电刺激小脑顶核对持续局灶性脑缺血时钙蛋白酶活性的影响

目的观察电刺激小脑顶核(FN)对持续局灶性脑缺血钙蛋白酶活性的影响,以阐明其神经保护作用机制。方法健康雄性Wistar大鼠,随机分为假手术组(PO)、FN刺激假手术组(PO-FN)、持续缺血组(PI)及持续缺血-FN刺激组(PI-FN),后两组又分为缺血1,3,6,12及24h组。建立大鼠电刺激FN及持续局灶性脑缺血模型,应用Western印迹半定量各组缺血核心区Mr=150000FBDP含量(表示钙蛋白酶活性),并应用尼氏体染色对缺血核心区神经元数量及形态进行分级评分。结果PO组及PO-FN组钙蛋白酶活性相似(P>0.05),处于低水平。PI组钙蛋白酶活性从缺血1h犤(3670±600)A/μg总蛋白犦开始即显著增高(t=6.338,P<0.001),以后随着缺血时间延长,钙蛋白酶活性不断增高,直至缺血24h犤(9180±360)A/μg总蛋白犦仍有持续增高趋势(缺血12,24h,t=14.673,16.632,P<0.001)。PI-FN组随着缺血时间的延长,钙蛋白酶活性从缺血1h犤(2510±460)A/μg总蛋白犦也开始增高,以后随着缺血时间延长,钙蛋白酶活性不断增高,但各时点组与其相应PI组相比,其增高程度明显减低,差别具有显著意义(缺血1,24h,t=1.875,2.134,P<0.05)。PO组及PO-FN组神经元形态及数量正常,评分均为0分。PI组从缺血1h(0.8±0.3)开始,神经元形态、数量即出现轻度改变,其评分增高(z=2.443,P<0.01),以     

脑血管病防治的实验与临床研究

脑血管病(CVD)是目前人类三大致死疾病之一,发病率高、死亡率高、致残率高。我国CVD的发病率为217/10万/年,死亡率为130/10万/年,每年至少新增加病例260万,每年死于CVD者约160万,存活者中3/4有不同程度的残废,长期需要医疗照顾,给个人、家庭和     

应用反复低血压及双侧颈总动脉阻断法建立血管性痴呆大鼠模型

目的：通过反复低血压及双侧颈总动脉阻断后建立血管性痴呆大鼠模型，观察大鼠学习记忆能力和脑组织病理学变化。方法：实验于1999—09／2000-0l在重庆医科大学第一附属医院神经病学研究所完成。选择健康雄性Wistar大鼠30只，随机分3组，假手术组10只、反复脑缺血后2周组10只、反复脑缺血后12周组10只。采用反复股动脉抽血／回输（25mL／kg）和双侧颈总动脉阻断（10min）法建立血管性痴呆大鼠模型。进行跳台试验时，让大鼠在箱内适应5min后再放到平台（安全区）上并通电，记录大鼠第1次步下平台的时间，即潜伏期，及5min内大鼠步下平台被电击的次数，即错误次数。24h和48h后重复上述试验，但一开始即将大鼠放到平台上并通电。然后进行穿梭箱试验，其参数设置为：蜂鸣（条件刺激）时间5s，电刺激（非条件刺激）时间20s，电流强度3mA，间隔30s，循环20次。即给予声刺激（蜂鸣）5s，期间如大鼠（主动）逃避到箱的另一端，蜂鸣停止并转为间隔期，否则给予电击；电击期间如大鼠逃避到箱的另一端，电击停止并转为间隔期，否则持续被电击20s；间隔30s后又给予声刺激，重复20次为1个循环。计算机自动控制并记录大鼠在1个循环中被电击次数、被电击时间和主动逃避时间。每天1个循环（箱内适应5min后开始），连续5d。常规苏木精-伊红染色，甲酚紫／酸性品红染色观察脑组织病理学变化。结果：纳入动物30只，实验过程中死亡6只，进入结果分析24只。①跳台试验结果：与假手术组比较反复脑缺血后2周组和反复脑缺血后12周组的错误次数明显增多[以第3天为例，假手术组、反复脑缺血后2周组、反复脑缺血后12周组分别为（1．3&;#177;1．0），（9．2&;#177;2．0），（12．9&;#177;2．3）次，P〈0．01]，潜伏期显著缩短[以第3天为例，假手术组、反复脑缺血后2周组、反复脑缺血后12周组分别为（193.6&;#177;8．9），（20．3&;#177;8.2），（12．0&;#177;4．4）s，P〈0．01]。②程控穿梭箱试验结果：第5天与假手术组比较反复脑缺血后2周组和反复脑缺血后12周组在1个循环中被电击次数明显增多[假手术组、反复脑缺血后2周组、反复脑缺血后12周组分别为（5.5&;#177;1．2），（14．2&;#177;2．6），（17．7&;#177;2．6）次，P〈0．01]，被电击时间明显增多[假手术组、反复脑缺血后2周组、反复脑缺血后12周组分别为（19.3&;#177;8．1），（129．2&;#177;23．4），（178．2&;#177;35．5）s，P〈0．01]主动逃避时间明显减少[假手术组、反复脑缺血后2周组、反复脑缺血后12周组分别为（38．2&;#177;6．8），（11．2&;#177;5．0），（3．4&;#177;3．1）S，P〈0．011。③脑组织神经元改变结果：术后2周大鼠出现明显的学习和记忆障碍，大脑皮质、海马CA1和CA4区神经元丢失分别为29．8％，92．1％，24．4％，但无明显的肢体瘫痪；12周后大鼠学习和记忆障碍进一步加重，大脑皮质、海马CA1和CA4区神经元丢失分别为35．8％，94．0％，30．2％，但脑损害无明显加重。结论：反复低血压及双侧颈总动脉阻断法能高度模拟血管性痴呆的临床特点，是一种可靠、简易而实用的血管性痴呆大鼠模型。     

小脑顶核电刺激对大鼠脑缺血后基质金属蛋白酶-9表达的影响

目的观察小脑顶核电刺激预处理对大脑中动脉闭塞（MCAO）大鼠脑组织基质金属蛋白酶（MMP-9）表达的影响。 方法选择雄性Wistar大鼠，随机分为对照组、小脑顶核刺激组（FNS组）及假FNS组。采用线栓法建立大鼠MCAO模型，观察时间点为MCAO后第3，6，12，24，及72小时。对照组行假手术，并不栓塞大脑中动脉。FNS组大鼠预先电刺激小脑顶核1 h，24 h后行MCAO。假FNS组仅将针电极置入大鼠小脑顶核，但不予通电。采用干湿重法测定脑含水量，Evan蓝法测定血-脑屏障（BBB）通透性，免疫印迹法测定MMP-9的表达。 结果与对照组比较，假FNS组MCAO后各时间点缺血侧脑含水量增加，BBB通透性第6小时后增高，MMP-9表达增强；与假FNS组比较，FNS组大鼠MCAO后各时间点缺血侧脑含水量明显下降，BBB通透性第6小时后明显降低，MMP-9表达明显减弱（P<0.05）。 结论预先电刺激小脑顶核，可抑制缺血区脑组织MMP-9的表达，从而抑制BBB通透性的增高，改善缺血区组织水肿。     

预刺激小脑顶核对缺血再灌注大鼠脑蛋白激酶C同工酶表达的影响

背景预先电刺激小脑顶核(fastigial nucleus,FN)具有明确的缺血脑保护作用,但其机制尚不十分清楚.研究缺血诱导的蛋白激酶C(proteinkinase C,PKC)同工酶γ,δ异常表达,可使人们从新的角度去认识和探索预先电刺激FN缺血脑保护作用的机制.目的观察预刺激脑缺血大鼠小脑顶核不同时相PKC同工酶γ,δ蛋白表达.设计随机对照实验.地点和对象实验地点重庆医科大学神经病学研究所.Wistar雄性大鼠48只,随机将动物分为单纯缺血再灌注组(I/R),假手术组(I/R'),刺激小脑齿状核(dentate nucleus,DN)I/R组(I/RDN),刺激小脑FNI/R组(I/PFN);其中I/PDN,I/RFN又分别分为3组缺血前1,4,7 d刺激.每组动物为6只.干预采用线栓法大鼠大脑中动脉栓塞再灌注模型,缺血时间均为1.5 h再灌注24 h;于缺血前1,4,7 d分别刺激小脑顶核、齿状核1 h.主要观察指标以尾状核冠状切面作为观察对象,应用免疫组织化学方法观察对照组、假手术组、刺激小脑顶核组和齿状核组PKCγ,δ的表达情况.结果缺血前1,4,7d刺激小脑齿状核各组、单纯缺血再灌注组、假手术组PKC γ,δ阳性细胞数比较无显著性差异(P＞0.05),而缺血前1,4,7 d预刺激小脑顶核能明显抑制PKC γ,δ蛋白的表达(t=2.372～6.632,P＜0.05).结论缺血性脑损害能诱导PKC γ,δ蛋白表达上调,预先电刺激小脑顶核的缺血脑保护作用可能与其下调PKC γ,δ蛋白表达有关.     

预刺激小脑顶核对缺血再灌注大鼠脑蛋白激酶C同工酶表达的影响

背景：预先电刺激小脑顶核(fastigial nucleus，FN)具有明确的缺血脑保护作用，但其机制尚不十分清楚。研究缺血诱导的蛋白激酶C(protein kinase C，PKC)同工酶γ，δ异常表达，可使人们从新的角度去认识和探索预先电刺激FN缺血脑保护作用的机制。目的：观察预刺激脑缺血大鼠小脑顶核不同时相PKC同工酶γ，δ蛋白表达。设计：随机对照实验。地点和对象：实验地点：重庆医科大学神经病学研究所。Wistar雄性大鼠48只，随机将动物分为单纯缺血再灌注组(I／R)，假手术组(I／R’)，刺激小脑齿状核(dentate nucleus，DN)I／R组(Ⅰ／RDN)，刺激小脑FNI／R组(Ⅰ／RFN)；其中Ⅰ／RDN，Ⅰ／RFN又分别分为3组：缺血前1，4，7d刺激。每组动物为6只。干预：采用线栓法大鼠大脑中动脉栓塞再灌注模型，缺血时间均为1．5h再灌注24h；于缺血前1，4，7d分别刺激小脑顶核、齿状核1h。主要观察指标：以尾状核冠状切面作为观察对象，应用免疫组织化学方法观察对照组、假手术组、刺激小脑顶核组和齿状核组PKC γ,δ的表达情况。结果：缺血前1，4，7d刺激小脑齿状核各组、单纯缺血再灌注组、假手术组PKCγ,δ阳性细胞数比较无显著性差异(P&;gt;0．05)，而缺血前1，4，7d预刺激小脑顶核能明显抑制PKCγ,δ蛋白的表达(t=2．372—6．632，P&;lt;0．05)。结论：缺血性脑损害能诱导PKCγ,δ蛋白表达上调，预先电刺激小脑顶核的缺血脑保护作用可能与其下调PKCγ,δ蛋白表达有关。     

脑梗死后自发性高血压大鼠脑内Nogo-A mRNA的表达

目的:成年哺乳动物中枢神经再生能力低下的重要原因之一是由于环境中大量存在生长抑制因子,其中神经突起生长抑制因子Nogo-A具有最强烈的神经生长抑制作用,本实验观察Nogo-AmRNA在自发性高血压大鼠实验性脑梗死后脑内表达水平及部位的改变。方法:采用自发性高血压大鼠(SHR),按Nagasava方法行大脑中动脉栓塞术,分别于术后3d及14d取脑,并用原位杂交免疫组化技术,显示脑梗死前后及不同时相脑内Nogo-AmRNA表达的水平及部位的改变。结果:脑梗死后3d,Nogo-AmRNA表达水平较低,仅分布于皮层、基底节及海马等部位,病灶及边缘区均未见明显表达阳性信号,脑梗死14d后,Nogo-AmRNA表达在脑内明显升高。以病灶边缘区较明显,白质内表达也较多。结论:脑内Nogo-AmRNA表达在脑梗死急性期并不明显升高,但在第14天可见明显升高,病灶边缘也有明显表达。     

健康老年人定量温度觉和振动觉阈值测定

定量感觉检查(QST)是能定量测定感觉损伤程度的一种物理心理学技术。常用的定量温度觉、定量振动觉测定结果用温度觉阈值和振动觉阈值表示。影响定量感觉检查结果的因素有很多，其中年龄是一个重要因素，随着年龄的增长定量感觉检查的阈值增加。定量感觉检查作为一种将主观感觉转变为相对客观的阈值检查方法是否适合于老年人群，其定量感觉结果与非老年人是否有差异，可否作为常规的检查方法。为此，我们于2002年3月至20004年3月对非老年人及老年人进行了测定，报道如下。     

体外神经干细胞培养过程中蛋白激酶磷脂酰肌醇-3激酶／AKT信号途径的作用

目的：探讨磷脂酰肌醇-3激酶(phosphatidylinositol-3 kinase，P13K)／AKT信号途径在体外培养神经干细胞存活、分化中的作用。方法：实验于2001-11／2004-04在重庆医科大学神经病学研究所完成。分为对照组、P13K特异性抑制剂wortmannin组和LY294002组；采用间接免疫荧光法检测nestin，NF-200和GFAP的表达；TUNEL评价细胞凋亡率；Western Blot法检测磷酸化的AKT，caspase-9和bad的表达。结果：随着wortmannin和LY294002浓度增大，神经干细胞的形态变化逐渐明显，而且细胞凋亡率也逐渐增加。低浓度时(wortmannin浓度为5nmol／L，LY294002浓度为2μmol／L)，神经干细胞凋亡率与对照组无显著性意义(P&;gt;0．05)；高浓度时(wonmannin浓度为50，100nmol／L，LY294002浓度为50，100μmol／L)，神经干细胞凋亡率与对照组、低浓度组有非常显著性意义(P&;lt;0．01)。Western Blot结果提示，随着PI3K特异性抑制剂浓度增大，磷酸化AKT的表达逐渐减弱。当高浓度woftmannin(20nmol／L)和LY294002(10μmol／L)抑制了AKT磷酸化后，磷酸化的caspase-9，Bad表达减弱。此外，将wortmannin组和LY294002组存活的细胞接种后，分化后细胞的NF-200，GFAP表达无显著性意义。结论：神经干细胞存活依赖于PI3K／AKT途径的活化，其机制可能是PI3K／AKT活化后，促进了Bad和caspase-9等蛋白的磷酸化，抑制了细胞凋亡事件的发生。但是PI3K／AKT途径可能在神经干细胞的分化中的作用甚微。     

电刺激小脑顶核与局灶性脑缺血再灌注时钙蛋白酶活性的关系

目的 观察电刺激小脑顶核(FN)对局灶性脑缺血再灌注后钙蛋白酶活性的影响，以阐明电刺激FN在脑缺血再灌注中的神经保护作用机制。方法 健康雄性Wistar大鼠，共120只，体质量250—300g。随机分入假手术组(PO)、FN电刺激假手术组(PO—FN)、缺血／再灌注组(I／R)及缺血／再灌注-FN刺激组(I／R-FN)，后两组又分为再灌注1，3，6，12及24h组，每组10只。建立大鼠小脑FN电刺激及局灶性脑缺血再灌注模型。应用Western印迹半定量钙蛋白酶介导的150RU胞衬蛋白降解产物含量(可表示钙蛋自酶活性)及尼氏体染色进行神经元数量及形态分级评分，观察电刺激FN对缺血再灌注不同时间后。再灌注区钙蛋白酶活性及神经元损害程度的影响。结果 再灌注l-3b，I／R组钙蛋白酶活性较I／R-FN组增高更显著[分别由(6310&;#177;360)，(4660&;#177;3lO)／μg总蛋白增高至(7060&;#177;290)，(6240&;#177;310）／μg总蛋白，t=7．776，P=0．000及t=4．267，P=0．003]。再灌注6—24b，I／R组钙蛋白酶活性不断增高，较FN—I／R组相应时点相比差异有极显著意义(各组P=0．000)。I／R组从再灌注lh(2．1&;#177;0．2)开始，神经元形态数量评分迅速增加，并随着再灌注时间延长，评分不断增高，至再灌注24b(4．0&;#177;0．0)达最高。I／R—FN组再灌注1—3h。神经元形态数量评分轻度增加，其后趋于稳定。至再灌注24h，神经元皱缩加重，神经元形态数量评分再次增加，但各组评分均显著低于I／R相应时点组(z=2．356．P=0．018；z=2．008，P=0．045；z=2．887，P=0．004；z=2．685，P=0．007；z=2．835，P=0．005)。结论 电刺激FN可抑制局灶性脑缺血再灌注后钙蛋白酶活性，起神经保护作用。