维生素D_3治疗反复呼吸道感染的临床观察

<正> 反复呼吸道感染是严重危害小儿健康成长的常见病,诸多资料报道与机体免疫功能密切相关,笔者1998年1月～12月随机抽样反复呼吸道感染儿(简称复感儿)使用维生素D_3(简称VD_3)治疗随访观察,报告如下。     

慢病毒介导的双自杀基因诱导胃癌细胞凋亡的研究

目的 观察慢病毒介导的KDR启动子驱动的CD/TK双自杀基因体系对胃癌细胞SGC-7901的体外杀伤作用.方法 用重组慢病毒FGW-KDRP-CD/TK体外感染SGC-7901细胞.噻唑蓝(MTT)比色法检测前药对细胞的杀伤效应;透射电镜及流式细胞术观察细胞凋亡及细胞内DNA含量.结果 慢病毒的感染率随病毒滴度的增高而递增.当前药更昔洛韦(GCV)为100 mg/L、5-氟胞嘧啶(5-FC)为320 mg/L时,对未转基因及转基因细胞的抑制率分别为18%、94%,两者筹异有统计学意义(P<0.01).电镜下用药组出现细胞凋亡.流式细胞仪检测显示,随着药物浓度的增加,凋亡细胞所占的比例逐渐增加.结论 KDR启动子可调控双自杀基因系统选择性杀伤SGC-7901细胞,并且该体系可以诱导胃癌细胞凋亡.     

靶向抑制CXCR7基因表达对结肠癌生长的影响

目的探讨靶向抑制CXCR7基因表达对人结肠癌荷瘤裸鼠瘤体生长的影响。方法建立人结肠癌荷瘤鼠模型。将人结肠癌荷瘤裸鼠随机分为3组,治疗组：瘤体内注射LV-CXCR7shRNA 50μl;阴性对照组：瘤体内注射LV-shRNA negative control 50μl;空白对照组：瘤体内注射PBS 50μl。24天后测量瘤体的体积;处死动物,剥离瘤体,测量其重量。采用Westrn Blotting方法测定瘤体组织中CXCR7蛋白表达水平。结果治疗组瘤体体积显著缩小（P〈0.05）、重量显著减轻（P〈0.05）。治疗组瘤体组织中CXCR7蛋白表达水平显著降低（P〈0.05）。结论靶向抑制CXCR7基因的表达能显著抑制人结肠癌荷瘤裸鼠的瘤体生长,CXCR7是人结肠癌治疗潜在的分子靶标。     

青蒿琥酯诱导瘢痕成纤维细胞凋亡的实验研究

目的探讨青蒿琥酯（artesunate，Art）诱导皮肤瘢痕成纤维细胞凋亡的作用及机制。方法取自愿捐献的人耳垂增生性瘢痕，采用组织块贴壁法进行细胞培养。经免疫组织化学染色鉴定后，取第3～5代成纤维细胞，采用含60、120和240mg／LArt培养液各5ml培养作为实验组，仅加入等量的培养液作为对照组。于倒置显微镜及透射电镜观察，采用流式细胞仪观察细胞凋亡及细胞周期。另取第3～5代成纤维细胞，实验组采用30、60和120mg／LArt培养液，对照组仅加入等量的培养液，观察细胞内钙离子的变化。结果原代成纤维细胞呈典型的梭形贴壁生长，免疫组织化学鉴定细胞波形蛋白呈阳性表达；倒置显微镜下观察Art在60～240mg／L浓度范围内抑制成纤维细胞生长且呈剂量及时间依赖性，细胞出现凋亡征象；透射电镜观察，各实验组出现染色质浓缩，沿着核膜排列，甚至核碎裂现象。细胞周期分析显示各实验组与对照组比较，凋亡细胞比例、处于G0～G1、S、G2～M期细胞数差异均有统计学意义（P〈0．05），实验组均出现典型的凋亡峰，且随药物浓度增加，峰值越大。Art在30～120mg／L作用成纤维细胞24h可引起细胞内钙离子浓度持续增加，与对照组比较，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论Art通过作用于成纤维细胞周期诱导细胞凋亡，细胞内钙离子浓度升高可能是其诱导成纤维细胞凋亡的机制之一。     

槲皮素诱导下乳腺癌细胞对三苯氧胺耐药的增敏效应

目的探讨槲皮素对逆转乳腺癌细胞内分泌耐药的应用价值。方法选用雌激素受体阳性的人乳腺癌细胞株MCF-7,高浓度短时间冲击法建立三苯氧胺(tamoxifen,TAM)耐药细胞株(MCF-7Ca/TAM-R)。根据槲皮素给药浓度将实验组MCF-7Ca/TAM-R细胞分为实验1组(10μmol/L)、实验2组(25μmol/L)和实验3组(50μmol/L),各浓度组再分成2个亚组:槲皮素+OHT(4-hydroxytamoxifen,4-OH-TAM)同时干预组、槲皮素干预12 h后加入OHT序贯干预组;阴性对照组加入OHT;空白对照组不加任何药物。噻唑蓝法(MTT)检测各组细胞的增殖抑制率,流式细胞术检测各组细胞的凋亡。结果高浓度短时间冲击法成功建立人乳腺癌三苯氧胺耐药细胞株。各实验组细胞均有不同程度的增殖抑制和凋亡(P=0.000),该效应随槲皮素诱导剂量的递增而增强(P=0.000);低剂量(10μmol/L)用药对耐药细胞的增殖和凋亡无显著影响(P>0.05和P>0.002),槲皮素和三苯氧胺同时或序贯给药差异亦无统计学意义(P>0.05和P>0.002)。结论在槲皮素诱导下,三苯氧胺对耐药细胞的增殖抑制和凋亡效应随槲皮素诱导剂量的增加而增强,提示槲皮素可能具有逆转乳腺癌细胞对三苯氧胺的耐药性,该效应与槲皮素和三苯氧胺同时或序贯给药无关。     

经胸乳入路腔镜甲状腺手术的临床应用

目的 探讨胸乳入路腔镜甲状腺手术的临床应用价值.方法 回顾分析2009年8月～2012年7月52例经胸乳入路腔镜甲状腺手术的临床资料.结果 52例手术均成功,其中甲状腺腺瘤切除术11例,单侧甲状腺部分或大部分切除术33例,双侧甲状腺大部分切除术8例.平均手术时间95m in(75～130m in),术中出血量25 mL(15～40 mL),术后住院时间6d(5～7d).术后无严重并发症.52例随访1～6个月,无复发,所有患者对美体效果满意.结论 胸乳入路腔镜甲状腺手术安全、可行,值得临床推广.     

CXCR7-shRNA慢病毒表达载体对人结肠癌细胞生物学特性的影响

目的 探讨CXCR7-shRNA慢病毒表达载体靶向抑制CXCR7的表达对人结肠癌细胞增殖、迁移活性的影响.方法 将人结肠癌细胞HT-29分为实验组、阴性对照组和空白对照组;实验组加入CXCR7-shRNA慢病毒表达载体;阴性对照组加入CXCR7-shRNA慢病毒阴性对照;空白对照组不做任何处理.Westrn blot方...     

槲皮素对内分泌耐药乳腺癌三苯氧胺治疗增敏作用的体内研究

目的:探讨槲皮素(QUE)对内分泌耐药乳腺癌三苯氧胺(TAM)治疗的增敏作用。方法:用大剂量TAM冲击法构建TAM耐药乳腺癌细胞株MCF-7/TAM-R并移植裸鼠后,将荷瘤鼠随机分为4组,分别给予溶媒(对照组)、QUE 50 mg/kg 1次/2 d(QUE组)、TAM 5 mg/kg 1次/d(TAM组)、QUE 50 mg/kg 1次/2 d+TAM 5 mg/kg 1次/d(QUE+TAM组)处理,动态观测各组荷瘤鼠的一般情况与瘤体体积的变化,于给药21 d后,处死各组荷瘤鼠,检测瘤体质量及瘤组织ERα、HER-2、pMAPK、MAPK、pAkt、Akt蛋白的表达。结果:给药过程中,QUE+TAM组和QUE组裸鼠摄食减少、体质量减轻,对照组与TAM组裸鼠无明显异常;至第12天开始,QUE+TAM组瘤体生长呈下降趋势,且第21天明显下降(P0.05),其余各组瘤体均呈持续增长。与对照组比较,QUE+TAM组瘤体质量明显减轻(P0.05),而其余两组均无统计学差异(均P0.05);QUE+TAM组和QUE组瘤组织中ERα蛋白高表达,HER-2、pMAPK、pAkt蛋白低表达,而TAM组上述蛋白表达均无明显差异,各组非磷酸化的MAPK、Akt蛋白表达均无明显差异。结论:QUE能恢复内分泌耐药乳腺癌对TAM的敏感性,可能与其下调HER-2及其下游信号pMAPK、pAkt的表达,并上调ERα的表达有关;QUE有潜在的毒副作用,其安全范围及有效剂量有待进一步探讨。     

VEGF介导的双自杀基因系统对乳腺癌细胞的靶向杀伤作用

目的 探讨腺病毒介导VEGF启动子驱动的CD/TK双自杀基因体系(Ad-VEGFP-CD/TK)对乳腺癌细胞MCF-7的体内外靶向杀伤作用。方法 用重组腺病毒Ad-VEGFP-CD/TK体外感染表达VEGF的MCF-7细胞和不表达VEGF的原代培养的乳腺上皮细胞,荧光显微镜观察其感染效率,然后给予前药GCV和5-FC,用MTT法观察该体系对细胞生长增殖的影响及其旁观者效应;用流式细胞术观察细胞周期及细胞内DNA含量的变化。建立MCF-7裸鼠皮下移植瘤模型,瘤内注射Ad-VEGFP-CD/TK,腹腔注射前药GCV(50mg/kg•d)和5-FC(500mg/kg•d)14天,观察肿瘤生长抑制效应。结果 腺病毒对两种细胞的感染率相似,其感染率随腺病毒滴度的增高而递增。MTT法检测显示表达VEGF的MCF-7细胞对前药具有较高的敏感性,而不表达VEGF的乳腺上皮细胞对前药不敏感,且观察到该体系对MCF-7细胞明显的旁观者效应。在感染复数为100时,用流式细胞仪测定用药组出现典型的凋亡峰;细胞周期分析显示治疗后细胞G0-G1期比率增多,G2-M及S期细胞减少。在MCF-7裸鼠移植瘤模型中,该双自杀基因系统能够显著抑制肿瘤的生长。结论 VEGF启动子可调控双自杀基因体系选择性杀伤人乳腺癌细胞MCF-7并诱导细胞凋亡,并可显著抑制人乳腺癌裸鼠移植瘤的生长。     

AdVEGF-CDglyTK融合基因系统靶向治疗大肠癌的研究

目的 观察腺病毒介导的血管内皮细胞生长因子(VEGF)启动子驱动的CDglyTK融合双自杀基因系统(以下简称为AdVEGF-CDglyTK)对大肠癌的治疗作用,并结合研究结果进行作用机制的分析.方法 采用培养细胞移植法,将人大肠癌细胞系Lovo细胞接种于裸鼠背部皮下,建立裸鼠人大肠癌移植瘤模型.将20只裸鼠随机分为4组,每组5只.分组方法:Ⅰ组,注射重组腺病毒AdVEGF-CDglyTK与前药5氟胞嘧啶(5-FC)/丙氧鸟苷(GCV);Ⅱ组,仅注射前药5-FC/GCV;Ⅲ组:仅注射重组腺病毒AdVEGF-CDglyTK;Ⅳ组,空白对照,不施加任何处理.结果 RT-PCR结果显示:仅在Ⅰ组、Ⅲ组扩增出融合双自杀基因CDglyTK的片段.表型及各项病理指标的检测均显示第Ⅰ组裸鼠移植瘤的生长较其他3组显著受到抑制,而第Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组移植瘤的生长情况无明显差异;第Ⅰ组肿瘤细胞凋亡指数为38.65%±4.20%,较其他3组显著增加(F=397.530,P=0.000);第Ⅰ组肿瘤组织微血管密度计数为3.08±0.79,较其他3组显著减少(F=34.081,P=0.000).结论 AdVEGF-CDglyTK联合前药5-FC及GCV在体内可明显抑制大肠癌肿瘤的生长.其机制有二:首先该治疗系统可诱导裸鼠体内人大肠癌Lovo细胞的凋亡;其次该治疗系统在体内可明显抑制裸鼠体内大肠癌血管形成.