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1.
2.
成人动脉和心脏cDNA文库的构建及新全长cDNAs的克隆   总被引:14,自引:0,他引:14  
目的 :构建成人动脉和心脏互补脱氧核糖核酸 (c DNA)文库 ,克隆多个新的全长互补脱氧核糖核酸 (c DNAs)。  方法 :应用成人动脉和心脏组织 ,采用 Stratagene的建库试剂盒构建 c DNA文库。将随机克隆 5 '端表达序列标签序列与 Gen Bank/ EMBL/ DDBJ数据库进行同源性比较 ,新的全长 c DNAs采用步移法完成全序列测定获得。  结果 :所建动脉 c DNA文库包含 2 .4× 10 6个独立重组克隆 ,插入片段平均长度为 2 .0 kb;心脏 c DNA文库包含 1.0× 10 6个独立重组克隆 ,平均长度为 1.8kb。首批得到了 8条新的全长 c DNAs,已在 Gen Bank登记注册。  结论 :构建符合要求的 c DNA文库是克隆新的全长 c DNAs的一条快速有效的途径。  相似文献   
3.
目的:观察构建的含胞嘧啶脱氨酶/单纯疱疹病毒-1-胸苷激酶(CD/TK)双自杀基因的重组腺病毒对血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖的影响。方法:将含CD/TK单、双自杀基因的重组腺病毒感染培养至3-5代的大鼠VSMCs。荧光显微镜观察报告基因绿色荧光蛋白的数量确定感染效率。用MTT法检测前体药物对各转基因组细胞增殖的抑制作用。结果:单、双自杀基因组腺病毒均可100%感染VSMCs。当感染复数(M.0.I)为10时,双自杀基因组靶细胞的存活率仅10%,明显低于腺病毒(Ad)-TK(43%)和Ad-CD(64%)单基因组(P<0.05)。当M.O.I≤20时双自杀基因能够对细胞产生最大(90%)杀伤而CD、TK单基因组和单基因共转染组则不能,而且双基因组所需前体药物的浓度(无环鸟苷0.1μg/ml,5-氟胞嘧啶10μg/ml)低于单基因组(无环鸟苷0.5μg/ml,5-氟胞嘧啶50μg/ml)。双基因组的TK或CD基因单独作用时对细胞的抑制作用接近或低于相应的单基因组。结论:双自杀基因共表达腺病毒载体对VSMCs的抑制作用、安全性及可调控性均优于单基因。  相似文献   
4.
双基因共表达在血管再狭窄研究中的应用   总被引:2,自引:0,他引:2  
目的 观察携带反义凝血酶受体(ATR)和p21的双基因载体共表达后对血管平滑肌细胞增殖的抑制作用,为再狭窄基因治疗寻求新途径。方法 以携带ATR或/和p21的单、双基因载体重组腺病毒伴随病毒(rAAV)感染培养的人主动脉平滑肌细胞(hASMC),用半定量RT-PCR检测各基因的整合与表达,MTT法测定病毒感染后不同时间点的细胞存活率。将携带AP双基因的rAAV导入WKY大鼠拉伤侧的颈总动脉,免疫组织化学法分别检测凝血酶受体(TR)和p21两基因在动脉壁中的表达。结果 RT-PCR结果显示,TR单基因的mRNA表达降低,p2l单基因表达升高,AP双基因得到了共表达;MTT法测定的生长曲线显示,双基因对hASMC增殖的抑制作用大于两个单基因;免疫组织化学证实,AP双基因导入后,TR基因的表达受到完全抑制,p2l基因的表达明显增加,血管新生内膜与平滑肌细胞的增殖受到了抑制。结论 ATR和p21双基因共表达在体外可明显抑制ASMC的增殖,在体内可明显抑制血管内膜新生和中膜的增生。  相似文献   
5.
目的:分析血浆肾素活性(PRA)、血浆血管紧张素原(AO)浓度与原发性高血压的关系。方法:在一个原发性高血压家系中随机抽取原发性高血压患者31例(原发性高血压组)、正常血压者25例(家系对照组),在6个正常对照家系中随机抽取21例(正常对照组),测定PRA、血浆AO及其它代谢因素。结果:调整年龄、性别、体重指数后原发性高血压家系内无论有无原发性高血压患者,PRA均显著低于正常对照组(P<005);原发性高血压组血浆AO显著高于正常对照组(P<005),高密度脂蛋白胆固醇显著低于正常对照组(P<005)。结论:具有原发性高血压遗传因素者无论是否患有原发性高血压均有显著的PRA、血浆AO异常和其它代谢紊乱,这些异常可能在超重和原发性高血压发生前即已存在  相似文献   
6.
以培养的自发性高血压大鼠(SHR)和正常血压(WKY)大鼠主动脉平滑肌细胞(ASMC)为模型,采用Northern印迹和逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术分别检测ASMC中血管紧张素原(Ang N)和血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)的AT_1型受体的基因表达,并用紫外法和放射免疫法分别测定培养液中的血管紧张素Ⅰ转换酶(ACE)活性和AngⅡ的含量。结果表明,基础状态及给予外源性碱性成纤维细胞生长因子(bFGF,10 ng/ml)刺激后,SHR的ASMC中上述4种实验参数的水平均明显高于WKY大鼠。提示SHR ASMC中的肾素—血管紧张素系统(RAS)处于高功能状态;bFGF能促进Ang N基因表达、激活ACE,进而导致Ang Ⅱ生成增加,同时它对AT_1受体基因表达也有调节作用,bFGF的上述作用可能是高血压时血管RAS高功能状态发生和维持的一个重要机制。  相似文献   
7.
血管内皮细胞是血管壁的主要组成细胞之一。它既形成了血流与血管壁间的屏障,又能分泌许多体液因子和生物活性物质,参与调节血管收缩、凝血、水盐代谢等许多生理功能。最近的研究表明,血管内皮细胞与动脉粥样硬化(AS)、高血压、血管狭窄性疾病关系密切。内皮细胞的内分泌功能异常时,其分泌的血管舒缩因子和抗血小板粘附因子的变化可引起血管舒缩功能异常和形成血栓;血管内皮细胞的损伤会引起膜受  相似文献   
8.
以培养的自发性高血压大鼠和下沉血压大鼠主动脉平滑肌细胞为模型,采用Northern 印变和逆转录-聚合酶链式反应分别检测ASMC中血管紧张素原和血管紧张素Ⅱ的AT1型受体的基因表达,并用紫外法和放射免疫法分别测定养中的血的基因表达,并用紫外法和放射免疫法分别测定培养管紧Ⅰ转换酶活性和AngⅡ的含量。  相似文献   
9.
为研究卡托普利(CAP)对心血管组织肾素─血管紧张素系统的影响,5周龄雄性卒中型自发性高血压大鼠(SHRsp)随机分为实验组(n=12)及对照组(n=8),分别于食管内喂饲CAP(60mg·kg-1/d)或蒸馏水,每日1次,持续8周。用放射免疫法测定血浆肾素活性、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ),心肌和主动脉平滑肌(ASM)的肾素浓度(RC)和AngⅡ含量。结果显示,实验组血压不升高,心室重/体重比值也低于对照组;心肌和ASM的RC比对照组高;而AngⅡ被明显抑制,分别为7.02±0.96比13.40±5.39(P<0.01)和24.80±4.93比33.65±8.89pg/mg蛋白(P<0.02)。这说明,CAP长期治疗可明显阻止SHRsp的血压上升及心肌肥厚的发生,降低心肌和ASM中AngⅡ含量,提示在这种模型,CAP降压及抗心肌肥厚的重要机制之一是阻断心血管组织局部AngⅡ的生成。  相似文献   
10.
丁金凤 《中国校医》2011,25(11):869+871-869,871
人的素质是指人的基本品质结构,包括思想、知识、身体、心理品质,它是人的知识技能、行为习惯、文化涵养品质特点的综合。校医肩负着学校的健康教育,预防保健工作,常见病治疗,传染病的防疫和疫情报告,食品卫生监督、突发事件的处理等工作。学校的卫生工作的性质决定了校医需具备医生和教师的双重素质。  相似文献   
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