天花粉蛋白突变体TCS_(KR173-174CG)的构建、表达与纯化

目的构建天花粉蛋白(TCS)突变体基因,并进行表达及纯化。方法应用计算机预测TCS分子上可能的抗原决定簇,并进行定点突变。以栝楼基因组DNA为模板,经PCR扩增突变基因,与pRSET-A表达载体连接,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达,并对表达产物进行Ni-NTA层析纯化。结果目的蛋白在大肠杆菌中获得高效可溶性表达,表达产物经纯化后,得到均一的TCS突变体蛋白。结论已成功构建了TCS突变体基因,并获得高效表达。     

天花粉蛋白的定点突变及聚乙二醇修饰

目的对天花粉蛋白(Trichosanthin,TCS)进行定点突变及聚乙二醇(PEG)修饰,并对修饰产物进行DNA酶活性分析。方法选择TCS分子上可能的抗原决定簇位点(YFF81-83和KR173-174)进行定点突变,将所构建的两个突变体(TCSYFF81-83ACS和TCSKR173-174CG)在大肠杆菌中表达,并纯化表达产物。通过第82位和173位引入的半胱氨酸残基,分别对突变体蛋白进行PEG定点修饰。通过与突变型TCS比较,分析两个PEG修饰型TCS的DNA酶活性。结果突变的TCS经酶切鉴定及测序分析,证明质粒构建正确,表达的目的蛋白相对分子质量约为30000,经PEG修饰后,相对分子质量约为40000。初步分析显示,与突变型TCS相比,所构建的两个PEG修饰型TCS也显示出类似DNA酶活性。结论成功进行了TCS的定点突变及PEG修饰,为基因工程及化学修饰方法改造TCS提供了一条可行的途径。     

基于DSP技术的等离子切割机电源系统的研究

该设计应用DSP技术对等离子切割电源系统的功率因数进行校正,减小了谐波对电网的干扰,提高了电源输出的稳定性。该系统的各级控制环节采用德州仪器生产的DSP芯片TMS320F2812数字信号处理器进行处理,建立等离子切割电源功率因数的数字化控制系统。该系统应用电流传感器检测boost模块的输入电流,通过采样与A/D变换和PID控制实现稳定的恒电流输出,从而有效地提高了电源系统的功率因数和工作稳定性,增强了系统的抗高频干扰能力。     

SEN病毒D亚型部分基因的克隆、表达和鉴定

目的获得序列正确的SENV-D亚型ORF1 C-端蛋白基因,并进行表达。方法用PCR法从SENV阳性血清中获得SENV-D ORF1 C-端基因,测序验证后,构建pQE30-SD重组表达质粒,并转化E.coliM15,进行IPTG诱导表达及Western blot分析。结果获得的SENV-D亚型ORF1 C-端蛋白基因序列正确,表达蛋白相对分子质量约为38 000。经Western blot证实能与阳性血清发生抗原抗体反应。结论已成功获得了SENV-D ORF1 C-端蛋白,为今后进一步研究奠定了基础。     

人乳头瘤病毒16型L1 N-端主要抗原基因的原核表达

目的　获得序列正确的人乳头瘤病毒 (HPV) 16型L1N -端主要抗原基因 ,构建其原核表达载体 ,并进行诱导表达。方法　采用PCR法从宫颈癌组织中获得HPV16型L1N 端主要基因重组表达质粒 ,转化E .coliDH5α ,4 2℃诱导表达 ,Westernblot分析表达产物。结果　获得了序列正确的人乳头瘤病毒HPV16型L1N -端主要基因 ,相对分子质量约为 5 10 0 0。表达蛋白能与乳头瘤病毒抗体及乳头瘤病毒感染患者的血清发生抗原抗体反应。结论　已成功构建HPV16型L1N -端主要基因表达载体 ,并获得有效表达。