聚乙烯醇-胶原凝胶研制及作为组织替代材料的生物相容性性

背景:聚乙烯醇对细胞黏附能力有限,在聚乙烯醇中加入胶原蛋白能否改善其细胞的黏附性?目的:研制一种新型的聚乙烯醇-胶原复合材料,并探讨其作为软组织替代材料的可行性.设计:单一样本观察.单位:暨南大学医学院附属广州市红十字会医院,广州市创伤外科研究所.材料:选用15只新西兰大白兔,体质量2.0～3.0 kg,雌雄不拘,由广东省医学实验动物中心提供.实验过程中对动物的处置符合动物伦理学标准.广州市创伤外科研究所市级实验室完成.牛Ⅰ型胶原购自广州创尔生物技术有限公司,聚乙烯醇-124购自广州南方化玻仪器公司. 方法:实验于2003-07/2006-12在暨南大学医学院附属广州市红十字会医院完成.①聚乙烯醇-胶原材料制备:配制5g/L的牛Ⅰ型胶原与5%的聚乙烯醇-124以1:1混合,真空冷冻干燥成为凝胶状,扫描电镜观察其内部结构.②细胞毒性试验:聚乙烯醇-胶原材料剪成10mm×5mm×1 mm小片,γ射线消毒后,分别放入48孔平板中,每孔加入1×104个3T3细胞培养,扫描电镜观察细胞的生长状况.③体内埋植试验:将实验兔背部脊柱两侧各作2个纵切口,形成皮下腔隙.分别于手术形成的皮下腔隙植入4块聚乙烯醇-胶原材料,分别于术后1,4,8周各取3只实验共9块标本及其周围组织作病理观察.主要观察指标;扫描电镜观察凝胶膜内部结构、细胞毒性试验及体内埋植试验结果.结果:①聚乙烯醇-胶原材料内部结构:真空冷冻干燥的聚乙烯醇-胶原为白色的凝胶,扫描电镜见其表面和切面内部有贯通的三维孔隙.②细胞毒性试验结果; 313细胞在PVA-胶原材料上能三维生长、形态正常.③体内埋植试验结果:聚乙烯醇-胶原植入1周后,产生了正常的异物反应,材料与组织界限分明.4周后,只见极少量淋巴细胞浸润,大量的纤维母细胞增生形成胶原纤维和假单层立方上皮细胞包裹材料.8周未见淋巴细胞浸润、中性粒细胞和异物巨细胞,囊壁致密,大量的纤维母细胞增生形成包膜包裹材料.16周可见囊壁致密,胶原纤维变长,捧列规则,核变小,呈长卵圆形或长梭形,无新生小血管,无淋巴细胞、中性粒细胞和异物巨细胞浸润,囊壁稳定、变薄.结论:聚乙烯醇-胶原材料无毒副作用,具有良好的细胞相容性与组织相容性,可安全地应用于体内移植.     

透明质酸钠预防骨关节炎时Ⅱ型胶原抗体水平的动态变化

背景研究表明透明质酸钠可作用于机体免疫系统,调节免疫细胞分泌细胞因子变化,从而抑制炎症,对治疗早期骨关节炎具有一定疗效.目的观察关节腔内注射透明质酸钠预防膝骨关节炎过程中对Ⅱ型胶原抗体水平的影响及其动态变化.设计随机对照观察.单位广州市红十字会医院创伤外科研究所.材料实验于2002-03/08在广州市创伤外科研究所动物及免疫室完成.选用成年新西兰大白兔12只.方法取12只成年新西兰兔制备Hulth膝骨关节炎动物模型,随机等分为两组,透明质酸钠组和生理盐水对照组.透明质酸钠组术后当时及每2周关节内注射10g/L透明质酸钠1 mL至12周;对照组注射生理盐水1 mL为对照.各组术前及术后每隔2周收集血清,建立间接夹心酶联免疫吸附法,检测Ⅱ型胶原抗体水平.主要观察指标对比分析不同时期实验组与生理盐水对照组预防兔膝骨关节炎血清Ⅱ型胶原抗体水平的动态变化及两组组内各时期Ⅱ型胶原水平与术前的比较.结果所有实验数据均来自12只新西兰大白兔实验结果统计数据.透明质酸钠组术后第6,10,12周Ⅱ型胶原抗体水平与术前比较均显著提高(P＜0.05);生理盐水对照组Ⅱ型胶原抗体水平第10周显著高于术前(P＜0.05);透明质酸钠组与生理盐水对照组同期比较Ⅱ型胶原抗体水平均无显著差异.结论骨关节炎使机体产生自身免疫,引起自身Ⅱ型胶原抗体水平增加.透明质酸钠能促进体液免疫应答,导致抗体水平进一步升高.提示注射透明质酸钠治疗膝骨关节炎时,应考虑其免疫调节作用.但值得一提的是,透明质酸钠为糖胺多糖本身不具备产生特异性Ⅱ型胶原抗体的免疫原性,它究竟通过何种途径调节体液免疫应答有待于进一步深入观察.     

透明质酸钠预防骨关节炎时Ⅱ型胶原抗体水平的动态变化

背景：研究表明透明质酸钠可作用于机体免疫系统，调节免疫细胞分泌细胞因子变化，从而抑制炎症，对治疗早期骨关节炎具有一定疗效。目的：观察关节腔内注射透明质酸钠预防膝骨关节炎过程中对Ⅱ型胶原抗体水平的影响及其动态变化。设计：随机对照观察。单位：广州市红十字会医院创伤外科研究所。材料：实验于2002-03／08在广州市创伤外科研究所动物及免疫室完成。选用成年新西兰大白兔12只。方法：取12只成年新西兰免制备Hulth膝骨关节炎动物模型，随机等分为两组，透明质酸钠组和生理盐水对照组。透明质酸钠组术后当时及每2周关节内注射10gL透明质酸钠lmL至12周；对照组注射生理盐水lmL为对照。各组术前及术后每隔2周收集血清，建立间接夹心酶联免疫吸附法，检测Ⅱ型胶原抗体水平。主要观察指标：对比分析不同时期实验组与生理盐水对照组预防兔膝骨关节炎血清Ⅱ型胶原抗体水平的动态变化及两组组内各时期Ⅱ型胶原水平与术前的比较。结果：所有实验数据均来自12只新西兰大白兔实验结果统计数据。透明质酸钠组术后第6，10，12周Ⅱ型胶原抗体水平与术前比较均显著提高（P〈0。05）；生理盐水对照组Ⅱ型胶原抗体水平第10周显著高于术前（P〈0．05）；透明质酸钠组与生理盐水对照组同期比较Ⅱ型胶原抗体水平均无显著差异。结论：骨关节炎使机体产生自身免疫，引起自身Ⅱ型胶原抗体水平增加。透明质酸钠能促进体液免疫应答，导致抗体水平进一步升高。提示注射透明质酸钠治疗膝骨关节炎时，应考虑其免疫调节作用。但值得一提的是，透明质酸钠为糖胺多糖本身不具备产生特异性Ⅱ型胶原抗体的免疫原性，它究竟通过何种途径调节体液免疫应答有待于进一步深入观察。     

猪软骨Ⅱ型胶原的生物相容性研究

目的对所提取的猪软骨II型胶原进行生物相容性的研究,评价其作为医用生物材料的安全性。方法通过急性毒性试验、刺激性试验、过敏性试验、溶血性试验及体外软骨细胞相容性等试验进行检测。结果急性毒性试验、刺激性试验、过敏性试验和溶血性试验的结果均呈阴性。体外软骨细胞相容性试验:软骨细胞能增殖及传代,且前6代的细胞基本都能呈原代的形态特点,随着培养时间的延长和代数的增加,成纤维状细胞才出现并逐渐增多。而且原代培养的软骨细胞有大量糖胺多糖合成,传代的代数越多,软骨细胞合成糖胺多糖的能力也愈弱。结论猪软骨Ⅱ型胶原具有良好的生物相容性,是可以安全使用的医用生物材料。     

胶原壳聚糖医用海绵疗效特征探讨

AIM: To investigate the hemostaaia effect of hemostasis sponge of collagen and chitosan compound invitro and in vivo. METHODS: The hemostasis sponge of collagen and chitosan compound was made by mixing collegen I ertracted by enzymelytic methods and crosslinked by glutaric dialdeiyde and then lyophilized. The New Zealand rabbit were created with a 1 cm×1 cm wound in the center artery of the ear. The center artery of the ear were transected and record the hemostasis time since pressured with hemostasis sponge of collagen and chitosan compound and observe its effects. In other experiements, 1 cm×1 cm bleeding wound were established in the liver of the rabbit Then pressured with hemostasis sponge of collagen and chitosan compound on the wounds and record the hemostasis time; The four comer of the hemostasis sponge of collagen and chitosan compound were sutured to investigate the absorption situation with the control of gelatin treated with same procedures. RESULTS: The bleeding time using hemostasis spon     

广州市创伤外科研究所

广州市创伤外科研究所是广州市医疗机构重点建设专科，骨科和烧伤整形科是研究所的两大临床研究基地。经过几代人努力，研究所已逐渐形成“基础研究与临床实践紧密结合，研究和应用互相促进，共同发展”的鲜明特色，是目前省内唯一一家同时具有基础与临床，以创伤和修复为主攻方向的研究单位。多年来承担了多项国内外科研项目，开展了运动创伤、骨与关节损伤修复、创面感染微生态学，其中韧带与关节的研究、胶原蛋白的研究与开发等项目，在全国处于领先地位。学科带头人：陈鸿辉所长系德国柏林自由大学医学博士。擅长创伤和关节外科，在矫形…     

结晶紫比色法检测表皮生长因子生物活性的探讨

结晶紫比色法检测表皮生长因子生物活性的探讨叶春婷李斯明查健群黄建鸣马云鹏表皮生长因子（ＥｐｉｄｅｒｍａｌＧｒｏｗｔｈＦａｃｔｏｒ，ＥＧＦ）对多种组织来源的细胞增殖有明显促进作用。随着提取方法的改进和生物工程产品开发的日益普遍，ＥＧＦ生物活性的检测越显...     

Caspase 3 siRNA抑制关节软骨细胞的凋亡

背景:到目前为止,国内外对caspase 3抑制剂的研发大都集中在肽类或非肽类化合物的合成和发现上,而利用RNAi干扰技术直接沉默caspase 3基因,在基因水平抑制软骨细胞凋亡还未见报道.目的:利用慢病毒载体,把Caspase 3 siRNA转入软骨细胞,使其caspase 3基因沉默,相对阻断凋亡效应的联级反应,期望达到抵抗软骨细胞凋亡的目的.设计、时间及地点:单一样本观察,于2008-06/2009-06在暨南大学医学院附属广州市红十字会医院,广州市创伤外科研究所完成.材料:软骨细胞从SPF级SD大鼠关节中提取,caspase 3 siRNA慢病毒载体为实验构建.方法:构建大鼠pSIH1-H1-copGFP-Caspase 3 siRNA表达质粒,使用慢病毒包装系统,在293TN细胞中进行包装生产含caspase 3 siRNA的慢病毒颗粒,然后转导(transduce)入大鼠软骨细胞.主要观察指标:实时荧光定量-聚合酶链反应和Western blot检测转导后软骨细胞caspase 3 基因沉默情况,再用肿瘤坏死因子α诱导软骨细胞凋亡,流式细胞技术Annexin V/ PI检测软骨细胞凋亡情况.结果:Caspase 3 siRNA能顺利转入软骨细胞,转导率达90%;实时荧光定量-聚合酶链反应检测软骨细胞中Caspase 3 mRNA的表达量,实验组低于与对照组差异有显著性(P < 0.01);Western blot检测软骨细胞的Caspase 3蛋白表达量,实验组低于与对照组差异有显著性意义(P < 0.01);在使用肿瘤坏死因子α诱导软骨细胞凋亡时,caspase 3 siRNA转导组抑制细胞凋亡的能力是对照组的7倍.结论:利用慢病毒载体把caspase 3 siRNA转入软骨细胞,使软骨细胞的caspase 3 基因沉默,可以达到相对拮抗软骨细胞凋亡的目的.     

复合Ι型胶原海绵创伤止血的动物实验研究

目的 探讨猪脚肌腱提取的I型胶原与壳聚糖混合，交联冻干后形成的复合I型胶原海绵对创伤创面出血的止血效果。方法 用新西兰大白兔作实验动物，对其皮下出血、体表浅动静脉断裂损伤、肝损伤进行止血试验，同时与明胶海绵、纱布等止血效果作比较，观察其止血时间、敷料与创面的粘合等情况，并定期观察创面愈合和体内吸收情况。结果 本试验表明：复合I型胶原海绵的止血时间约2分钟，明胶海绵为3．5分钟，纱布压敷为10分钟以上；复合I型胶原海绵和明胶海绵均能在体内降解吸收。结论 复合I型胶原海绵止血效果最好，无论是止血时间、止血效果、与伤口的粘附能力都优于其他2种材料，并能在体内降解吸收，因此，是一种较理想的创伤止血材料。