球形芽孢杆菌的抗药标记及外源DNA的转化与表达

用亚硝基胍（NTG）对球形芽孢杆菌（Bacillussphaericus）进行化学诱变,筛选到利福平（Rif）和链霉素（Sm）二个标记菌株。抗药浓度均达100u／ml培养基。其抗药性状能够获得较好地遗传。用含溶葡球菌酶基因的质粒DNA对RifR菌株进行原生质体转化,酶基因在该抗药菌株中获得了高效表达。经摇瓶发酵试验,溶葡球菌酶的活性约为122u／ml培养液。     

嗜热脂肪芽孢杆菌氨基酰化酶在大肠杆菌中的克隆、表达及细胞固定化研究

将嗜热脂肪芽孢杆菌的氨基酰化酶(amaA)基因克隆到E.coli中进行表达,同时利用渗透交联法固定化E.coli细胞,并对固定化细胞氨基酰化酶进行了温度和pH等理化性质的初步探讨.结果显示amaA基因在E.coli中获得了高效表达,酶活性达1043U/g湿菌体.最佳固定化条件为3%卡拉胶,30%细胞.当以1.25%多乙烯多胺渗透交联固定化细胞10min和0.1%戊二醛硬化处理20min,酶学性质研究表明,酶反应的最适温度为65℃,最适pH为7.0.细胞固定化后仍保留有83%活性,pH稳定范围更广,热稳定性更高,55℃酶活性不损失,4℃保存23d仍保留有固定化时73.6%的酶活性,连续10批次转化酶活性仅损失约20%,预示该固定化E.coli具有良好的操作和保存稳定性.     

添加蜗牛酶对纤维素酶产生菌发酵的影响初探

从上海市郊农村草堆的土壤中分离到一株分解纤维素的菌,经初步鉴定为绿色木霉。该菌最适生长温度为２８℃。在本实验条件下,该菌的产酶高峰在９６ｈ左右;对木薯渣的水解能力最强,滤纸的水解活力（Ｆｉｌｔｅｒ Ｐａｐｅｒ Ａｃｔｉｖｉｔｙ,ＦＰＡ）为１０．８ｕ／ｍｌ发酵液。其酶的最适反应温度为５０℃,最适ｐＨ为４．８。用添加蜗牛酶的方法进行绿色木霉菌发酵,结果显示,分泌纤维素酶的能力提高１２％左右。     

蟾蜍红细胞与网织红细胞染色质蛋白的比较研究 Ⅱ.组蛋白

从蟾蜍成熟红细胞与网织红细胞分离纯化了总组蛋白,通过聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定证明在正常或贫血的蟾蜍红细胞内都具有细胞特异的组蛋白H_(50)。在蟾蜍贫血后,网织红细胞内的组蛋白H_1有显著增加。用Bi0-gel P60将总组蛋白进一步柱层分离,并对组蛋白H_1与H_5含量的比值作了分析,证明蟾蜍成熟红细胞与网织红细胞内组蛋白H_1与H_5在量的比例上有明显的变化。     

DCIK细胞用于肺癌临床免疫治疗

观察细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK 细胞)和同源树突状细胞(DC)共培养后,共培养细胞树突状细胞调节的细胞因子诱导的杀伤细胞(DCIK 细胞)体外细胞毒活性,并观察DCIK细胞治疗肺癌的近期临床疗效、免疫学活性及副反应.收录 12例确诊肺癌经标准治疗方案治疗的患者,取外周血分离单个核细胞(PBMC),体外诱导出DC和CIK细胞共培养后,观察DCIK细胞表型,用MTT法测体外细胞毒活性;当效靶比为20∶1、10∶1时,DCIK细胞体外细胞毒活性杀伤率分别为55%、46.2%.所有患者均接受一定剂量的 DCIK细胞过继免疫治疗,观察其近期临床疗效、免疫反应、不良反应.12例患者中完全缓解 1例,部分缓解4例,病情稳定1例,近期有效率为41.6%,疾病控制率为50%,病情进展共6例,其中死亡2例.与DCIK细胞回输前相比,患者CD4 、CD8 、CD56 均有明显的升高(P＜0.05),这表示可以诱导患者产生特异性的免疫反应.除两例患者出现一过性的发热外,其余患者基本无不良反应.DCIK细胞在肺癌免疫治疗中能诱导机体产生特异性的免疫反应,亦是新的杀伤肿瘤细胞的效应细胞,有较好的临床疗效.     

蟾蜍红细胞与网织红细胞染色质蛋白的比较研究——Ⅰ、非组蛋白蛋白质

从亚洲蟾蜍(Bufo bufo asiaticus)的成熟红细胞与网织红细胞中分离纯化了染色质非组蛋白(NHP),并在体外转录系统中比较了两类细胞的NHP对RNA合成的激活作用。实验结果表明:从网织红细胞中分离获得的NHP只能部份恢复被网织红细胞组蛋白抑制的模板活力,而成熟红细胞的NHP不仅能恢复被成熟红细胞组蛋白抑制的模板活力,而且还能恢复被网织红细胞组蛋白抑制的模板活力。此外,从聚丙烯酰胺凝胶电泳图谱中也观察到这两类细胞的NHP的差异。     

采用渗透交联固定化方法提高细菌内酶转化率的研究

采用渗透交联方法处理固定化棒状杆菌,并利用细胞内酶顺式环氧琥珀酸水解酶催化生产L（＋）酒石酸。确定了最佳渗透交联固定化条件：多乙烯多胺浓度1．25％,作用30min;戊二醛浓度0．75％,作用15min,固定化细胞内酶转化的最适条件,底物浓度为0．5－1．0mol/L;pH8.0;温度37－42℃。结果发现,经渗透交联处理的固定化细胞酶活力比未处理的提高5倍多。而且固定化细胞的颗粒更度提高10倍多,保存期也有较大提高。