心肌mtDNA4977缺失与扩张型心肌病猝死的关系

目的探讨扩张型心肌病(DCM)猝死者心肌线粒体DNA(mtDNA)4977缺失情况及其与猝死的关系.方法从近7年尸检案例中挑选11例DCM猝死和14例对照组病例及心肌组织蜡块,按常规方法提取心肌mtDNA,用PCR、琼脂糖紫外凝胶成像技术确定扩增产物激光密度,初步定量检测mtDNA4977缺失率.结果DCM猝死11例中,未成年人2例;成人9例,均为男性,年龄22～49(平均38)岁.对照组14例中,未成年人1例;成人13例,其中男11例,女2例,年龄19～47(平均37.23)岁,死因为机械性损伤和窒息各2例,电击死2例,中毒2例,非心肌病猝死6例.DCM11例(占100%)、对照组2例(占14.28%)检见不同程度的mtDNA4977缺失;两组病例mtDNA4977缺失率均值分别为0.92%和0.09%,差异有统计学意义.结论DCM猝死者心肌可检见mtDNA49 77缺失;其心肌mtDNA4977缺失突变与DCM猝死有关.     

信号转导和转录激活因子6基因多态性与湖北汉族人变应性哮喘的相关性研究

目的　探讨信号转导和转录激活因子 (STAT) 6基因 3′非翻译区G2 96 4A位点多态性和第一外显子GT串联重复序列遗传多态性与湖北汉族人变应性哮喘易感性的关系。方法　用聚合酶链反应 限制性片段长度多态性 (PCR RFLP)技术检测STAT6基因G2 96 4A位点多态性 ;用聚合酶链反应 短串联重复多态性 (PCR STR)技术对STAT6基因第一外显子微卫星进行分型 ,并将PCR产物克隆及测序鉴定 ;采用病例 对照法研究了 1 35例变应性哮喘患者和 1 0 9例对照。结果　 ( 1 )湖北地区汉族人群STAT6基因G2 96 4A位点基因型以GA型最为常见 ;哮喘组与对照组STAT6基因G2 96 4A位点的等位基因频率和基因型频率GG、GA、AA之间差异无统计学意义 (P >0 .0 5)。 ( 2 )STAT6基因第一外显子微卫星多态性共检出GT串联重复次数为 1 3、1 4、1 5、1 6的 4种等位基因 ;第一外显子微卫星的多态性检测出 1 3/1 4基因型在哮喘患者组和正常对照组相比差异具有统计学意义(P =0 .0 0 1 4 )。 ( 3)STAT6基因第一外显子GT二核苷酸串联重复序列多态性中 1 3 GT重复等位基因与 2 96 4A变异体之间存在连锁不平衡 (P =0 .0 0 0 0 2 1 8)。结论　STAT6基因 3′非翻译区G2 96 4A位点多态性与湖北汉族人哮喘易感性无明显相关性 ;第一外显子GT二核苷酸串联重     

砷及MPST过表达对SH-SY5Y细胞GRP78/CHOP通路的影响

目的探讨内质网应激是否参与亚砷酸钠(NaAsO2)神经毒性损伤,明确3-巯基丙酮酸硫转移酶(3-mercaptopyruvate sulfurtransferase,MPST)过表达是否调节砷诱导的内质网应激。方法通过构建MPST基因慢病毒表达载体来获得稳定表达外源MPST基因的SH-SY5Y细胞株作为SH-MPST过表达组,另设空载体转染细胞为SH-PEB组,染砷组(NaAsO2组),内质网应激阻断剂TUDCA组,TUDCA预处理染砷组。Western blot法分别检测过表达MPST、染砷及TUDCA预处理后细胞内GRP78和CHOP蛋白表达的变化。结果单纯MPST过表达不影响SH-SY5Y细胞内GRP78、CHOP蛋白的表达水平;经NaAsO2处理后,SH-PEB细胞内GRP78、CHOP蛋白明显上调(P<0.01),而被内质网应激阻断剂TUDCA所拮抗;MPST过表达则抑制砷对GRP78、CHOP蛋白的上调(P<0.01);然而,TUDCA预处理则明显逆转MPST过表达对GRP78、CHOP蛋白的影响(P<0.01)。结论GRP78/CHOP内质网应激通路参与了砷诱导的神经毒性损伤;MPST过表达可降低砷诱导的内质网应激水平。     

HPV6bL1-TpN15嵌合基因原核表达系统的构建

目的 分别从梅毒螺旋体(Treponema pallidum,Tp)临床菌株和尖锐湿疣(cA)组织中扩增人乳头瘤病毒(HPV)6b型L1和TpN15基因,构建HPV6b L1-TpN15嵌合基因及其原核表达系统.方法 采用PCR分别从CA组织及Tp临床菌株中扩增HPV6b L1和TpN15基因片段,构建HPV6b L1-TpN15嵌合基因,将其克隆入原核表达载体pET32a(+)构建重组质粒pET32a(+)/HPV6b L1-TpN15,经测序鉴定后转化大肠杆菌BL21 (DE3),经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导后表达的融合蛋白用十二烷基磺酸钠(SDS)-聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)、蛋白质印迹法分析鉴定.结果 HPV6b L1-TpN15融合蛋白在原核表达系统中得到了较高表达.结论 原核表达的HPV6bL1-TpN15融合蛋白具较强的抗原性.     

慢性氟中毒对大鼠神经细胞线粒体分裂蛋白Drp1表达的影响

目的 研究慢性氟中毒大鼠大脑皮质神经细胞线粒体分裂基因动态相关蛋白1(Drp1)表达的改变.方法 将120只SD大鼠(1月龄、体重100 ～ 120 9)以单纯随机法分为3组(对照组、低氟组和高氟组),每组40只,各组染毒剂量以饮水中加入氟剂量计算:分别为0、10和50 mg/L;染毒3个月和6个月时,每组分别处死20只.采用免疫组织化学方法和免疫蛋白印迹法(western-blotting)检测线粒体分裂蛋白Drp1表达.结果 3个月时,Drp1的蛋白免疫组织化学强阳性表达神经细胞个数发生了改变,与对照组[(36.3±5.8)个]相比较,低氟组[(34.7±4.1)个]的改变无统计学意义(t=1.5,P＞0.05),而高氟组[(45.0±4.7)个]表达增加(t=8.8,P＜0.05);westernblotting法蛋白印迹平均灰度值也具有相同的改变,与对照组(0.59±0.03)相比,低氟组(0.62±0.03)和高氟组(0.71±0.02)的水平升高(t值分别为0.02、0.11,P值均＜0.05).6个月时,Drp1的蛋白免疫组织化学强阳性表达神经细胞个数发生了改变,与对照组[(33.2±4.4)个]相比较,低氟组[(36.6±3.8)个]和高氟组[(39.4±4.2)个]升高(t值分别为3.5,6.3,P值均＜0.05);westernblotting法蛋白印迹平均值也有改变,与对照组(0.65±0.06)相比,低氟组(0.80±0.09)和高氟组(0.76±0.08)的水平升高(t值分别为0.1、0.1,P值均＜0.05).结论 高剂量染氟可造成分裂基因Drp1表达改变,慢性氟中毒神经细胞损伤可能与线粒体分裂亢进有关.     

温州汉族群体4个Y-STR复合扩增及其单倍型多态性研究

目的建立DYS426、DYS393、DYS390、DYS438基因座的复合扩增体系，研究四基因座单倍型频率。方法建立复合扩增体系，利用聚合酶链式反应（PCR）、聚丙烯酰胺凝胶电泳（page）及银染分型技术，对温州地区汉族155名无关个体的DYS426、DYS393、DYS390、DYS438位点进行分型，检验其单倍型多态性。结果复合扩增DYS426、DYS393、DYS390、DYS438位点分别检出4、8、5和4个等位基因，共52种单倍型，其平均基因差异度为0．9608。结论该研究Y-STR基因座复合扩增体系和所获单倍型频率数据在法医学个人识别和亲子鉴定中有较高实用价值，适用于温州汉族群体。