核糖体蛋白S3a RNA干扰重组慢病毒载体的构建及其对细胞凋亡的影响

目的 构建表达小鼠核糖体蛋白S3a 特异性RNA干扰重组慢病毒载体(Lenti-shmRPS3a),分析其对细胞凋亡的影响。方法 设计针对小鼠RPS3a mRNA 4条干扰序列,合成相应的发夹序列,连接入慢病毒载体系统 pLLU2G-eGFP中构建重组质粒,将重组质粒与辅助包装质粒共转染293T细胞组装病毒,检测病毒滴度。病毒感染RAW264.7细胞后,RT-PCR和Western blot检测干扰效果,流式细胞术分析其对凋亡的影响。结果 PCR和测序证明成功构建出Lenti-shmRPS3a慢病毒载体,病毒滴度为6-9×10₇TU/ml;RT-PCR表明Lenti-shmRPS3a的沉默效率高达72.64%、Western Blot证明RPS3a蛋白水平表达降低;流式细胞术证明感染了Lenti-shmRPS3a慢病毒载体的细胞凋亡率较对照组明显升高。结论 表达小鼠核糖体蛋白S3a shRNA慢病毒载体能有效沉默RPS3a基因表达,促进细胞凋亡。     

结核抗原ESAT-6基因的克隆及在大肠埃希菌中的表达

目的：将结核分支杆菌ESAT抗原编码区基因克隆，并使其在大肠埃希菌中表达。方法：培养并抽提结核分支杆菌基因组，采用聚合酶链反应（PCR）扩增编码ESAT的全长cDNA，并插入到原核表达载体pGEX5T中，构建pGEX5T-ESAT重组质粒，IPTG诱导使该基因在k802菌中表达，并免疫印迹（Western blot)方法确证表达蛋白的特异性。结果：PCR扩增获得了单一的条带，大小约0.3kb；全自动测序与Genbank中登录的序列完全相同。获得了pGEX5T-ESAT重组子并在k802菌中表达，该蛋白可被结核病患者血清特异地识别。结论：扩增和克隆结核杆菌ESAT抗原的全长cDNA并在大肠埃希菌中获得表达，为进一步研究其在结核病诊断和防治中的应用打下了基础。     

开口柱面换能器声场分析

目的:聚焦超声治疗妇科浅表组织疾病中存在聚焦换能器和定位探头同时放置的问题,在实际的治疗头设计中必须考虑放置B超探头对聚焦声场的影响,本文涉及一种开口柱面换能器聚焦超声声场的数值计算与仿真,通过计算得出声场的三维空间分布,同时研究柱面自聚焦换能器中不同开口形状、位置、面积大小对声场的影响,以指导开口换能器的实际设计。方法:本文通过建立三维直角坐标系,应用Rayleigh积分得出柱面换能器聚焦区域内每一点的声强表达式,运用C语言和matlab采用变步长辛卜生二重积分的方法对开口柱面聚焦超声换能器的声场进行了数值计算和仿真,得出声场的三维分布。结果:对开口的不同形状、大小、位置的声场分布仿真结果表明:不同开口形状都会使聚焦区域声压幅值下降,开口半径增大,声压表现为下降的趋势,Z轴向的声压在换能器的边缘较大,中间小。随着开口中心位置距原点的距离越大,Z轴向的声压分布越不均匀,而对聚焦位置影响不大。结论:通过不同开口参数对声场三维分布影响可以看出:柱面超声换能器的开口形状、位置、面积对聚焦区域的声压均有明显影响。与给定的条件相比,选择位置居中、面积较小、的换能器,能使聚焦性能得到提高,而换能器的开口形状对聚焦效果影响不大。     

卡介菌基因组DNA和卡介菌多糖核酸免疫调控活性的比较

目的:比较研究卡介菌(Mycobacterium bovis Bacillus Calmette-Guérin, BCG)基因组DNA(BCG-DNA)和卡介菌多糖核酸(BCG-PSN)的免疫调控活性.方法:制备高纯度的BCG-DNA,小鼠脾细胞 (splenocyte)和人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)分别与BCG-DNA和 BCG-PSN共同培养72 h,采用ELISA方法检测细胞培养上清中IFN-γ的水平. 结果:所制备的BCG-DNA纯度较高,DNA含量达95.3%.琼脂糖电泳显示:BCG-DNA片断大小集中于200～250 bp.ELISA结果表明BCG-DNA与BCG-PSN均可显著激活小鼠脾细胞和人外周血单个核细胞,有效诱导IFN-γ的产生(P＜0.01).当浓度达10 μg/ml以上时,BCG-DNA免疫调控作用优于BCG-PSN(P＜0.01).结论:BCG-DNA 可显著诱导Th1型细胞因子IFN-γ的产生,具有较强的免疫调控活性.     

课题式教学在基因工程药物教学中的应用

基因工程药物课程内容庞杂,理论体系复杂且实践性强,单纯采用传统课堂讲授式教学难以达到理想的教学效果.介绍了在基因工程药物教学中引入课题式教学法以提高教学质量的一些做法,不仅可以使学生更加深刻地理解基因工程药物相关的概念、原理,还可以提高获取知识的兴趣和能力,培养科学研究的思维和创新意识,增强交流沟通、团队合作等多方面的综合素质.     

苦参碱对纤维蛋白纤维蛋白原降解产物诱导血管细胞损伤、增殖及腹腔巨噬细胞释放IL-1的影响

目的：研究苦参碱(Mat)对纤维蛋白纤维蛋白原降解产物(FFDP)作用的影响。 方法：大鼠主动脉内皮细胞损伤以乳酸脱氢酶释放测定;大鼠主动脉平滑肌细胞增殖采用结晶紫染色法测定;白细胞介素-1活性采用小鼠胸腺细胞增殖法测定。结果：FFDP能促进大鼠主动脉内皮细胞释放乳酸脱氢酶,诱导大鼠主动脉平滑肌细胞增殖,并促使小鼠腹腔巨噬细胞分泌IL-1增加。结论：Mat可抑制FFDP的作用。对动脉粥样硬化的防治可能有一定意义。     

硬膜外注射芬太尼、阿芬太尼和吗啡术后镇痛效果比较

硬膜外间断注药镇痛法,往往因局麻药追加不及时,达不到令人满意的效果。硬膜外滴注镇痛法可克服此缺点,且副作用比间断注射少而轻,故有取代趋势。 1 治疗方法 经T_8～L_3间隙行硬膜外穿刺置管,以0.5％布比卡因进行麻醉和手术。术后当患者主诉明显疼痛时,随机双盲法从硬膜外导管经     

肿瘤坏死因子对牛肺动脉内皮细胞的损伤及蛋白激酶C抑制剂的抑制作用

研究表明:肿瘤坏死因子(TNF)可剂量依赖地引起牛肺动脉内皮细胞乳酸脱氢酶释放率(LDH%)升高,促进中性粒细胞向内皮细胞粘附,并可抑制内皮细胞增殖和DNA合成。蛋白激酶C(PKC)抑制剂1-(5-异喹啉磺酰基)-2-甲基哌嗪(H-7)和槲皮素一方面可剂量依赖地抑制TNF对内皮细胞的直接损伤,另方面又可通过抑制TNF诱导的中性粒细胞对内皮细胞粘附增加,减轻TNF对内皮细胞的间接损伤作用,同时还可抑制TNF对内皮细胞增殖和DNA合成的影响,从而间接加强内皮细胞对损伤的自我修复。     

Inhibitory effect of matrine on tumor necrosis factor production and protein kinase C activity

ＩｎｈｉｂｉｔｏｒｙｅｆｆｅｃｔｏｆｍａｔｒｉｎｅｏｎｔｕｍｏｒｎｅｃｒｏｓｉｓｆａｃｔｏｒｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎａｎｄｐｒｏｔｅｉｎｋｉｎａｓｅＣａｃｔｉｖｉｔｙＺｈａｎｇＪｕｎｐｉｎｇ（张俊平）；ＨｕＺｈｅｎｌｉｎ（胡振林）；ＬｉｎＷｅｎ（林文）；...