云南红豆杉紫杉烷2α-O-苯甲酰转运酶基因的克隆及定性

通过RACE技术,克隆了云南红豆杉紫杉烷2α-O-苯甲酰转运酶基因(TyTBT),该酶催化2-去苯甲酰-7,13-二乙酰巴卡亭Ⅲ生成7,13-二乙酰巴卡亭Ⅲ,是紫杉醇合成途径中的关键酶之一.TyTBT基因cDNA全长1481 bp,含有1 320 bp的开放读码框,编码440个氨基酸的多肽,分子量为50 050 Da,等电点为6.17.氨基酸序列比对表明TyTBT同植物酰化酶家族的其它成员有较高的相似性,超过67%,同东北红豆杉和曼地亚红豆杉的紫杉烷2α-O-苯甲酰转运酶氨基酸序列的一致性和相似性达到最高,分别为95%和96%.广泛地比对分析证明这种较高的相似性在红豆杉属的其它酶家族中具有普遍性,进化树分析表明同东北红豆杉和曼地亚红豆杉的紫杉烷2α-O-苯甲酰转运酶(TBT)的相似性高于紫杉醇合成途径中的其它酰化酶.     

迷果芹（Sphallerocarpus gracilis）和红三叶（Trifolium pratense）的核型分析

对迷果芹（Sphallerocarpus gracilis(Bess.)K-Pol)和红三叶（Trifolium pratense L.)进行了染色体计数及核型分析。迷果芹的染色体数目为2n=20,核型公式为K（2n)＝2x=20=14m 4sm 2st(SAT);核型类型为2A,为较对称核型,该种植物的染色体数目及核型均为首次报道。红三叶的染色体数目有2n=14、16、28、32等类型,本研究首次报道了2n=14的核型公式为K（2n)=2x=14=2M 12m,核型类型为1B,为较原始的对称核型。     

迷果芹(\%Sphallerocarpus gracilis)和红三叶

对迷果芹(Sphallerocarpusgracilis(Bess.)K-Pol.)和红三叶(TrifoliumpratenseL.)进行了染色体计数及核型分析.迷果芹的染色体数目为2n=20,核型公式为K(2n)=2x=20=14m+4sm+2st(SAT);核型类型为2A,为较对称核型,该种植物的染色体数目及核型均为首次报道.红三叶的染色体数目有2n=14、16、28、32等类型,本研究首次报道了2n=14的核型公式为K(2n)=2x=14=2M+12m,核型类型为1B,为较原始的对称核型.     

超声波辅助处理对发根农杆菌介导的苦豆子遗传转化的影响

以发根农杆菌转化苦豆子的子叶和下胚轴外植体,结果表明,辅助以超声波处理有助于转化率的提高,当超声波(功率120W,震荡频率50kHz)处理25min时,转化率达到最高峰(子叶为83．7％,下胚轴为39．1％),分别高于对照(14．4％和9．8％)69．3％和29．3％。在此条件下,进一步添加AS l00μmol/L,可使转化率再进一步提高9．9％和7．6％。     

紫杉醇酰化酶多基因家族成员克隆时的引物设计与PCR参数优化

紫杉醇酰化酶多基因家族是催化红豆杉紫杉醇合成过程中的各酰化酶基因的总和。该基因家族的不同成员之间具有很高的保守性,本实验以该基因家族中的紫杉烷2α-O-苯甲酰转运酶（TBT）基因克隆为例,从引物设计与PCR参数优化角度,总结了针对类似高保守性多基因家族的基因克隆的经验,表明分别在保守性极高部位设计第一次扩增引物及在保守性极低部位设计巢式引物,并采用touchdown PCR程序及高效能的Zaq DNA聚合酶是成功的关键。     

表油菜素内酯对苦参愈伤组织生长的影响

在苦参愈伤组织生长的最佳培养基:改良MS+TDZ 1.0 mg/L+2,4-D 0.5 mg/L+Cys20 mg/L上分别添加表油菜素内酯(epibrassinolide,epi-BR)0、10-7、10-5,10-3、10-1 mg/L.结果表明,愈伤组织鲜重随epi-BR浓度升高而升高,呈正相关,而干重则在10-3mg/L epi-BR浓度下达到最高,之后随epi-BR浓度升高呈下降趋势.     

可直接克隆PCR产物的克隆载体的构建

本文描述一种构建与PCR产物直接连接的克隆载体的方法。以高拷贝克隆载体pUC118为骨架载体,在pUC118质粒氨苄抗性基因的Eam1105 I 酶切位点上,以点突变的方式封闭Eam1105 I 酶切位点。经转化大肠杆菌JM109证实,该改造过的pUC118质粒,可使宿主细胞仍具有氨苄抗性。将一人工合成的具有两个Eam1105 I 酶切位点的互补寡聚核苷酸链（两端具有BamH I 接头）插入已封闭Eam1105 I 酶切位点的pUC118*载体的BamH I 位点,构成新的克隆载体,此质粒命名为pUC118E。该载体经Eam1105 I 酶切后,可产生3′末端突出一个T碱基的T-载体,能与PCR产物直接连接。 Abstract:A new method for construction of a cloning vector (T-vector) for direct ligation with PCR products was described.The T-vector derived from pUC118 in which the unique restriction site of Eam1105 I in the region of Ampr gene was deleted and an artificial DNA fragment flanking two Eam1105 I was introduced at the site of BamHI.The modified vector was named as pUC118E.A T-vector with 3′over hang end of a single T can be obtained via digesting of pUC118E with Eam1105I.PCR products can be easily cloned with this T-vector.