人外周血淋巴细胞和粒细胞褪黑素受体亚型mt1 的检测

目的 检测人外周血淋巴细胞和粒细胞的褪黑素受体(MR)亚型mt1和其细胞内定位。方法 分离出健康成年人外周血淋巴细胞和粒细胞，应用RT-PCR技术分别检测其亚型mt1的mRNA，阳性产物用自动测序仪测序；同时将所分离的淋巴细胞和粒细胞制成细胞涂片，应用免疫组化染色检测mt1在淋巴细胞和粒细胞上的分布。结果 RT-PCR产物电泳显示：人外周血淋巴细胞和粒细胞均存在mt1阳性条带，片段长度约370bp，测序结果显示扩增产物与GenBank的人mt1受体亚型的基因序列相吻合；免疫组化结果显示：人外周血淋巴细胞和粒细胞均存在mt1受体蛋白，分布于细胞膜、细胞浆和细胞核，以细胞膜和细胞浆为主。结论 人外周血淋巴细胞和粒细胞中均存在MR的亚型mt1,外周血淋巴细胞和粒细胞为褪黑素作用的外周靶器官，提示褪黑素在生理及病理情况下可能对免疫系统有调节作用。     

糖基化终末产物对糖尿病大鼠烧伤创面愈合的影响

目的 了解糖基化终末产物(AGE)蓄积对糖尿病大鼠烧伤创面愈合的影响. 方法 将75只SD大鼠按完全随机化方法 分为对照组、糖尿病组及氨基胍干预组,每组25只.将大鼠造成深Ⅱ度烫伤(以下称烧伤)后,后2组制作成糖尿病模型,氨基胍干预组给予管饲氨基胍100 mg·kg~(-1)·d~(-1).于伤后0(伤后当天)、3、7、14、21 d处死大鼠.描取创面形状,并取全层皮肤组织待测.同时取大鼠背部表皮行KC培养及鉴定.观察各组创面愈合率及皮肤组织糖含量,创面组织形态学变化,皮肤组织中AGE分布.观察不同浓度AGE对KC增殖,凋亡的影响,以仅加表皮细胞培养液的KC为对照组. 结果 伤后7、14、21 d糖尿病组创面愈合率显著低于对照组(P<0.01),而氨基胍干预组却明显高于前2组(P<0.01).糖尿病组皮肤组织含糖量为(2.62±0.19)mmol/g,氨基胍干预组为(2.58±0.07)mmol/g,均高于对照组(1.04±0.09)mmol/g(P<0.01).对照组大鼠创面炎性细胞浸润强烈而局限,坏死组织形成、脱落及时,创面愈合无明显延迟;糖尿病组大鼠炎性细胞浸润缓慢、弥散而持久,坏死组织形成、脱落较迟,创面愈合明显延迟;氨基胍干预组大鼠炎性细胞浸润及时、强烈,坏死组织形成、脱落以及创面愈合时间较糖尿病组早.对照组中有少量散在的AGE沉积,糖尿病组AGE蓄积显著增加,而氨基胍干预组AGE含量显著降低.AGE作用48 h后,KC的增殖显著降低,呈现浓度依赖性,各剂量AGE干预组的吸光度值均低于对照组(P<0.01).100μg/mLAGE干预组KC早期凋亡连接素V阳性细胞比例为(15.1±2.3)%,明显高于对照组[(11.2±1.2)%,P<0.05];终未期凋亡双阳性细胞比例为(14.3±3.5)%,与对照组(15.2±2.4)%比较,差异无统计学意义(P>0.05). 结论 高血糖可能是通过AGE蓄积,抑制KC等修复细胞增殖导致创面难愈;减少AGE蓄积,可改善糖尿病创面愈合延迟现象.     

皮下脂肪组织创伤后脂肪细胞的变化

目的观察脂肪组织创伤愈合的情况,探讨成熟脂肪细胞的变化。方法以杜洛克母猪为实验动物,用滚轴取皮刀在其背部制作脂肪组织切割伤皮瓣,大体观察伤后1、2、4及12周的愈合情况。并于伤后3、7、14及21 d在皮瓣中央处取材,观察切缘及周围成熟脂肪细胞的形态学改变,用酶联免疫吸附法和免疫组织化学方法检测脂肪组织中瘦素和脂联素的表达情况。结果脂肪组织切割伤组皮瓣中央与未创伤处皮肤无异,但皮瓣边缘早期有明显炎症反应,后期则呈典型的疤痕生长。组织学观察发现:脂肪组织创伤后,仍以纤维化愈合为主,但愈合过程中,炎症反应的局灶性及小脂肪细胞出现呈现一定的规律性;与未创伤组相比,脂肪组织创伤后其瘦素及脂联素的表达量均呈下降趋势,但两者的比值在愈合的过程中存在差异。结论脂肪组织创伤后,脂肪细胞表面瘦素及脂联素的表达量下降。早期创缘附近出现大量的小脂肪细胞,可能与脂肪分解有关。     

糖尿病难愈创面与晚期糖基化终末产物的关系

创面愈合是一个复杂而有序的过程,包括炎症反应、细胞增殖、组织成熟和重建3个阶段。糖尿病(diabetesmellitus,DM)机体内非酶促糖基化反应加速,晚期糖基化终末产物(AGEs)水平升高,干扰内皮细胞与白细胞间的相互作用,还能使单核巨噬细胞功能受抑,分泌细胞因子的能力下降,且在创面浸润的时间延长。内皮细胞和成纤维细胞都是创面愈合过程中的主要修复细胞,两者膜表面均存在多种AGEs结合蛋白。AGEs可抑制内皮细胞增殖,并可以诱导其凋亡,而且与作用时间及含量相关。AGEs也能抑制成纤维细胞合成胶原的能力。生长因子对细胞趋化、增殖,细胞间基质(ECM)的形成和血管生成有显著作用,而糖基化修饰后的碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)促有丝分裂的活性明显降低。AGEs水平的升高可进一步削弱机体的抗感染能力。总之,糖尿病难愈创面的形成是一个多因素多环节参与的病理过程,尽管发病机制目前尚不清楚,但非酶促糖基化反应可能是其中一个重要的致病环节。     

人外周血淋巴细胞褪黑素受体的基因与蛋白表达的研究

目的:研究人外周血淋巴细胞褪黑素受体(MR)的基因与蛋白表达的特点。方法:分离健康成年人外周血淋巴细胞,采用异硫氢酸胍-苯酚-氯仿一步法抽提总RNA,分别采用Northern印迹和RT-PCR方法检测MR亚型mt₁和MT₂的mRNA,并将RT-PCR的阳性产物通过自动测序仪测序;同时应用免疫组化染色方法检测mt₁和MT₂受体亚型蛋白在淋巴细胞内的分布特点。结果:Northern印迹方法检测出长约1.1 kb mt₁ mRNA,但未检出长约1.1 kb MT₂ 的mRNA;RT-PCR方法则得到了368 bp mt₁ cDNA片段,无321 bp MT₂ cDNA片段,同时将mt₁阳性条带通过胶回收、测序,结果显示扩增产物与人mt₁受体亚型的基因序列相吻合;免疫组化结果显示:人外周血淋巴细胞存在mt₁受体蛋白,主要分布于细胞膜和细胞浆,呈棕褐色阳性颗粒,而细胞核上未见阳性颗粒,MT₂受体蛋白则未检出。结论:证实正常人外周血淋巴细胞存在mt₁的基因与蛋白的表达,而无MT₂的基因与蛋白的表达,提示外周血淋巴细胞为褪黑素(Mel)作用的外周靶器官,为研究生理及病理情况下Mel对免疫系统的调节奠定了基础。     

增生性瘢痕胶原结节中成纤维细胞生物学行为的研究

目的研究增生性瘢痕胶原结节中成纤维细胞(fibroblast, Fb)生物学行为及其意义。方法 收集瘢痕切除植皮手术中切除的瘢痕组织及剩余的正常皮肤标本,H-E染色观察正常皮肤与瘢痕组织胶原结节及非结节区域的组织形态学差异,免疫组织化学法检测正常皮肤与瘢痕组织中Ki67及α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)的表达及分布情况。结果 与正常皮肤及增生性瘢痕非胶原结节区域相比,增生性瘢痕胶原结节中可见大量Fb,Ki67及α-SMA阳性表达的Fb亦主要分布于胶原结节区域。结论 胶原结节处Fb增殖活跃,并大量分化为肌成纤维细胞(myofibroblast, MFB)。MFB的大量存在提示局部组织处于高张力水平,后者可能是导致Fb功能活跃、大量存在从而形成胶原结节的重要机制之一。     

糖尿病合并创面难愈的机制研究

糖尿病合并难愈创面是导致创面修复"失控"难愈的因素中最值得重视的领域之一.其患病率日渐升高,治疗手段局限,使相关预后较差,从而需要耗费大量的卫生保健资源.糖尿病下肢溃疡,特别是糖尿病足溃疡在糖尿病合并难愈创面中占有重要的地位,国内外对其相关机制进行了大量的研究.     

AGE-RAGE系统与糖尿病足综合征的发病机制及治疗进展

糖尿病足综合征（DFS）是糖尿病严重慢性并发症之一,其发病机制至今尚未完全阐明。晚期糖基化终末产物（AGEs）的形成参与DFS的发生、发展,AGEs与AGEs受体（RAGE）相互作用,并通过一系列分子机制导致糖尿病神经病变和外周血管病变。因此,抑制AGEs形成或阻断AGEs与其受体相互作用可以延缓糖尿病足的发生、发展。本文就AGEs形成、AGE-RAGE系统在DFS中的作用和DFS的治疗进展等作一综述。     

建立消防医疗救助体系的探讨

中国是一个多自然、人为、和公共卫生灾害的国家。以往，我国处理灾难事故的模式一直是由政府调动解放军、武警、公安、急救中心等，采用随机组合，义务救援的方式，缺乏一个常设的救灾机构，难以形成合力。汶川大地震再次暴露了我国灾难医学“有概念，缺体系”的弊端。分析了美国、加拿大、英国、德国、日本、和中国香港、台湾地区的经验后，作者认为因消防部队分布相对合理，机构健全，配备完善，网络广泛，出动半径小，反应时间短，指挥系统完善，组织纪律性强，装备完善，人员年轻、体力好，拥有专用通讯网络线路，119号码已家喻户晓，是一支有效的无可替代的救灾突击队，应起协调作用。但大部分消防部队成员缺乏急救知识和技术，应对其加强训练，并设置由消防系统、地方急救中心、警察等组成的，以消防医疗救助为基础的消防紧急医疗救助队。