下一代测序技术的临床应用规范化问题——参考美国医学遗传学与基因组学会行业标准

下一代测序(next generation sequencing,NGS)技术已经在临床实验室中得到应用.该技术的发展以及检测规模和应用范围的扩大,使基因检测成本大大降低.NGS技术在临床上的应用在不断地扩大,如疾病靶向基因组套检测、个体外显子组或全基因组分析等.同时,NGS技术也进一步改善了治疗决策和对某疾病高危人群的预测.然而,NGS技术的发展也充满了挑战性,包括测序平台和技术更新带来的选择困惑、测序结果的临床验证的不一致性问题等.为了帮助临床实验室更好地了解NGS技术、解决临床验证和正确选择NGS测序平台和方法,以及持续监控NGS并保证高质量的测序结果及其临床解释,本文结合美国医学遗传学和基因组学会(American College of Medical Genetics and Genomics,ACMG)关于NGS技术在临床上的应用的专业标准和指南进行归纳和讨论,供我国分子诊断工作者制定国内行业标准时参考.     

原发性肝癌超低温超导系统氩氦刀治疗前后血清可溶性E-cadherin水平的变化

目的：探讨原发性肝癌(HCC)患者经超低温超导系统氩氮刀治疗前、后，血清可溶性上皮钙粘蛋白(SE-Cadherin)水平变化。方法：用酶联免疫吸附双抗体夹心法检测19例HCC患者治疗前、治疗后，13例其他恶性肿瘤，19例正常健康体检人员血清SE-Cadherin水平。结果：HCC患者治疗前血清SE-Cadherin水平明显高于治疗后、其他恶性肿瘤组及正常对照组，其差异有显著意义(P＜O．01)。而治疗后、其他恶性肿瘤组及正常对照组之间无显著性差异(P＞O．05)。结论：超低温超导系统氩氮刀治疗HCC可使病情有所改善。     

上皮型钙粘蛋白与肿瘤的关系及其血清学检测

上皮型钙粘蛋白 (E Cadherin)是一种重要的细胞粘附分子和信号转导分子 ,参与组织形态发生、胚胎发育和细胞命运过程 ,其作为细胞粘附分子的功能是控制细胞移动。已发现E cadherin与肿瘤的发生发展有密切关系 ,并已有一些资料报道血清可溶性E Cadherin与恶性肿瘤的病情有一定关系 ,并试图探讨其作为一种新的诊断标志和治疗效果、预后判断的一个指标。本文就近几年有关E Cadherin与肿瘤的关系及其血清学检测进行综述。     

正常肝组织和肝细胞系、肝癌组织及细胞系中连环蛋白P120的表达

目的：探讨正常肝细胞、肝癌细胞、正常肝组织和肝癌组织中连环蛋白P120（P120ctn)的表达及其在细胞内的分布，揭示连环蛋白与肝癌间的关系。方法：采用RT－PCR、免疫荧光标记（激光共聚焦显微镜）和免疫组织化学分析，分别对正常肝细胞、肝癌细胞、正常肝组织和肝癌组织中P120ctn进行检测。结果：RT－PCR检测结果显示，上述细胞和组织中均可检测到P120ctn同工蛋白1A和3A mRNA表达；免疫荧光标记和免疫组化检测结果显示，在正常肝细胞和正常肝组织中，P120ctn分布在细胞与细胞连接处和细胞膜上，而肝癌细胞和肝癌组织中P120ctn的分布发生了转位，胞膜表达减弱或消失，胞浆表达增强，出现核内转位。结论：P120ctn表达异常与肝癌的发生有一定关系，提示肝癌发生时肝细胞的信号转导功能和粘附功能发生异常。     

多巴胺β羟化酶和单胺氧化酶活性与急性脑缺血严重程度间关系的探讨

用大鼠作急性脑缺血动物模型，测定缺血５小时后脑组织中多巴胺β羟化酶（ＤＢＨ）活性和单胺氧化酶（ＭＡＯ）活性，并观察缺血时出现的卒中症状，对缺血后脑组织中两种酶活性与卒中严重程度之间的关系进行了探讨。结果：卒中的严重程度与缺血程度有关，卒中症状积分与脑内ＤＢＨ活性呈负相关关系，但无显著性差异（Ｐ＞０．０５）；卒中症状积分与脑内ＭＡＯ活性呈显著正相关关系（Ｐ＜０．０５）。提示：脑缺血早期ＭＡＯ所起的作用是很重要的     

胃液PH,蛋白质含量与胃疾病严重程度之间关系的探讨

目的 探讨胃液ＰＨ、蛋白质呈与胃疾病严重程度之间的关系,为该类疾病的治疗提供新的理论。方法 分别用试纸法和考马斯亮蓝Ｇ－２５０法测定２２例正常对照者、１８例胃癌、３６例胃十二指肠溃疡、３３例慢性浅表性胃炎、８例萎缩性胃炎、１８例肠经生患者胃ＰＨ值和蛋白质含量并进行比较。结果 胃癌组的胃液ＰＨ、蛋白质含量平均值明显高于正常组和其它胃疾病组;慢性清表性胃炎组的胃液ＰＨ平均值也明显高于正常对照组的ＰＨ均     

原发性肝癌治疗前后血清可溶性上皮钙粘蛋白水平变化的研究

目的：探讨原发性肝癌（HCC）患者治疗前,后的血清可溶性上皮钙粘蛋白（SE－Cadherin)水平变化,方法：用酶联免疫吸附双抗体夹心法检测26例HCC患者治疗前,后的血清SE－Cadherin水平及21例正常健康人血清SE－Cadherin水平。结果：原发性肝癌患者治疗前血清SE-Cadherin水平明显高于治疗后,其差异有显著性意义（P＜0．01）,而正常健康人血清SE－Cadherin水平不高,结论：血清SE－Cadherin 水平的测定可作为原发性肝癌的诊断及疗效观察指标,并有可能成为预后评判和复发指标。     

肝癌组织中β—和p^120—连环蛋白的表达

目的 揭示连环蛋白与肝癌的发生发展的关系。方法 应用RT－PCT和免疫组织化学观察细胞黏附与信号转导分子β－和p^120－连环蛋白在正常肝组织、肝癌旁结节性肝硬化组织和肝癌组织中p^120ctn mRNA的蛋白质表达情况及其与β－连环蛋白的关系。结果 所有肝组织中均表达p^120 ctn mRNA同工蛋白1A和3A。2例正常肝组织中β－和p^120-连环蛋白分子表现为胞膜表达而胞质无表达;17例癌旁结节性肝硬化组织表现为胞膜和胞质均有表达,以胞质为主,且胞膜表达有所增强。17例HCC组织中表现为胞膜表达明显减弱或消失,而胞质表达则增强。多数细胞胞膜表达呈现不连续性。结论 肝组织中可检测到p^120ctn同工蛋白1A和3A mRNA。此外,正常肝组织中β－和p^120-连环蛋白分布在胞膜,对维持正常的细胞黏附和信号转导起重要作用;结节性肝硬化肝组织中此2种分子出现了分布变化,而肝癌细胞中此2种分子发生了明显的转位现象,提示肝癌细胞在一定程度上改变了细胞黏附分子的正常功能和其所介导的信号转导作用。     

急性脑出血性疾病与血浆过氧化脂质、超氧化物岐化酶、谷胱甘肽过氧化物酶关系的研究

目的：探讨急性脑出血性疾病与血浆过氧化脂质（ＬＰＯ）、超氧化物岐化酶（ＳＯＤ）、谷胱甘肽过氧化物酶（ＧＳＨ－ＰＸ）的关系。方法：用改良硫代巴比妥法、黄嘌呤氧化酶法和谷胱甘肽氧化酶法对４４例急性颅内出血患者血浆ＬＰＯ,ＳＯＤ和ＧＳＨ－ＰＸ含量测定,并以２６例正常对照。结果：急性脑出血患者血浆ＬＰＯ显著高于正常对照（Ｐ＜０．００１）,而ＳＯＤ、ＧＳＨ－ＰＸ显著低于正常人组（Ｐ＜０．００１、Ｐ＜０．０５）。ＬＰＯ与ＳＯＤ、ＧＳＨ－ＰＸ呈负相关（ｒ＝－０．２８,ｒ＝－０．３８）。结论：血浆中ＬＰＯ、ＳＯＤ、ＧＳＨ－ＰＸ含量测定对判断急性脑出血性疾病严重程度、评估预后及辅助治疗有一定参与价值。     

芒果甙对大鼠血液过氧化脂质代谢的影响

1 材料 实验动物:Wistar大鼠,体重150±20g,雌雄兼用,由广西医科大学实验动物中心提供。芒果甙粗品:按文献介绍的方法进行提取并鉴定。临用前用5％淀粉水溶液制成混悬液。主要试剂:四氧嘧啶为Sigma公司产品,考马斯亮蓝G-250为Fluka产品,牛血清白蛋白为德国进口分装。过氧化脂质(LPO)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)测定试剂盒由南京建成生物工程研究所提供。血红蛋白含量测定采用仪器法。其它试剂为国产分析纯。