雨课堂在分子生物学检验教学中的应用

雨课堂是清华大学开发的一款线上线下混合式教学工具，适用于较抽象复杂的课程。分子生物学检验教学中引入雨课堂教学软件，发现雨课堂教学既可照顾普通学生的一般要求，又适应学生的个性化学习需求，是一款值得尝试的教学工具。     

彩超诊断永存动脉干伴异位肺动脉起源部狭窄的体会

患者男,15岁,无明显诱因感活动后气促、心悸,需蹲踞后才能站立活动,紫绀、活动受限、伴心脏杂音8年.一般情况可,比同龄人瘦弱,口唇、肢端中度紫绀伴杵状指(趾).     

凝血酶促进结肠癌SW480细胞生长的研究

目的探讨凝血酶对结肠癌SW480细胞增殖及细胞周期的影响。方法将20 nmol/L、100 nmol/L、500nmol/L的凝血酶作用于SW480细胞48 h,以未处理组（0 nmol/L）作为对照。CCK-8（cell counting kit-8）法检测细胞增殖情况;流式细胞术检测细胞周期变化;RT-PCR检测蛋白酶活化受体-4（protease-activated receptor-4,PAR-4）的mRNA表达;Western blotting检测NF-κB p50蛋白表达。结果在20-500 nmol/L浓度范围内,凝血酶可剂量依赖性的促进SW480细胞的增殖;细胞周期显示G0/G1期细胞百分数减少,S期及G2/M期细胞百分数增加,表明凝血酶可诱导细胞从G0/G1期向G2/M期发展,从而促进细胞增殖;随着凝血酶浓度的增加,PAR-4 mRNA及NF-κB p50蛋白含量也有不同程度的增加。结论在20-500 nmol/L浓度范围内,凝血酶可促进结肠癌SW480细胞的增殖,加速细胞周期进程;其作用可经PAR-4介导,并与NF-κB信号通路活化有关。     

靶向APRIL基因小干扰RNA对鼠肠癌细胞生长与迁移能力的影响

目的 制备并筛选靶向鼠结直肠癌细胞株CT-26增殖诱导配体(APRIL)基因小干扰RNA(siRNA),通过检测APRIL siRNA抑制肠癌细胞生长及迁移等指标,为体内递送APRIL siRNA靶向治疗小鼠结直肠癌原位模型奠定基础.方法 分别设计、合成4种不同位点的APRIL siRNA,同时以合成无序序列作为阴性对照,再用LipofectAMINE 2000转染高表达APRIL的鼠结直肠癌细胞株CT-26,荧光显微镜下计数评价6-FAM标记的APRIL siRNA转染效率与筛选转染浓度;FQ-RT-PCR检测APRIL mRNA水平,Western印迹分析APRIL蛋白表达,筛选沉默效率最高的APRIL siRNA片段;细胞损伤修复法检测APRIL siRNA抑制肠癌细胞迁移的能力;CCK-8(cell counting kit-8)法检测细胞增殖情况;RT-PCR检测基质金属蛋白酶MMP-2及TIMP-1 mRNA水平.结果 4种不同siRNA瞬时转染CT-26细胞后APRIL mRNA和蛋白表达有明显差别(P＜0.05).APRIL siRNA组与对照组相比,细胞生长与迁移能力明显减弱(P＜0.05),MMP-2及TIMP-1 mRNA水平均有显著性差别(P＜0.05).结论 成功筛选靶向鼠结肠癌细胞株CT-26增殖诱导配体APRIL siRNA,其中APsi737敲低效率可达到90%.靶向APRIL基因小干扰RNA可有效降低肠癌细胞的生长与转移能力,可能与MMP-2及TIMP-1的调节有关.可用于后续的靶向治疗结直肠癌研究.

Abstract：

Objective To construct and screen siRNA targeting a proliferation-inducing ligand (APRIL) gene in a mouse colorectal cancer celline, CT-26. To investigate the effects to the cell growth and migrant capacity of CT-26 after knockdown APRIL gene, lay the foundation for molecular targeted therapy to colorectal cancer. Methods Four pairs of APRIL siRNA were designed and chemically synthesized. And disorder sequences were synthesized as a negative control. These sequences were transfected with LipofectAMINE 2000 into CT-26 cells, which high-expressed APRIL gene. The transfection efficency rate of 6-FAM labelled control siRNA was detected by fluorescence microscope. The inhibition effectiveness of APRIL mRNA and protein was analyzed by FQ-RT-PCR and Western blot, respectively. Cell proliferation activity was analyzed by cell counting kit-8, cell migration capacity was detected by the repair of cell damage, and MMP-2 together with TIMP-1, two important regulatory genes in cell metastasis, were measured by RT-PCR.Results The different kinds of APRIL siRNA effectively suppressed the level of APRIL mRNA and the protein expression in CT-26 (P ＜ 0.05 ). Cell proliferation and metastasis ability were repressed after APRIL siRNA transfection( P ＜ 0.05 ), compared with random siRNA control and nontransfected control. The mRNA levels of MMP-2 and TIMP-1 genes wre significantly altered among APRIL siRNA groups and two control groups ( P ＜ 0.05). Conclusion We have constructed and screened a kind of siRNA (APsi737) targeting APRIL gene in a mouse colorectal cancer cell line, CT-26. APRIL siRNA can effectively inhibit the cell growth and migration capacity, maybe be regulated by MMP-2 and TIMP-1.     

2019新型冠状病毒核酸检测的研究状况与应用探讨

2019新型冠状病毒(2019 novel coronavirus,2019-nCoV),从2019年底武汉病毒性肺炎病例中被发现,2020年1月12日被世界卫生组织命名。2019-nCoV是一种以前从未在人体中被发现的冠状病毒新毒株,其基因组大小和结构与其他的冠状病毒相似,但在进化树上与人SARS冠状病毒关系较远。2019-nCoV基因组大约由29 000个核苷酸组成,有12个开放读码框(ORF),属于一种全新的β属冠状病毒。该文针对2019-nCoV的生物学特性、基因结构以及分子生物学检测进行综述,并对实验室检测规范及其质量控制给予建议。     

APRIL调节基质金属蛋白酶的表达对结直肠癌细胞转移侵袭能力的影响

目的 研究增殖诱导配体(a proliferation-inducing ligand,APRIL)对结直肠癌(colorectal cancer,CRC)细胞转移侵袭能力和基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)表达的影响,以进一步明确APRIL在CRC转移中的作用.方法 APRIL基因的小干扰RNA质粒载体(siRNAAPRIL)转染人CRC细胞SW480,APRIL重组蛋白(rhAPRIL)刺激CRC细胞HCT-116,Transwell小室转移及侵袭试验分析APRIL对CRC细胞转移及侵袭能力的影响;RT-PCR、ELISA检测MMPs的表达变化.结果 siRNA-APRIL转染的SW480细胞Transwell小室试验转移及侵袭细胞数显著减少(P＜0.05),rhAPRIL刺激的HCT-116细胞Transwell小室试验转移及侵袭细胞数显著增多(P＜0.05);MMP-2、MMP-9及TIMP-1 mRNA,分泌型的MMP-2、MMP-9蛋白表达在转染或刺激前后差别均有统计学意义(P＜0.05);MMP的抑制剂GM6001处理后,SW480对照组和rhAPRIL刺激后的HCT-116细胞Transwell小室侵袭细胞数显著减少(P＜0.05).结论 APRIL通过调节MMPs的表达促进结直肠癌的侵袭和转移,可为结直肠癌转移的干预及治疗提供新的靶点.     

21例心脏创伤的诊断与治疗

我院1992年6月～2003年3月间，共收治21例心脏损伤患者，现结合文献对诊断及治疗过程中的问题作如下总结。     

虫白蜡治疗雄激素性脱发的作用机理研究

目的:前期研究发现虫白蜡能明显促进脂溢性脱发毛发的生长,但促进毛发生长的机理尚不清楚。方法:采用组织切片法、酶联免疫法测定给药14 d、21 d、28 d、45 d、60 d后单位面积内小鼠毛发重量、生长期和休止期毛囊数量比(A/T)和碱性磷酸酶含量(ALP);采用酶联免疫法测定给药28 d后小鼠皮肤内血管内皮生长因子和表皮生长因子的表达量。结果:试验第28天, A/T比值和ALP含量明显高于其他测试时间;且10%虫白蜡组小鼠皮肤内VEGF、EGF和A/T比值的表达量明显高于模式组。结论:虫白蜡对毛囊生长周期没有调节,但其能促进毛囊营养的供应。     

凋亡蛋白抑制因子livin基因siRNA表达载体的构建与转染

目的:构建3个针对凋亡蛋白抑制因子livin基因mRNA的小干扰RNA(siRNA)表达载体,然后转染HCT-8/V细胞。为研究livin基因沉默对HCT-8/V细胞耐长春新碱特性的影响奠定基础。方法:合成3对靶基因livin的siRNA寡核苷酸序列通过退火生成转录模板,与线性pGCsi-H1/Neo/GFP质粒连接,转化DH5α钙化菌抽提重组质粒,测序鉴定。用脂质体2000将重组质粒转染HCT-8/V细胞并用G418筛选。结果:转化大肠杆菌涂布平板长出阳性菌落,测序结果与所设计、合成的livin的siRNA转录模板序列一致;在荧光显微镜下观察到HCT-8/V细胞表达绿色荧光蛋白(GFP)证实重组质粒已转染入细胞并用G418剔除了未转染质粒的细胞。结论:成功构建livin基因的siRNA表达载体,转染并筛选出转染了livin siRNA表达载体的HCT-8/V细胞。     

Anthogyr种植系统在牙列缺损或缺失种植修复的临床效果分析

抽取70例出现牙列缺损或缺失症状的患者,随机分为对照组和治疗组各35例。对照组采用常规修复技术治疗;治疗组采用Anthogyr种植系统治疗。治疗组患者牙列缺损或缺失症状治疗效果明显优于对照组;治疗所需时间明显短于对照组;不良反应率明显低于对照组。应用Anthogyr种植系统对出现牙列缺损或缺失症状的患者进行种植修复的临床效果非常明显。