尘肺患者血清β—胡萝卜素与抗氧化功能的研究

本研究测定了尘肺病人，慢性支气管炎病人及健康成人的血清β－胡萝卜素和ＶｉｔＡ含量以及血甭脂质过氧化酶含量，超氧化物歧化酶和谷胱苷肽过氧化物酶活性。结果发现，尘肺组血清ＢＣ含量明显低于健康组和慢支组（Ｐ＜０．０１）。而血清ＶｉｔＡ含量３个组相近（Ｐ＞０．０５）。与健康组和慢支组比较，尘肺组血ＬＰＯ含量明显升高，ＳＯＤ和ＧＳＨ－Ｐｘ活性则明显降低（Ｐ均＜０．０１）。上述结果提示，尘肺病人抗氧化功能明显     

中国人血管抑素基因的克隆及其序列分析

目的：克隆中国人血管抑素(angiostatin，ANG)基因全长并进行序列分析。方法：应用RT-PCR，将5例健康人肝脏组织ANG基因克隆到pSP71载体上，用Sanger法进行基因测序分析。结果：通过RT-PCR获得一个1141bp的扩增产物，测序发现与已报道的ANG比较，国人ANG上有3个碱基突变位点：分别为第825位C→T；第927位T→G和第1078位G→A。前两个碱基突变氨基酸未发生变化，第3个碱基突变结果使缬氨酸(Val342)改变成为蛋氨酸(Met342)。结论：克隆得到中国人ANG基因片段，其碱基和氨基酸的变化可能是人群中该基因的遗传多态现象。     

Kringle 5的真核植物细胞穿梭表达载体的构建

目的：构建含有目的基因kring5的真核植物细胞穿酸表达载体。方法：应用RT－PCR方法，从正常人肝脏组织中获得kringle5基因，测序后，再通过DNA重组技术，将kringle5基因片段克隆到真核植物细胞表达载体pBI121和pCAMBIA3301上。结果：得到的kringle5基因序列测定结果与文献相符，重组载体pB1k5和pC33k5经酶切鉴定正确，含有植物高效表达CaMV35S启动子。结论：重组载体pB1k5和pC33k5不仅可以在大肠杆菌中稳定复制，而且可以在植物细胞中表达。     

β-胡萝卜素和盐藻提取物剌激小鼠免疫功能

用β-胡萝卜素和盐藻提取物给小鼠腹腔注射,剂量为10mg/kg/d,10天后断颈处死小鼠观察其睥细胞和腹腔巨噬细胞功能。实验结果表明,β-胡萝卜素和盐藻提取物组的脾细胞增殖活性和巨噬细胞膜表面 C3b 受体活性明显高于对照组(P<0.01)。实验结果提示,β-胡萝卜素和盐藻提取物经腹腔途径可刺激小鼠免疫功能。     

微藻异养产生二十碳五烯酸的新进展

二十碳五烯酸(Eicosapentaenoic acid简写EPA)是一种长链多不饱和脂肪酸，在营养强化、防治心血管疾病、减轻炎症等方面起着十分重要的作用。目前EPA主要来源于鱼油，很难满足市场对EPA日益增长的需求，必须寻求替代生产EPA的资源。一些微藻可在不需要光的条件下以廉价的有机物为原料异养生长，在异养条件下，可以很好地控制培养模式，有可能大规模地生产EPA。工业上用微藻生产EPA研究包括：筛选高EPA产量的微藻株，通过基因工程改善藻株，优化培养条件以及建立有效的培养体系。本文综述了近几年微藻在异养条件下生产EPA的最新进展，着重阐明硅藻是一种能在异养条件下生长且具有高EPA产率的模式藻株。     

钙和维生素D对高脂饮食诱发的小鼠乳腺上皮增生的影响

本研究目的是观察饮食中添加钙和维生素D对高脂饮食诱发的小鼠乳腺上皮细胞增生的影响。将四周龄小鼠随机分成三组，分别给予对照AIN－76A饲料，高脂低钙低维生素D饲料（试验饲料Ⅰ）和高脂加钙加维生素D饲料（试验饲料Ⅱ）。饲养九周后终止试验，小鼠植入渗透泵灌注溴脱氧尿苷（Brdu）72小时。结果显示试验饲料Ⅰ组的小鼠乳腺终末小导管上皮细胞Brdu标记指数与对照饲料组比较明显升高（P＜0．05）。而试验饲料Ⅱ组的BrdU标记指数与对照组相似（P＞0．05）。本实验研究发现进一步证明，高脂饮食能诱发小鼠乳腺小导管上皮细胞的增生，同时也提示饮食中添加钙和维生素D有助于预防高脂饮食的这种不良作用。     

杜氏盐藻基因组文库的构建

目的　构建杜氏盐藻基因组文库,旨在进一步分离和研究杜氏盐藻基因的结构和功能。方法　采用改进的SDS裂解法提取杜氏盐藻基因组DNA ,通过限制性内切酶Sau3AI进行部分酶切,用T4DNA连接酶将目的片段与噬菌体EMBL3载体臂进行连接后转染大肠杆菌LE3 92。结果　体外包装构建了杜氏盐藻基因组文库,得到重组子数为2 .2×10 4,经测定文库滴度为2 .2×10 5pfu/mL。结论　构建了杜氏盐藻基因组文库,为进一步筛选盐藻重要基因及其序列分析奠定基础。     

肝细胞癌高表达基因TPT1真核报告表达载体的构建及鉴定

目的构建TPT1真核报告表达载体pEGFP-N3TPT1,为进一步研究其功能奠定基础.方法通过PCR和酶切的方法获取具有黏性末端的TPT1基因的全长开放读码框,将其定向连入真核表达载体pEGFP-N3绿色荧光报告基因的氨基侧,构成pEGFP-N3TPT1的真核报告表达载体,通过酶切和测序鉴定TPT1的正确插入.结果酶切和测序均证实TPT1正确插入了真核报告表达载体pEGFP-N3TPT1中.结论成功构建了TPT1的真核报告表达载体pEGFP-N3TPT1.     

食管鳞状细胞癌细胞及组织中钙敏感受体基因启动子区甲基化状态检测

目的:研究钙敏感受体(CASR)基因启动子区甲基化状态与食管鳞状细胞癌(ESCC)发生之间的关系,探讨CASR甲基化作为潜在的ESCC早期诊断标志物的可能性。方法:采用甲基化特异性PCR(MSP)方法分析6株食管癌细胞系、8例正常食管黏膜组织以及68例原发ESCC组织中CASR启动子区的甲基化状态。采用半定量RT-PCR方法分析甲基化酶抑制剂5-氮杂-2’-脱氧胞嘧啶核苷(5-Aza)处理前后食管癌细胞系中CASRmRNA的表达情况。结果:5株食管癌细胞系(KYSE30、KYSE70、KYSE140、TE8、BIC1)CASR启动子区发生甲基化,而KYSE510未发生甲基化。KYSE30、KYSE140细胞系CASR基因表达缺失,5-Aza处理96h后恢复表达;而KYSE510处理前后均有表达。在68例原发ESCC组织中,CASR启动子区甲基化率为71%(48/68),而在8例正常食管黏膜组织中CASR启动子区均未甲基化(0/8)。CASR启动子区甲基化与ESCC患者的年龄构成(χ2=1.114,P=0.291)、性别(χ2=0.342,P=0.558)、肿瘤位置(χ2=1.209,P=0.546)、临床TNM分期(χ2=0.181,P=0.670)及淋巴结转移(χ2=1.169,P=0.280)无关。结论:CASR基因在ESCC组织中的表达受启动子区甲基化的调控;CASR启动子区甲基化在ESCC组织中频繁发生,可能作为食管癌早期诊断的潜在标志物和治疗靶点并在其发生发展中起重要作用。     

杜氏盐藻核基质附着区结合蛋白基因的克隆及原核表达

目的:构建杜氏盐藻核基质附着区(MAR)结合蛋白的原核表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3),表达并纯化融合蛋白.方法:根据GenBank上杜氏盐藻MAR结合蛋白的cDNA全长序列设计出含有特定酶切位点的引物,PCR法获得MAR结合蛋白基因序列全长,将其克隆至载体pMD18-T中.酶切连接到pET-28a(+)上构建原核表达载体pET-MBP,转化感受态大肠杆菌BL21(DE3),异丙基硫代-β-半乳糖苷(IPTG)诱导其表达,Western blotting检验其表达结果.结果:重组质粒经酶切、PCR、测序鉴定,成功构建了原核表达载体pET-MBP,对表达的融合蛋白的Western blotting分析结果表明表达的蛋白质为目的蛋白.Ni2+亲和层析法纯化蛋白质,纯化后目的蛋白在总蛋白中的含量约为70%.结论:成功地克隆杜氏盐藻MAR结合蛋白基因的全长并在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,且纯化了MAR结合蛋白的融合蛋白.