广东省SARS流行株M基因序列分析

目的：测定广东省不同流行时期13份SARS病毒(SARS CoV)标本的M基因序列，通过分析该基因序列的变异情况，初步了解广东省SARS病毒在流行过程中是否发生了变异。方法：提取病毒RNA，用M基因特异引物进行RT-PCR，将产物纯化后直接测定核苷酸序列。结果：13份标本M基因核苷酸序列同源性很高，为99．7％～100％，M基因核苷酸序列只在2个位点(80和203位)发生变异，1株80位点的变化引起编码的氨基酸从苯丙氨酸(F)变为半胱氨酸(C)，3株203位变化为无义突变。结论：M基因核苷酸序列变异不大，初期和后期M基因核苷酸序列与流行高峰期的毒株相差1个碱基，但氨基酸序列相同；从香港感染病人分离的1株病毒M基因与广东本地感染分离株存在1个氨基酸的差异。     

广东省信宜市蚊媒种类密度初步调查

目的 调查广东省信宜市怀乡镇和水口镇蚊媒数量及种类分布。方法 怀乡镇检查猪场、猪栏和牛房中蚊媒的分布；水口镇以牛诱和猪栏检查的方法调查蚊媒的分布。于19：00～21：30点观察蚊媒出现的情况，并以捕蚊管捕捉蚊媒。对所捕按蚊进行计数、分类。结果 共捕获蚊媒602只，其中包含5个种：骚扰阿蚊、三带喙库蚊、中华按蚊、多斑按蚊和嵌斑按蚊。三带喙库蚊为当地的优势蚊种，其占除阿蚊外总蚊量的90．8％。结论 三带喙库蚊为信宜市的优势蚊种。     

广东省首例人高致病性禽流感病例病原体的分离与初步鉴定

人禽流感病是由甲型禽流感病毒（AIV）某些亚型的毒株感染人引起的急性呼吸道传染病。人高致病性禽流感病的潜伏期一般为1～3d，起病急，早期表现类似普通流感。主要症状为发热，伴有流涕、鼻塞、咳嗽、咽痛、头痛和全身不适。2006年2月22号，广州市一家医院发现1名患者出现“流感样”症状．表现为发热、咳嗽和白细胞数降低等发热肺炎症状，3月3日因治疗无效死亡。     

2009－2012年广东口岸输入性流感疫情监测结果分析

目的对2009—2012年广东口岸输入性流感病例的流行病学特征进行分析,为出入境口岸流感的监测及其防控工作提供依据。方法采集广东25个口岸有发热症状的入境人员的鼻咽拭子,采用实时荧光RT-PCR法对样本进行流感病毒的检测及分型．通过Excel、SPSS18．0对不同型别的流感阳性病例的流行情况进行统计分析。结果2009—2012年广东口岸共发现5723名发热病例,其中985例为输入性流感病例,检出率为17．21％。共呈现5个流行高峰,分别为2009年6—8月,以季节性甲型流感为主;2009年10-12月,以甲型H1N1流感（2009）为主;2010年7-9月,以季节性甲型流感为主;2010年12月-2011年2月,以甲型H1N1流感（2009）为主;2011年12月-2012年2月,以季节性乙型流感为主。甲型H1N1流感（2009）在19岁以下人群检出率较高,季节性甲型流感以50岁以上人群检出率最高,季节性乙型流感则以19岁以下及50岁以上人群检出率较高。结论2009年5月至2012年2月期间,广东口岸入境流感病例中同时有甲型H1N1流感（2009）、季节性甲型流感以及季节性乙型流感的流行,并呈现相互交替的流行特征。不同流感类型在各年龄层分布不同．与性别无关。     

埃博拉出血热及埃博拉病毒研究现状

目前西非地区正在流行的埃博拉出血热(EHF)由毒力最强的扎伊尔型(EBOV-Z)所致,为40年来最严重的暴发,殃及几内亚、利比里亚、塞拉利昂和尼日利亚西非四国。对于几内亚EBOV-Z毒株来源,目前存在有两种观点,即该病毒为几内亚地区长期潜伏或者由中非输入。非洲地区的水果蝙蝠为最可疑的远距离传播媒介。西非EHF疫情的诱发和扩散受生态环境因素和社会经济因素的影响。埃博拉病毒(EBOV)在近半个世纪频繁出现,可能由于进化过程中突破了基因遗传变异的瓶颈。本文介绍了目前西非EBOV流行情况、病毒来源、宿主和进化等方面的研究进展。     

多种病毒集合检测芯片的研制及其在临床血清标本检测中的初步应用

目的 研制黄热病、西尼罗热、登革热、基孔肯雅热、埃博拉出血热、马尔堡出血热、拉沙热等多种病毒性传染病集合检测基因芯片,并建立一种适用于直接检测核酸含量较低临床血清标本的新型芯片靶基因扩增标记方法.方法 设计并筛选出上述病毒70mer寡核苷酸特异探针各20条,打印于同一基因芯片上；以phi29 DNA聚合酶结合带标签序列的随机引物进行临床标本中病毒全基因组扩增,再以Cy3荧光染料标记的标签序列引物进行PCR随机扩增标记,标记产物用多种病毒芯片进行杂交检测.结果 检测1～4型登革热、基孔肯雅热病例临床血清标本,结果显示该方法准确、特异、敏感；检测西尼罗热、黄热病、埃博拉出血热、马尔堡出血热、拉沙热等病毒核酸的模拟血清标本,同样得到特异的阳性杂交信号,与预期结果一致.结论 本研究建立的多种病毒集合检测基因芯片及其靶基因扩增标记方法,可直接应用于血清标本中上述病毒核酸的检测.     

2005年广东省流感监测结果分析

目的分析广东省流感病毒抗原变异情况和人群血清流感抗体水平,更好地预防和控制流感流行。方法用9-11天龄鸡胚和(或)MDCK细胞分离流感病毒,病毒鉴定及人血清流感抗体检测用微量半加敏红细胞凝集抑制法(HI)。结果2005年广东省共报告流感样病例暴发疫情184起,报告病例7 154例,主要由A(H3N2)亚型流感病毒引起局部暴发。2005年全省人群中共分离流感病毒929株,以A(H3N2)亚型流感病毒为主,占54.04%,A(H1N1)亚型流感病毒占28.52%,B型(Yamagata系)流感病毒占6.14%,B型(Victoria系)流感病毒占11.30%。检测900份一般人群血清,A(H3N2)亚型流感抗体阳性率较高,为67.11%;B型(Victoria系)流感抗体阳性率较低,为4.78%。抗原性分析结果显示,广东省不同两个市分离到的两株流感病毒与国家2005年标准株抗原性有明显差别。结论2005年广东省未发生流感大流行,A(H1N1)、A(H3N2)亚型及B型(Yamagata系)、B型(Victoria系)流感病毒同时在广东省交替传播。     

一种无RNA纯化步骤TaqMan RT-PCR方法用于快速检测登革病毒

目的 建立一种简便、快速的登革病毒核酸检测方法.方法 设计合成LNA探针,替代MGB探针,建立一步法TaqMan RT-PCR方法,并用已知的登革病毒标准毒株进行方法的优化;用商品化的纯化试剂盒和简单的热释放法获取登革病毒细胞培养液和模拟含登革病毒血清中RNA,以优化的TaqMan RT-PCR方法进行检测,比较有或无RNA纯化步骤检测的敏感性和重复性.结果 LNA探针TaqMan RT-PCR有较好的PCR扩增效率(104%)、较广的线性范围(10 0～10-7样品稀释度)、较高的敏感性(0.003TCID50/反应)和较好的重复性(CV值小于4.53%),新方法检测经简单热释放RNA的细胞培养液和模拟含登革病毒血清中登革病毒也有较高的敏感性(0.03TCID50/反应)和较好的重复性(CV值小于6.36%).结论 新型LNA探针可替代MGB探针用于TaqMan RT-PCR反应,简便的热释放RNA方法结合高敏感性的TaqMan RT-PCR可满足登革病毒快速检测的需要.     

应用多重TaqMan MGB探针实时聚合酶链反应检测A型和B型流感病毒的研究

目的 应用多重real-time PCR方法检测A型和B型流感病毒,探讨其在快速诊断流感病毒感染中的优越性.方法 根据A型和B型流感病毒M基因的相对保守序列,设计两套特异性引物和TaqMan MGB探针,进行多重real-time PCR检测A型和B型流感病毒.将该方法与病毒分离、免疫层析、传统RT-PCR进行比较,并对多重real-time PCR的特异性进行评估.并应用multiplex real-time PCR方法和常规的病毒分离方法对广东省流感样病例334份咽拭标本进行检测,比较其灵敏性和特异性.结果 多重real-time PCR反应可以检测到A、B型流感病毒的最低病毒量分别为10-1和10-3TCID50/反应.该方法在对流感病毒株以及其他呼吸道病毒株样品的检测中,未发现假阳性和假阴性现象,特异性为100%.该方法对334份临床标本进行检测,结果与经典检测方法(病毒分离鉴定结合血清学检测)的符合率达100%,且灵敏度明显高于病毒分离.结论 该研究建立的多重TaqMan MGB real-time PCR是一种快速、灵敏性和特异性高的流感病毒检测方法,对于流感的早期诊断及指导临床有重要意义.     

媒介动物(蚊、猪)体内黄病毒分子流行病学调查研究

〔目的〕通过对珠海注册养猪场及珠海口岸地区的蚊虫体内黄病毒的带毒率、宿主动物(猪群)及其人群进行血清黄病毒类(日本脑炎、登革热等)抗体水平的调查研究,为控制黄病毒在人群中的流行提供科学依据。〔方法〕采集养猪场猪血清、养猪场和口岸蚊标本、养猪场从业人员、入境的东南亚船员和城区部分发热病人血清,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法分别检测猪群和人群血清中的日本脑炎、登革热抗体;使用紫外灯诱蚊法在养猪场和口岸捕捉蚊类,经鉴定种类后,按20只蚊一组制成蚊悬液后,采用细胞培养、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)以及荧光定量PCR技术检测蚊体内日本脑炎病毒、登革和西尼罗病毒等黄病毒的携带情况。〔结果〕1.猪血清日本脑炎病毒IgG抗体:结果已发表于《中国国境卫生检疫杂志》2007年第3期《珠海市部分注册猪场日本脑炎调查研究》。2.蚊媒带毒情况检测:2005年1月～2006年12月共捕获的2763只成蚊,经鉴定隶属4属8种,其中白纹伊蚊所占比例最高(32.75%),其次为致倦库蚊(26.06%)、三带喙库蚊(25.30%)、海滨库蚊(7.75%)、中华按蚊(3.84%)、骚扰阿蚊(3.18%),其他(常型曼蚊和巨型阿蚊等)(1.12%);在132组蚊研磨液的病毒细胞培养中,有7份标本出现CPE病变,使用黄病毒通用引物,RT-PCR反应能扩增出相应的阳性条带,其中白纹伊蚊组阳性3份,致倦库蚊组阳性3份,三带喙库蚊组阳性1份,但用日本脑炎病毒、登革病毒Ⅰ～Ⅳ型和西尼罗病毒等特异性引物,未能扩增出相应的阳性条带,说明可能存在着其它黄病毒类的病毒感染;采用荧光定量PCR法,对蚊悬液和细胞培养液日本脑炎、登革和西尼罗病毒进行检测,从1组海滨库蚊标本中检出日本脑炎病毒核酸阳性,但强度较弱,这与珠海地区是乙脑低发地区相一致。3.人群登革热和日本脑炎血清抗体检测:从东南亚的入境船员、本地发热病人和养猪场从业人员等血清标本511份中,登革病毒抗体IgG总阳性率为7.24%,其中以东南亚的入境船员的阳性率最高,为12.76%,没有检出登革病毒抗体IgM和日本脑炎IgM抗体。〔结论〕珠海地区存在日本脑炎的主要传播媒介,并且在蚊媒中携带有日本脑炎病毒;蚊标本细胞培养出现细胞病变和RT-PCR扩增出黄病毒基因的特异性片段,提示在捕获蚊标本中可能存在着其他病毒感染的可能;虽然养猪场猪群日本脑炎感染率不高,但存在着日本脑炎病毒的隐性感染或曾经感染过,提示不能够放松对乙型脑炎的预防控制工作,应采取积极的预防措施,防止人群和猪场日本脑炎的发生与流行。此外,研究结果表明东南亚船员有较高的登革热感染率,因此,在登革热流行期间,我国口岸应加强对来自东南亚国家交通工具员工和旅客的登革热的监测,以及有可能藏带、孳生蚊虫的废旧物品、集装箱等的检验检疫工作,以防止登革热的传入与流行。