大鼠胰腺导管干细胞分化形成类胰岛的改良诱导方法

目的 对大鼠胰腺导管干细胞（rPDSCs）分化形成类胰岛的诱导方法进行改良。 方法 在基础培养液DMEM/F12+10% FBS +1%青霉素/1%链霉素中,分别添加2、4、6和8 μmol/L全反式维A酸（ATRA）,体外诱导rPDSCs分化形成类胰岛,筛选ATRA最适诱导浓度。以ATRA最适诱导浓度为基础,再分别采用基质胶（matrigel）培养,悬浮培养或悬滴培养方式体外诱导rPDSCs分化形成类胰岛,筛选最适诱导培养方式。采用细胞形态学,双硫腙（DTZ）染色,细胞免疫荧光染色,Real-time PCR和ELISA方法对诱导类胰岛进行检测。 结果 与对照组相比,在基础培养液中,添加6 μmol/L ATRA及采用基质胶培养方式诱导效果最好。诱导28 d,细胞富集分化形成胰岛样球形细胞团;DTZ染色呈阳性;在基因和蛋白水平上分别表达胰岛素（insulin）和胰腺十二指肠同源框1（Pdx1）;葡萄糖刺激,释放胰岛素和C肽,且具有葡萄糖浓度依赖性。 结论 在基质胶培养方式下,采用6 μmol/L ATRA+DMEM/F12+10% FBS+1%青霉素/1%链霉素可以成功诱导rPDSCs体外分化形成类胰岛。