荧光RT—PCR快速检测禽流感病毒H5亚型的研究

本研究根据禽流感病毒H5亚型的RNA4节段，设计、合成多对引物、探针，并通过筛选获得灵敏度、特异性好的组合，在此基础上对荧光RT-PCR反应体系中的各组分进行优化，并建立对各种禽类样品中病毒核酸的提取方法。通过对阳性鸡胚尿囊液及人工攻毒的SPF鸡、肉鸡、肉鸭的各脏器进行检测，并与传统鸡胚病毒分离进行对比，显示该方法与传统鸡胚病毒分离灵敏度接近，但检测时间由原来的21天缩短为4小时。     

含内标的荧光PCR—荧光定量PCR

1.前言 PCR技术应用于体外基因检测是临床诊断学上的一项重大突破,但由于传统的PCR检测易污染、假阳性率高等原因,被国家明令禁止使用于临床检验。为了克服传统PCR的上述缺点,发挥它早期、快速诊断的优点,近年来,发展了多种将传统PCR技术与其它技术结合起来的新型PCR技术,最成功的有PCR与ELISA结合的PCR-ELISA技术和PCR与荧光检测结合的荧光PCR技     

实时荧光PCR方法在A型流感病毒检测中的应用

目的比较流感病毒实时荧光PCR检测(FQ-PCR)方法与常规细胞培养、血凝试验及分型鉴定在流感病毒鉴定中的优劣,以期建立能快速简便、特异地从临床标本中检测并鉴定流感病毒的新方法。方法对76株不同型别的流感病毒分离株进行鉴定,比较两种检测方法的敏感性和特异性;对2倍梯度稀释的A型流感病毒(H1N1亚型、H3N2亚型,各1株)用FQ-PCR方法进行灵敏度检测,同时用常规细胞培养法进行病毒增殖,用血凝试验判断病毒滴度。另外,对临床采集的684份咽拭子样本直接检测,并同时进行常规培养、血凝试验及Quidel试剂检测,综合比较两种监测方法之间的差异。结果在76株流感病毒阳性细胞培养液中,FQ-PCR方法检出A型60份,同分型结果相吻合。FQ-PCR方法的灵敏度约高出常规培养法的25～26倍,无非特异性反应。结论流感病毒FQ-PCR方法具有简便快捷、特异、敏感的特点。     

创伤愈合中表皮再生机理的研究──Ⅰ人创面肉芽的光镜电镜观察

本文从患者创面切取健康肉芽及不良肉芽（水肿性及弛缓性），观察其显微及超微结构。实验结果表明水肿性及弛缓性肉芽的成纤维细胞变性、坏死、新生毛细血管发育不良．这可能是影响表皮再生的重要因素。     

乙型肝炎病毒荧光PCR基因分型方法的建立和应用

[目的]建立一种在临床上准确、快速、简便地对乙型肝炎病毒进行基因分型（BCD三型）的方法。[方法]大量分析已分型的HBV基因组序列，寻找出HBV各基因型的型特异性碱基的分布规律，设计型特异性的引物和探针，利用已知全序列HBV建立荧光PCR的基因分型方法。并与PCR-RFLP及S基因测序等分型方法作比较。[结果]荧光PCR方法对已知基因组序列的HBV分型结果与基因组分析完全一致，利用大量随机临床标本摸索的最佳反应条件为94℃，1min；94℃，10s，60℃，30s，40个循环。与PCR-RFLP相比，分型结果一致性在84．0％；与S基因测序分型相比，一致性为96．2％。[结论]利用荧光PCR能灵敏、快速、准确地进行乙型肝炎病毒基因分型，方便临床应用和流行病学调查。     

实时荧光PCR技术在快速检测植物及其加工产品中转基因成份中的应用

本报道了利用实时荧光PCR技术对若干植物及其加工产品中的转基因成分进行检测、鉴定的结果。首先用一套转基因植物荧光PCR定性试剂盒对这些样品中可能存在的7个目标基因(35S、nog、nptⅡ、pat、bar、FMT、cry3A)进行筛查。对15份已知的样品的检测结果与样品的标准记录完全吻合；在113份未知样品中，检出21份阳性样品。井对其中的5份阳性大豆样品和3份玉米阳性样品进一步进行定量分析，确定了这些样品中转基因成分(GMO)的含量。本同时讨论了实时荧光PCR技术在快速检测植物及其加工产品中转基因成份中的应用，认为荧光PCR技术是适合植物转基因检测、鉴定的一种快速、灵敏、准确的方法。