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1.
外源基因在大肠杆菌中表达效率的影响因素 总被引:5,自引:0,他引:5
人们运用基因工程技术已在大肠杆菌中成功地表达了许多重要的生物活性蛋白基因。但不同外源蛋白基因在大肠杆菌中的表达效率差异很大。本文综述了影响外源基因表达效率的一些常见因素,特别是对影响酬译起始的因素给予了更多的关注,同时总结了一些提高外源基因在大肠杆菌中表达效率的行之有效的方法。 相似文献
2.
木瓜蛋白酶制备抗人肝癌单抗F(ab‘)2及Fab片段 总被引:11,自引:3,他引:8
为了制备肝癌McAb HAb18F(ab’)2及Fab片段。用激活的木瓜酶分别在偏酸性和偏碱性条件下消化18h和1h,得到F(ab’)2和Fab片段,经DEAE-40HR阴离子交换色谱柱在Waters650E快速蛋白液相色谱系统(EPLC)上建立相应的纯化方法。该法制备F(ab’)2得率为43%-62%,制备Fab得率42%,其活性用免疫荧光法测定均为1.36×10^-9mol/L。本法操作简单, 相似文献
3.
阴离子交换FPLC制备级化单克隆抗体 总被引:2,自引:0,他引:2
作者采用DEAE-40HR阴离子交换柱,在快速蛋白液相色谱系统(FPLC)建立了IgG类单克隆抗体制备级纯化方法。该法是将McAb腹水经50%饱和硫酸铵盐析粗分离后,再用阴离子交换色谱纯化,一次上样量相当于80~100ml腹水,可得纯化McAb500~600mg,得率为6~7mg/ml腹水,回收率为57~67%,一次纯化周期仅南非45min。经SDS-FAGE检测McAb纯度为95%,ABC染色法 相似文献
4.
肝癌单抗研究应用现状与展望 总被引:10,自引:3,他引:7
肝癌单抗研究应用现状与展望陈志南边惠洁蒋建利Subjectheadingsliverneoplasms/therapy;antibodies,monoclonal/therapeuticuse主题词肝肿瘤/治疗;抗体,单克隆/治疗应用中国图书资料分... 相似文献
5.
应用RT-PCR技术,从分泌抗人肝癌单克隆抗体的杂交瘤细胞HAb18中,扩增出抗体VH和VL连接肽基因,将VH和VL连接成ScFv基因,并进行序列测定,结果表明,VH,VL,linker拼接正确,基因全长为726bp。用噬菌粒表达载体pCANTAB 5E在大肠杆菌中表达了可溶性的ScFv融合蛋白,经流式细胞仪分析表达产物可特异地与肝癌细胞结合,而不与正常肝细胞及胃癌细胞结合。 相似文献
6.
目的:通过分步整合,用巴氏毕赤酵母表达抗人肝癌单克隆抗体(mAb)HAb18的嵌合Fab(cFab)片段。方法:将抗人肝癌mAbcFab/HAb18基因的原核表达载体pET32a/cFab中的CL和Fd段基因,分别亚克隆到酵母表达载体pPIC9K和pPICZαA中,构建重组质粒pPIC9K/CL和pPICZαA/Fd并测序鉴定。将重组质粒pPIC9K/CL和pPICZαA/Fd分步整合到酵母菌GS115的染色体上,经G418和Zeocin筛选高拷贝的转化子及鉴定Mut表型后,用含5mL/L甲醇的培养基诱导表达。结果:成功地表达抗人肝癌mAbHAb18的cFab,表达水平为26mg/L。Westernblot鉴定证实,表达产物具有良好的与HAb18结合的活性和特异性。结论:cFab/HAb18在巴氏毕赤酵母获得表达,为对其进一步大规模的生产和临床应用奠定了基础。 相似文献
7.
作者采用PharmaciaSephacrylS—300凝胶色谱柱,建立了IgG类McAb的一步法制各级纯化方法。该法是将McAb腹水直接上样,用pH7.410mmol/LPBS洗脱(流速0.5ml/min),即得到纯化的McAb。一次上样量40~50ml腹水,回收率为85%-90%.整个纯化周期4h。纯化的McAb经SDS—PAGE测定,纯度>90%,免疫组化ABC法测定活性为1:80000(7.8×10-11mol/L)。该法操作简单、快速,只要有一台核酸/蛋白检测仪,便可进行制备级水平的纯化。 相似文献
8.
冻存细胞计算机管理软件的研制及应用(摘要)杨连君陈志南隋延仿米力曲萍(第四军医大学病理学教研室,西安710032)我们编制了冻存细胞计算机管理软件—CM(CelManager),可对冻存的细胞系或细胞株进行自动管理、查询和统计归类。CM软件的主控程... 相似文献
9.
本文用临床肝癌手术标本,制成细胞悬液,三次免疫BALB/c小鼠,融合产生杂交瘤,用A、B、C染色法筛选单克隆抗体。抗原片为低温石腊切片,获得一株特异性好的杂交瘤一H_(H10)。抗体亚类为小鼠IgG_1。 一、免疫组化染色 肝癌阳性例数37/50;正常肝0/30;肝硬化0/30;肝炎3/50;肝细胞瘤0/2;胃癌0/5;结肠癌1/5;正常成人组织复合片0/3;正常胎儿复合片1/5(心肌~+)。 相似文献
10.