本和裸鼠高、低转移人肝癌模型（ＬＣＩＤ２０和ＬＣＩＤ２５），Ｅ－ｃａｄｈｅｒｉｎｍＲＮＡ的表达采用半定量逆转录ＰＣＲ（ＲＴ－ＰＣＲ）检测。结果Ｅ－ｃａｄｈｅｒｉｎ在２５例肝细胞癌和相应的癌旁组织中基因表达值为８２．９％±５４．９％和４９．５％±２６．９％，两者差异有显著性（Ｐ＜０．０５）。２例门静脉癌栓标本均不表达Ｅ－ｃａｄｈｅｒｉｎ，裸鼠高转移人肝癌模型（ＬＣＩＤ２０）也不表达Ｅ－ｃａｄｈｅｒｉｎ，而低转移模型（ＬＣＩＤ２５）的表达值为６７．４的±１６．０％。高侵袭性肝癌和低侵袭性肝癌Ｅ－ｃａｄｈｅｒｉｎ表达指数分别为４８．９％±３８．０％和７９．１％±１９．１％，两者差异无显著性（Ｐ＞０．０５）。Ｅ－ｃａｄｈｅｒｉｎ表达指数与肿瘤包膜和大小无关。结论肝细胞癌组织Ｅ－ｃａｄｈｅｒｉｎ表达低于其相应的癌旁组织，高侵袭性肝癌较低侵袭性肝癌表达更低，Ｅ－ｃａｄｈｅｒｉｎ的丧失或低表达是肝癌获得高侵袭转移能力的因素之一。     

肝细胞癌门静脉癌栓相关血清小分子量蛋白质标志物的筛选

目的筛选肝细胞癌门静脉癌栓相关的血清小分子量蛋白质标志物。方法收集健康志愿者、肝细胞癌无癌栓患者和肝细胞癌门静脉癌栓患者3组血清各l2份，用16％SDS-PAGE进行双向电泳，得到3组血清小分子量蛋白质表达图谱；经Image Master软件比对分析后，用基质辅助激光解析飞行时间质谱对差异点进行鉴定。结果在16％SDS-PAGE凝胶中，3×10^3～20×10^3区域内蛋白质条带间距较12．5％SDS-PAGE明显增宽，条带数目明显增多，且3组血清小分子量蛋白质表达图谱中均可清晰显示〈20×10^3的小分子量蛋白质斑点。组间比较显示，3组血清共有15个小分子量差异蛋白质点，经鉴定为5种蛋白质。与健康组比较，无癌栓组中载脂蛋白A-I、脂蛋白CⅢ、转甲状腺素蛋白和DNA拓扑异构酶Ⅱ表达降低，而结合珠蛋白-2表达增高；门静脉癌栓组5种蛋白质表达均较无癌栓组降低。结论在肝细胞癌的发生和发展过程中，血清小分子量蛋白质表达谱发生明显变化，差异表达的小分子量蛋白质有可能为肝细胞癌和门静脉癌栓早期预测及治疗监测提供参考。     

糖蛋白质组学技术在肿瘤研究中的应用

蛋白质糖基化是一种重要的翻译后修饰,50%以上的蛋白质存在糖基化现象[1]。蛋白质糖基化涉及到细胞免疫、细胞粘附、蛋白翻译调控、蛋白降解等多种生物过程。在肿瘤的发生、发展进程中,某些糖基化修饰会随着疾病进程发生改变,     

不同转移潜能人肝癌细胞系酪氨酸磷酸化蛋白质差异分析

目的研究不同转移潜能人肝癌细胞系中酪氨酸磷酸化蛋白质表达的差异并筛查与肝癌转移相关的酪氨酸磷酸化蛋白质分子。方法应用双电泳(2-D E)、免疫印迹法及基质辅助激光解析电离飞行时间质谱分析,对三种不同转移潜能人肝癌细胞系Hep 3B、MHCC97L和MHCC97H进行酪氨酸磷酸化蛋白质组分析。结果对照2-DE胶和免疫印迹发光胶片,Hep3B检测到10个点,MHCC 9 7L检测到19个点, MHCC97H检测到17个点。经质谱鉴定,得到膜连蛋白Ⅰ等19个差异点。结论细胞内酪氨酸磷酸化蛋白的表达差异与肝癌的侵袭转移有关。     

肝癌肝移植术后肿瘤复发相关蛋白的鉴定及生物信息学分析

目的 鉴定肝癌肝移植术后肿瘤复发相关蛋白并进行相关生物信息学分析.方法 取肝癌肝移植术后3年患者原发瘤标本,根据肿瘤复发情况,分为复发组(10例)和未复发组(10例).用双向电泳对两组总蛋白进行分离,质谱鉴定差异蛋白;用Gene Ontology和MetaCore软件进行生物信息学分析;用蛋白印迹法测定核纤层蛋白A/C(lamin A/C)的表达.结果 共鉴定出37个差异蛋白,相对于未复发组,复发组中表达上调2倍以上的蛋白16个,表达下调2倍以上的蛋白21个.按Gene Ontology进行分类发现它们主要分布于细胞浆(27％)和细胞器(24％);主要参与体内催化反应(38％)和结合反应(24％)等生物学功能.MetaCore数据库分析,发现多种蛋白参与细胞凋亡、细胞死亡、细胞发育过程的信号调控网络.我们应用蛋白免疫印迹对lamin A/C在两组间的差异表达情况进行了再验证,验证结果与质谱结果吻合.结论 肝癌肝移植术后转移复发与多种蛋白表达改变相关,lamin A/C可能为移植后肿瘤转移复发的潜在分子靶点.     

稳定表达stathmin Ser25磷酸化位点突变的肝癌细胞株的建立

目的：建立稳定表达stathmin Ser25磷酸化位点点突变（stathmin S25A）的肝癌细胞株。方法：采用PCR定点突变的方法构建stathmin S25A的重组质粒,并用酶切和测序技术鉴定突变结果;采用脂质体转染的方法,筛选建立stathmin野生型（wt）和突变型（S25A）的肝癌细胞HCCLM6,用Western blotting进行鉴定。结果：定点突变构建stathmin S25A的重组质粒,测序证实stathmin 25位丝氨酸突变为丙氨酸。将stathmin wt和S25A转染HCCLM6,筛选建立稳定表达的肝癌细胞株,Westernblotting检测发现stathmin pS25在stathmin S25A细胞中的表达较stathmin wt和对照组细胞明显下降（P〈0.05）。结论：建立了稳定表达stathmin S25A的肝癌细胞株,为研究stathmin位点磷酸化在肝癌发病中的分子机制提供实验模型。     

肿瘤表观遗传学研究进展

对肿瘤研究的不断深入使人们认识到几乎所有人类肿瘤都是由表观遗传学异常与基因改变共同引起并促进其演变的.表观遗传学改变主要包括DNA甲基化改变和组蛋白修饰,这两种调控模式本身及之间的相互作用网络可导致印记丢失,染色质重塑,非必需重复序列的转录、基因的异常活化以及抑制肿瘤发生和演进基因的异常沉默等,在异常的克隆性增生和癌性增生的级联事件起始中发挥重要作用,在酵母模型中的研究更深入的理解了肿瘤干细胞的定义以及引起肿瘤的相关分子机制.表观遗传学的研究为进一步了解肿瘤的各种特性,优化肿瘤的早期诊断,改善肿瘤的预后提供了新的策略.     

人肝细胞性肝癌组织转移相关分子的比较蛋白质组学研究

目的 应用比较蛋白质组学方法研究肝细胞性肝癌(HCC)转移相关的关键蛋白分子。方法 用双向凝胶电泳(2DE)对有转移的HCC组织和未发生转移的HCC组织总蛋白进行分离，两组间差异蛋白点用质谱和数据库搜索鉴定，并在蛋白质和mRNA水平上进一步检测验证。结果 鉴定出l6个差异表达蛋白，包括S100钙结合蛋白(S100)、热休克蛋白27(HSP27)、细胞角蛋白18(CK18)等。对在转移性HCC组织中表达显著增高的HSP27，应用western blot分析在蛋白水平上验证了2DE结果，RT-PCR检测出两组问mRNA水平也存在差异，但不显著，免疫组织化学检测显示HSP27主要定位于肝细胞胞浆内。结论 HCC转移与多种蛋白表达相关，其中HSP27高表达可能在转移中发挥作用，可能为潜在的判断HCC转移的分子标记或控制转移的治疗靶点。     

乙型肝炎相关肝癌外周血树突状细胞负载肿瘤抗原前后免疫功能的变化

目的探讨肝癌患者外周血单个核细胞(PBMC)来源树突状细胞(DC)表面分子表达及负载肿瘤抗原前后免疫功能变化与免疫逃逸的关系。方法分离18例乙型肝炎相关原发性肝癌、11例乙型肝炎肝硬化患者和10名健康献血者PBMC,体外培养,并加入重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和白细胞介素-4(IL-4)诱导DC。以共聚焦显微镜和扫描电镜观察形态,以流式细胞仪检测DC表面人类白细胞抗原(HLA)-DR、CD1a、CD80、CD83、CD86等分子表达水平。以HCCLM6肝癌细胞株制备肿瘤抗原,分别负载3种DC,最后以混合淋巴细胞反应(MLR)测定DC负载前后刺激同种异型T淋巴细胞增殖能力,并测定MLR上清液中IL-12的含量。结果肝硬化和肝癌组PBMC、DC得率低于正常组(P<0.05);HLA- DR、CD1a、CD80和CD86等分子表达水平也低于正常组(P<0.05);负载肿瘤抗原前肝硬化和肝癌组刺激同种异型T淋巴细胞增殖能力和MLR上清液中IL-12含量明显低于正常组,负载肿瘤抗原后3组均提高, 并以肝硬化组提高最为明显,但IL-12含量仍低于正常组。结论DC表型和功能缺陷可能是乙型肝炎病毒产生免疫耐受和肝癌细胞免疫逃逸的重要机制。肝硬化患者DC仍有一定功能。