表达CTLA4抗体的重组流感病毒构建及溶瘤效果研究

目的拯救表达免疫检查点CTLA4抗体的重组流感病毒,全面鉴定并体内外实验评价其溶瘤效果。方法利用流感病毒反向遗传学(reverse genetics,RG)技术,以A/Puerto Rico/8/34(PR8)为载体,分别在PR8病毒PB1和PA基因片段插入免疫检查点CTLA4抗体的重链和轻链构建重组质粒pFlu-CTLA4-PB1、pFlu-CTLA4-PA,与PR8病毒的其余6个质粒pHW191-PB2、pHW194-HA、pHW195-NP、pHW196-NA、pHW197-M、pHW198-NS共转染COS-Ⅰ和MDCK细胞,经拯救、筛选、鉴定获得重组溶瘤流感病毒,命名为rFlu-muCTLA4。通过血凝试验、EID_(50)、PCR等方法全面鉴定;ELISA测定anti-CTLA4抗体含量;3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulphophenyl)-2H-tetrazolium 3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-5(MTS)细胞活力测定重组病毒对小鼠肝癌H22细胞的杀伤效果;利用小鼠肝癌模型,评价重组病毒在体内对肿瘤的抑制效果。结果 rFlu-muCTLA4的血凝效价为2~9～2~(10),且能够在鸡胚中稳定传代;EID_(50)为10~(-8)EID_(50)/ml;重组病毒的PB1、PA片段与预期大小一致;重组病毒接种鸡胚培养2 d可检测到anti-CTLA4抗体,4天达到高峰值。MTS结果显示,rFlu-muCTLA4能特异性杀伤H22细胞活力,呈现剂量依赖性。动物实验表明,重组病毒能显著减小小鼠肝癌肿瘤体积,提高动物存活率并延长存活时间。结论表达免疫检查点CTLA4抗体的重组流感病毒rFlu-muCTLA4在体内外能靶向杀伤肝癌细胞,有望为溶瘤病毒靶向治疗肝癌提供新的思路。     

脑力智宝对乳鼠脑皮质神经细胞和PC12细胞生长发育的影响

目的:从细胞学角度研究脑力智宝在维持神经元存活和促进神经突起生长方面的保护作用。方法:将SD大鼠分为脑力智宝提取物高剂量组(0.63g/L)、低剂量组(0.04g/L)和对照组,连续给药7次后眼球取血制备含药血清,用MTT法检测脑力智宝对原代培养神经细胞生长发育的影响;用分散培养法培养PC12细胞,测定加入不同浓度脑力智宝提取物(0.63和0.04g/L)、脑力智宝含药血清(6和3g/kg)、神经生长因子后PC12细胞在24,48和72h的突起阳性细胞百分比。结果:脑力智宝对PC12细胞具有营养作用,使细胞突起增加增长,阳性细胞数增多,48h时0.63g/L脑力智宝提取物可使阳性细胞百分数从模型组的17.2%提高到38.4%(t=4.89,P<0.01),3g/kg脑力智宝含药血清可使阳性细胞百分数达到69.0%(t=9.37,P<0.01),并可促进原代培养鼠脑皮质神经细胞的生长发育,MTT法检测A值明显增加,尤以0.63g/L脑力智宝提取物(t=4.79,P<0.01)和3g/kg脑力智宝(P<0.01,t=8.81)组作用明显。0.63g/L脑力智宝提取物可显著促进PC12细胞增殖,在2,4和6d时分别可使PC12细胞数目较对照组分别增加1.56,1.85和2.96倍,差异均有显著性意义(t=2.67,5.27,3.12;P<0.05～0.01),均与对照组比较有显著性差异;6g/kg含药血清组亦显著增加。脑力智宝提取物和含药血清均可促进无血清培养神经     

神经干细胞分化的表观遗传学调节

<正>中枢神经系统(central nervous system,CNS)主要由神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞组成。长期以来认为成年哺乳动物的CNS缺乏再生能力,神经系统损伤后不能通过神经系统的增殖来替代丢失的神经元。1992年Renyolds等[1]从成年小鼠纹状体分离得到能在体外不断增殖,且具有多种     

脑力智宝对PC12细胞缺血性损伤的保护作用

用ＮａＣＮ加缺糖造成的ＰＣ１２细胞缺血性损伤模型,研究脑力智宝含药血清对细胞的保护作用。并对所取含药血清时不同的给药次数,采血时间和含药血清加入量等实验方法进行了探讨。结果表明,单次给药后０．５、１．２、３ｈ所采集的含药血清不具有细胞保护作用,而两次给药（间隔２ｈ）后１ｈ,２ｈ的含药血清具有明显的保护作用。每日两次给经连续３．５ｄ（７次给药）各时间点的含药血清均有明显的细胞保护作用。血清加入量以５     

脑力智宝对D-半乳糖所致亚急性衰老小鼠的作用

目的:观察脑力智宝对D-半乳糖致亚急性衰老小鼠的影响.方法:以D-半乳糖制备亚急性衰老小鼠模型,测定脑中脂褐素、ATPase活性及皮肤羟脯氨酸含量;并进行脑病理组织学检查.结果:脑力智宝可明显降低脂褐素的含量,升高羟脯氨酸的含量,改善脑能量代谢,改善蛋白质的结构组成,改善D-半乳糖所引起的神经元变性等病理组织学改变.结论:脑力智宝具有明显的抗衰老作用.     

Engrailed基因对中脑多巴胺能神经元发育的影响

神经系统在结构和功能上都是一个高度复杂的系统,发育生物学虽为生物学中重要的领域,近20年来因新技术的引进,使得发育研究进人基因层次,能更清楚地了解控制机制。中脑多巴胺（midbrain dopamine,mDA）能神经元是哺乳动物中枢神经系统多巴胺的主要来源,对中脑多巴胺神经元的发育过程及其调节机制的研究是神经发育生物学的重要问题,多巴胺神经元的发育是一包括多种转录因子和生长因子参与的严格控制过程。     

丁酸钠通过维持乙酰化平衡改善帕金森病模型鼠认知功能和情感障碍

目的研究丁酸钠对帕金森病(Parkinson’s disease,PD)模型小鼠认知功能和情感障碍影响及机制。方法C57BL/6J鼠随机分为对照组、MPTP组、丁酸钠组、MPTP+丁酸钠组,通过悬尾实验和Morris水迷宫实验研究丁酸钠对PD模型鼠认知功能和情感障碍的影响;Western blot和RT-PCR检测酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)和组蛋白去乙酰化酶1(histone deacetylase 1,HDAC1)蛋白表达和mRNA水平。结果与对照组比较,PD模型鼠表现为学习记忆能力下降和抑郁样行为;丁酸钠能够改善PD模型鼠抑郁行为,并明显提高PD模型鼠学习记忆能力;丁酸钠可使PD模型鼠脑组织TH和HDAC1蛋白表达和mRNA水平明显升高。结论 MPTP诱导TH蛋白表达明显降低,引起PD模型鼠认知和情感障碍,可能是干扰了组蛋白乙酰化平衡;丁酸钠能够使PD模型鼠脑组织TH表达明显升高,改善PD模型鼠认知功能和情感障碍,主要是通过保护多巴胺神经元、修复和维持组蛋白乙酰化和去乙酰化动态平衡来完成的。     

叶酸对母婴分离引起小鼠成年焦虑样行为影响的初探

目的：探究叶酸对母婴分离小鼠的行为学影响。方法：将新生昆明小鼠分为对照组、模型组和叶酸组，待成年后进行行为学测试。结果：与对照组比较，模型组小鼠在旷场实验中的活动和探索行为减少，叶酸可以逆转这一状况；模型组小鼠在十字高架实验中的活动和探索行为下降，叶酸组与模型组比较未有统计学差异；在新事物识别实验中，模型组小鼠的识别率显著低于对照组，表现出识别新事物能力明显减弱，而叶酸可以明显改善母婴分离小鼠的识别新事物能力；在明暗箱实验中，母婴分离使小鼠更趋向在暗箱活动，而叶酸组小鼠不仅活动增加，且更倾向于在明箱活动。结论：母爱剥夺可引起小鼠成年期焦虑样行为和学习记忆能力下降，而叶酸可以改善这些状况。     

5-羟甲基胞嘧啶在神经发育和神经退行性疾病中的 作用

DNA 甲基化是表观遗传学主要的修饰模式之一。5-羟甲基胞嘧啶（5hmC）作为一种DNA 去甲基化产物，已成为新的表观遗传标志。由于5hmC 在中枢神经系统中分布较高并且在神经发育过 程中不断变化，因此，5hmC 对于正常神经发育和神经功能至关重要。近年来的研究发现，老化或环境 应激导致的5hmC 失调在神经退行性疾病发生、发展中起重要作用。现就近年来5hmC 在神经发育以及 神经退行性疾病发生、发展中的作用进行综述。     

成年小鼠神经干细胞体外培养、鉴定及分化

目的:建立一种简便易行的从成年小鼠脑组织分离、培养和鉴定神经干细胞(neural stem cells,NSCs)的方法,为相关研究提供新的研究手段。方法:采用机械分离和酶消化结合方法分离成年昆明种小鼠的脑组织,用无血清培养基悬浮培养;倒置相差显微镜观察细胞形态;MTT法(四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法)观察NSCs的自我增殖能力;免疫荧光细胞化学技术检测NSCs标志物巢蛋白(Nestin)的表达;多聚赖氨酸铺板和撤除培养基中FGF和EGF的条件下,给予5%血清和1μm维甲酸诱导NSCs分化,免疫荧光细胞化学技术检测GFAP(标记胶质细胞),β-tubulin Ⅲ(标记神经元)蛋白的表达来测定NSCs的分化能力。结果:从成年小鼠脑组织分离的细胞,在无血清培养液中可形成神经球,并可在体外扩增和连续传代,免疫荧光细胞化学表明神经球Nestin阳性表达,在给予血清和维甲酸条件下神经球可表达GFAP和β-tubulin Ⅲ。结论:本研究成功建立了体外培养成年小鼠脑组织分离和培养NSCs的方法,培养的NSCs具有自我更新、增殖及多向分化潜能。此方法是一个稳定、简便易行的方法,可广泛用于神经干细胞相关的基础和应用研究。