HCV非结构蛋白NS5A基因的斑马鱼肝脏表达模型

目的建立HCV非结构蛋白NS5A基因在斑马鱼肝脏特异表达的模型,研究HCVNS5A的体内作用机制并初步探讨HCVNS5A对肝病理标志基因表达的影响。方法克隆肝基因表达调控序列——斑马鱼脂肪酸结合蛋白基因增强子序列（eFABP）和HCV非结构蛋白基因NS5A序列,利用CMV启动子序列,构建HCVNS5A基因和报告基因绿色荧光蛋白基因eGFP在肝脏共表达的基因构件pFC-5AiR。经细胞转染实验验证所建构件的报告基因DsRed表达红色荧光蛋白后,将该基因构件线性化并经显微注射导入斑马鱼胚胎;通过荧光显微镜观察和整体原位杂交技术对目的基因NS5A的表达进行定位,验证其肝脏特异性表达。采用RT-PCR方法和westernblot方法对HCVNS5A基因的转录和翻译水平进行检测;并检测肝脏病理相关的标志基因的转录水平变化。结果细胞转染实验证明基因构件pFC一5AiR的报告基因DsRed能够在肝癌细胞Huh7中表达;斑马鱼胚胎注射该基因构件后在肝脏能够观察到红色荧光蛋白基因DsRed的表达;RT-PCR和westemblot结果显示HCV基因NS5A能够在斑马鱼体内正确表达;原位杂交结果进一步证明了NS5A的表达集中在斑马鱼肝脏内。进一步RT-PCR检测表明HCVNS5A在斑马鱼体内的表达可导致一些肝代谢和纤维化相关基因的上调,如Adiponectin、LDLR、Argsyn、TGF-β和HMGR等,推测NS5A在肝脏脂肪病变和纤维化中具有一定作用。结论成功建立了斑马鱼肝脏表达HCVNS5A的模型;初步数据表明HCVNS5A在斑马鱼体内的表达与部分肝代谢和纤维化标志基因的异常表达相关;该模型可以用于HCVNS5A的体内病理机制的研究。     

抗HIV-1活性化合物作用靶点的快速判断方法

目前,艾滋病的防治工作主要依靠抗HIV-1药物,临床使用的抗HIV药物主要是逆转录酶抑制剂、蛋白酶抑制剂、融合抑制剂和整合酶抑制剂。逆转录酶抑制剂包括核苷类逆转录酶抑制剂（NRTI）,如Zidovudine（AZT）、Lamivudine（3TC）、Emtricitabine（FrC）等,非核苷类逆转录酶抑制剂（NNRTI）,如Efavirenz（EFV）、Nevirapine（NVP）、Delavirdine（DLV）等。蛋白酶抑制剂主要有Ritanovir（RTV）、Saquinavir（SQV）、Indinavir（IDV）等。     

治学心识述略

介绍了作者从事中医临床、教学和古籍研究工作３０余年的治学经验。认为：从一病一证开始而掌握一门学科。由一文一书入手而旁通有关论著；自一家一派人道而贯通各家众说，以及广泛涉猎群籍和学习、运用文献学知识，开始中医研究新领域等，是学习和研究中医学术的重要方法。     

略论吴又可和张石顽对卫气营血辨证学说形成的贡献

关于卫气营血辨证学说的形成过程,一般认为:《内经》关于卫气营血生理功能与病理变化的论述,奠定了理论基础;《伤寒论》开始将卫气营血的病理引入外感热病的领域;叶天士则在前者的基础上,进一步论述了卫气营血的病机传变而具体运用于温热病的辨证治疗,并创造性地提出了卫气营血辨证论治的完整纲领。然而,笔者在复习文献中发现,在叶天士     

HIV-1前体蛋白早成熟化激活剂筛选模型的建立及应用

HIV-1蛋白酶 (PR) 活性的严格调控对于病毒的生存至关重要。在病毒蛋白表达及病毒颗粒装配过 程中, 处于病毒前体蛋白Gag-Pol中的蛋白酶必须以无活性状态存在, 避免前体蛋白Gag-Pol和Gag被提前酶切加工 (前体蛋白早成熟化)。干扰HIV-1蛋白酶活性的调控机制, 特异性的激活前体蛋白中的蛋白酶, 诱导前体蛋白早成熟化, 就可以直接抑制病毒的复制。根据这一设想, 运用生物发光共振能量转移技术, 建立细胞水平的HIV-1前体蛋白早成熟化激活剂筛选模型, 并通过3 000个化合物的试验性筛选对筛选模型进行评价。研究结果表明该筛选方法灵敏可靠, 特异性高, 重复性好 (Z' 因子为0.905)。     

天然多糖在体外抗甲型流感病毒作用的普遍性

目的研究各种天然多糖在体外抗甲型流感病毒的作用,探索多糖未来的抗病毒药学用途.方法 以云芝、虫草、灵芝、猴头菇4种天然多糖和葡聚糖为研究对象,观察天然多糖对狗肾传代细胞(MDCK)上甲型流感病毒的直接灭活作用、治疗作用、预防作用和综合阻断作用:观察天然多糖对鸡胚中甲型流感病毒的直接灭活作用.结果 云芝、虫草、灵芝、猴头菇4种天然多糖对甲型流感病毒有体外灭活作用,这种作用呈剂量和时间依赖关系;毒性低,对病毒感染有一定的治疗作用,安全指数均大于14;没有明显的预防作用;有一定程度的综合阻断作用.结论 在随机获取的5种多糖中,云芝等4种天然多糖具有抗甲型流感病毒的活性,说明天然多糖分子可能普遍具有抗病毒活性,如何在实际中运用多糖这一特征防治病毒感染值得进一步研究.     

治学心识述略

介绍了作者从事中医临床、教学和古籍研究工作３０余年的治学经验。认为：从一病一证开始而掌握一门学科。由一文一书入手而旁通有关论著；自一家一派入道而贯通各家众说，以及广泛涉猎群籍和学习、运用文献学知识，开始中医研究新领域等，是学习和研究中医学术的重要方法。     

《湿热条辨》学术渊源及特点

《湿热条辨》又名《湿热论》、《湿热病篇》等(以下简称“本篇”),传为清·薛生白所撰。本篇自被王孟英辑入《温热经纬》,并加以注释阐发之后,流传甚广,深为后世医家所推崇,是中医温病学说中具有代表性的一篇宝贵文献。本文仅就其学术渊源及学术特点作一初步而扼要的探讨。