黄瓜子叶高效再生体系的建立与遗传转化

实验以S05、S062个黄瓜品系的子叶为外植体,以MS为基本培养基,添加不同浓度的BA、ABA、AgNO3进行再生培养。结果表明,在MS培养基上,ABA与BA组合能有效地抑制愈伤组织的形成,促进芽的发生,其再生率超过90%,每个外植体的出芽数为1～3个。S05、S06的最佳芽诱导培养基分别为:MS BA3.0mg·L-1 ABA1.0mg·L-1 AgNO32.0mg·L-1和MS BA1.5mg·L-1 ABA0.5mg·L-1 AgNO32.0mg·L-1。在此基础上,以S06子叶为受体材料,建立了pBI121-ATT1为中间载体,根癌农杆菌LBA4404介导的遗传转化体系,最终获得了3株抗性植株,经过PCR检测,初步确定均为阳性转化植株。  

农杆菌介导的MADS-box基因转化黄瓜初步研究

试验通过叶盘转化法,利用根癌农杆菌介导,将从黄瓜中克隆到的MADS-box同源基因—CSMADS06基因,转化到烟草和2种不同品系的黄瓜S06和S52中,经过除草剂筛选获得14株转化烟草和28株转化黄瓜。PCR检测和GFP荧光检测证实,外源的CSMADS06基因已转入这些植株中。阳性率分别为2.36%(烟草),4.1%和2.9%(黄瓜)。抗性植株已开花结果并获得子一代植株。  

非洲菊部分品种资源遗传多样性的ISSR分析

为了揭示非洲菊品种资源的遗传多样性,并更好地应用于育种工作,利用ISSR分子标记技术对75份非洲菊材料进行了遗传多样性研究。在供试材料中,筛选到具有多态性的ISSR引物29个,共扩增出多态性条带267条,平均每个引物扩增的多态性条带数为9.2条,多态性条带比率为89.3%。材料间遗传相似系数范围在0.576 1~0.883 9,这说明非洲菊具有丰富的遗传多样性。通过软件计算结果表明,75个非洲菊品种平均有效等位基因数为1.655 8,Nei基因多样性指数平均为0.377 2,平均Shannon信息多样性指数为0.557 2。将非洲菊材料聚类结果与其花色、花型、管状花颜色、花径作比较,其呈现一定的相关性,这为非洲菊优良品种的选育奠定了一定的分子理论基础。  

黄瓜MADS-box基因CsMADS06的cDNA的克隆与分析

利用简并引物PCR和RACE技术,从黄瓜中克隆到CsMADS06全长cDNA,该cDNA序列含有MADS-box,初步推断为MADS-box基因.RT-PCR分析表明,CsMADS06在3种性型植株(全雌、强雄和两性花株)的顶芽与花芽(雌花、雄花和两性花)中均有表达.差异不明显.从CsMADS06与SVP-like floral repressor(Eucalyptus occidentalis,AAP40641)和short vegetative phase protein(Brassica rapa, AAQ55452)有较高的氨基酸序列同源性,初步推断该基因在植株的营养生长向生殖生长转变方面起作用.  

黄瓜果实黑刺基因定位及候选基因多样性研究

果刺颜色影响黄瓜(Cucumis sativus L.)商品品质,是外观品质育种的重要性状之一。利用黄瓜黑刺自交系S52,黑刺野生种hardwickii以及3个白刺材料S1003、WI1983G和397为试材,分别构建BC₁或F₂遗传群体,对黄瓜黑刺性状(black spine,B)进行遗传分析与基因定位,并使用14个不同遗传背景的黑刺或白刺材料用于B候选基因Csa4G003095序列多样性研究。结果表明,S52、hardwickii中果实黑刺由显性单基因控制,利用3个群体均将B定位于第4染色体的短臂上,最近两侧翼标记(SSRB-130和SSRB-107)与B的遗传距离分别为2.01 cM和0.78 cM。序列分析发现,4个黑刺黄瓜材料的Csa4G003095预测编码的氨基酸序列没有差异,但10个白刺材料在该基因编码区的变异很大,引起其编码蛋白的一小段或大段氨基酸缺失,功能缺失造成了刺色变异,验证了Csa4G003095即为黄瓜黑刺基因B。同时,B基因侧翼标记InDelB01、SSRB-99、SSRB-130可用于黑刺辅助选择育种,准确率在97.9%以上。  

盐胁迫对番茄幼苗生长发育的影响

系统地研究了培养基中盐胁迫对番茄种子萌发，幼苗生长状况及根尖微核率等的影响，结果表明，低盐浓度（0％－0.2％）条件对番茄种子萌发，幼苗生长及根尖微核率影响不大，但盐浓度从0．3％开始无论是对种子萌发或幼苗生长状况，还是根尖微核率，都有明显影响。同时发现根尖微核率的变化趋势与平均侧根数的变化趋势呈正相关。  

黄瓜子叶节离体再生体系的研究

以6个品系的欧洲温室型全雌系黄瓜子叶节为材料,比较了不同激素组合,苗龄,切割方式和基因型,从而建立了简单快速高效的黄瓜离体再生体系。结果表明:在MS+BA1.5mg·L-1+IAA0.2mg·L-1上启动培养3d为最佳芽启动培养方式,再转入最佳芽诱导培养基MS+TDZ0.02mg·L-1。10d苗龄的子叶节出芽率最高,保留两片子叶各切除1/3为最佳切割处理方式,六种基因型均能生芽,且每外植体出芽数均较高达1.93～3.15。整个过程从种子萌发到驯化移栽,仅需8周。  

黄瓜离体培养再生技术及农杆菌介导的ACS1转化

利用诱导分化培养基(MS BA 1.5mg·L-1 ABA 0.5mg·L-1 AgNO3 2.0mg·L-1 蔗糖30g·L-1 琼脂5.8g·L-1,pH5.8)对26个黄瓜自交系的子叶进行离体再生培养,其中的S52、S94、S04、S17S44和S47等6个自交系具有较高的不定芽分化率,最高达93%(S44),最低为57%(S94)。除草剂PPT对这6个材料再生分化的抑制程度品种间差异较大。以S52(ff)的子叶为外植体,以pEZT-ACS1为中间载体,利用优化的S52诱导分化培养基MS BA 2.0mg·L-1 ABA 2.0mg·L-1 AgNO3 2.0mg·L-1进行农杆菌(LBA4404)介导的遗传转化,选择培养基中PPT浓度为2.0mg·L-1,生根培养基中PPT浓度为1.0mg·L-1,获得抗性再生苗,经PCR检测有15株为阳性株,炼苗移栽到温室。  

草莓灰霉病抗性遗传分析和分子标记初定位

灰霉病是草莓生产中普遍发生的病害之一，造成其严重减产。为了加快苹莓灰霉病抗病分子标记辅助育种进程，本文以草莓灰霉病高感亲本达赛莱克特（89）与高抗亲本甜查理（103）杂交得到34株 Fl个体，经F1代自交得到的248株F2代群体为试验材料，进行草莓灰霉病抗性鉴定和遗传分析，探讨草莓灰霉病抗性的遗传规律，结合集群分离分析法（BSA）和SSR分子标记技术，获得了与草莓灰霉病抗性基因连锁的SSR分子标记。结果表明，供试亲本间灰霉病抗性受一对显口单基因控制。通过F2代遗传分析，鉴定出1个与抗性基因连锁的分子标记UFFxa01H05，该标{与抗性基因间的遗传距离为15．9cM。  

长春花种质资源遗传多样性的ISSR分析

本研究利用ISSR分子标记技术对40个长春花种质资源进行了遗传关系分析,多态性PCR扩增结果表明:在115个位点,其中多态位点78个,多态位点百分率为67.8%,多态性较高;POPGENE32软件计算结果表明,40个长春花品种平均有效等位基因数为1.6384,Nei遗传多样性指数平均为0.3735,平均Shannon信息指数为0.5546;应用NCSYS软件计算得到品种间的遗传相似系数介于0.150～0.900,平均为0.584.通过聚类分析将这40个长春花种质分成7组,该聚类结果与以前根据形态进行的分类结果有极大的相似性.