药物诱导玉米孤雌生殖植株的倍性变异

实验结果表明,孤雌生殖植株根尖体细胞以二倍体细胞最多,占６８．９％,其次为非整倍体细胞,占２８．７％,其他异倍体和单倍体细胞极少（２．４％）。Ｐａ１植株可分为二倍体和混倍体两类,以二倍体细胞占绝对多数的混倍体植株最多,为８３．５％,这些植株生长发育和结实均正常。在花粉母细胞中正常二倍体频率比根尖体细胞明显提高,提高频率为３５．３一５９．６％,不同材料之间趋势一致。讨论了体细胞染色体变异的来源及其能否延续到生殖细胞。     

基质金属蛋白酶-2在酵母系统中表达的初步研究

基质金属蛋白酶-2（明胶酶A）在肿瘤侵袭和转移中具有重要作用,为进一步研究其作用机制,在酵母系统中表达了金属蛋白酶-2通过PCR方法获得明胶酶A的表达序列,酶切和测序结果证明序列正确后,构建明胶酶A的表达载体pPIC9/GelA,电击法转化酵母得到阳性克隆.明胶酶谱分析说明表达产物具有明胶底物特异性,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳表明,表达产物的分子质量为66 ku.     

人基质金属蛋白酶-9在酵母Pichia pastoris中的表达

基质金属蛋白酶 - 9( MMP- 9)可促进恶性肿瘤的侵袭、转移 ,并在组织重建、胚胎发育以及伤口愈合等生理过程中发挥重要作用 .为研究这一蛋白的性质 ,并以之为靶标筛选抗肿瘤转移药物 ,在酵母 Pichia pastoris中实现了重组人 MMP- 9蛋白的高效、高活性、分泌表达 .首先用 PCR扩增了 MMP- 9基因编码区 (不含信号肽序列 ) ,经测序证实后 ,将其插入 p PIC9质粒中 ,构建表达载体 .用 Li C1 - PEG法转化酵母后 ,采用明胶 -酶谱法筛选获得 5株高效分泌表达 MMP- 9的克隆 ,经PCR证实 MMP- 9基因整合在阳性克隆的染色体中 .重组蛋白分子量为 93k D,表达量为 1 0 mg/L.重组蛋白可水解明胶及 型胶原 ,并可经有机汞 APMA诱导发生自剪切 ,转换成 85k D的激活形式 ,表明重组蛋白具有与天然人 MMP- 9蛋白相似的底物水解活性和自剪切激活特性 .     

远缘杂种孤雌生殖系Giemsa C—带的遗传稳定性分析

利用ＧｉｅｍｓａＣ－显带方法发现在玉米自交系自３３０和二倍体多年生类玉米远缘杂交孤雌生殖后代中出现广泛的Ｃ－带结构异染色质变异,表现为Ｃ－带数目和分布位置的变化以及异配型Ｃ－带的出现。这种变异不仅存在于表型不稳定的早代孤雌系中,而且还存在于表型稳定的高代系中。造成这种变异的原因可能是因为远缘种质的引入影响到遗传平衡进而引起染色体发生结构重排并引起染色质的变化,这种变化与玉米染色体组中非同源染色体间存在的同源片段和因此造成的减数分裂过程中非同源染色体配对有着直接的关系。这些研究对于认识孤雌生殖育种的理论基础和应用价值具有重要意义。     

人组织型基质金属蛋白酶抑制剂-1在Pichia pastoris酵母中重组表达研究

 为研究组织型基质金属蛋白酶抑制剂 (TIMPs)的分子作用机制 ,探讨了在 Pichia pastoris酵母中高效表达分泌型人组织型基质金属蛋白酶抑制剂 - 1 (TIMP- 1 )的技术路线 ,并对产物性质进行初步研究 .通过 PCR从含有 TIMP- 1基因的 p BS质粒获得了该基因的全长序列 ,构建了 p PIC9/T1表达载体 ,电击法转化酵母 ,通过表型筛选和 PCR鉴定证实了目的基因已稳定整合入 Pichiapastoris酵母基因组中 .SDS- PAGE表明表达量高达 40 mg/L培养上清 .用免疫印迹法确定了产物的正确性 ;同时 ,反向明胶酶谱法证明了重组蛋白具有抑制基质金属蛋白酶的活性 .