水牛脑神经节苷脂的分离纯化

因神经节苷脂(gangliosides,简称GLS)的生物学功能的研究日益受到重视,对各种GLS纯品的需求越来越迫切,而目前市场上尚无供应。本文选用水牛脑为材料,参考有关方法,择优组合或略加改进,提取纯化了水牛脑中四种主要的GLS。提取GLS是利用其亲水脂分子特性,用氯仿-甲醇混合液抽提脑组织的丙酮粉,将抽提物进行Folch分配,使GLS从有机相溶媒转移到水相,然后进行DEAE-Sephadex A-25离子     

大白鼠肝细胞胰岛素受体的放射受体法测定

肝细胞胰岛素受体的放射受体测定,已有不少报道,但方法不易重复.我们根据本实验室的条件,建立了大鼠肝细胞胰岛素受体测定的方法.并采用Scatchard作图法和De Meyts作图法,可分别获得胰岛素受体特性的二个重要参数——受体总数和亲和力. 材料与方法一、材料 1.Wistar大白鼠160—180g,2,~(125)I-胰岛素258μci/μg由华山医院糖尿病研究室提供,标记方法系采用B.B.Tower双步酶标法.     

介绍一种新的电泳技术——蛋白质的硝酸纤维纸转移电泳

硝酸纤维纸转移电泳首先应用于DNA片段的研究中,其原理是把琼脂糖凝胶电泳后分离的DNA各片段,再一次,转移到硝酸纤维纸上,然后在纸片上进行DNA-RNA杂交等实验。由于Southern最先报道,转移过程又类似于把墨迹吸到吸墨纸上,故称Southern Blot。此后Alwine等又把它应用到RNA的研究上,称为Northern Blot。Towbin等又扩展到蛋白质研究中,取名为Western Blot。最近Reinhart等将等电聚焦电泳后的蛋白质转移到硝酸纤维纸,称为Eastern Blot。这种方法为蛋白质检测提供了方便,也扩大了凝胶电泳技术的应用范围。本文综合国外的报道,并结合     

一种合成氚标记-Y磷酸胞嘧啶乙酰神经氨酸的简便方法

本文介绍一种合成氚标记—磷酸胞嘧啶乙酰神经氨酸(CMP-³H-NAN)的有效方法。其步骤主要采用在碱性环境中使氚水中的氚元素与游离乙酰神经氨酸(NAN)第三位碳原子上氢元素发生交换而得放射标记物。然后在CMP-NAN合成酶的作用下使其与CTP反应而得CMP-H-NAN。本法的特点是流程简便,成本低廉,CMP-NAN合成酶的提取与保存十分方便。     

肝癌中CMP-乙酰神经氨酸:GM_3(α2→8)唾液酸转移酶(GD_3合成酶)的研究及纯化的初步报告

本实验室曾报道在所检测的不同种族来源与不同致癌剂所诱发的肝细胞肝癌中均有神经节苷脂GD_3组份的明显增高,本文就这一现象的机制进行了探讨。实验结果表明在人肝癌手术标本、人肝癌细胞株SMMC,3′-甲基奶油黄(3′Me-DAB)和二乙基亚硝胺(DENA)所诱发的大鼠肝癌以及大鼠肝癌株BERH-2中GD_3合成酶的活性均有不程度的增高,同对GD_3前体的合成酶(GM_3合成酶)的活性也有所增高。这就提示肝癌中GD_3增高的原因之一在于GD_3合成酶的活性增高与前体供应充足的结果。另外,本文还对GD_3合成酶的提纯做了初步尝试。主要采用Tritonx-100抽提和CDP-hydrazide Sepharose 4B亲合层析的方法从二乙基亚硝胺诱发的大鼠肝癌中提纯了GD_3合成酶。提纯倍数为12500倍,产率0.4％。提纯的GD_3合成酶在醋酸纤维膜上经等电聚焦电泳鉴定示单一条带,其pI值为5.25左右。关于糖脂唾液酸转移酶的纯化工作目前还未见报道。     

3′-甲基奶油黄诱癌过程中大鼠肝凝集素活性的变化

 <正> 近年来,人们甚为重视细胞表面成分在肿瘤形成过程中的变化。许多文章报道肿瘤细胞膜的组成、结构、功能与正常者有明显的差别。 哺乳动物的肝凝集素(HL)也是一种细胞膜成分。它专一性地与末端为β-半乳糖苷的糖蛋白及糖脂结合。在体内它介导许多去唾液酸糖蛋白的内香,然后在肝细胞内降解。肝凝集素也可能参与肝细胞间的粘着,并与肿瘤肝转移的形成相关。     

神经鞘脂病的酶学诊断方法——用培养的人皮肤成纤维细胞检测

 神经鞘脂病是一类神经鞘脂分解代谢障碍的遗传性疾病,酶学检测是确诊的一种主要手段。在通常采用的标本中,培养的人皮肤成纤维细胞是最理想的酶源。本文改良七种用人工底物检测酶活性的方法,通过控制细胞传代和细胞生长时相的措施,用自己培养的34个正常人的皮肤成纤维细胞建立对GM_1-神经节苷脂累积症,GM_2-神经节苷脂累积症,异染质型脑白质营养不良症,krabbe氏病,Gaucher氏病,Niemann-Pick氏病和Fabry氏病等七种相对常见的神经鞘脂病的酶学诊断正常值。并就标本供体的年龄,培养细胞的传代与细胞所处的生长时相对酶活性的影响进行探讨。     

菝葜皂甙原对Na~ 、K~ -ATP酶抑制的动力学研究

本文对菝葜皂甙原抑制Na~ 、K~ -ATP酶的动力学与机理进行了研究,并且与哇巴因的抑制作用进行了比较。动力学研究表明菝葜皂甙原抑制Na~ 、K~ -ATP酶,对底物Na~ 、K~ 均为混合性抑制剂;而对ATP则为反竞争性抑制剂。观察了磷脂对哇巴因和菝葜皂甙原抑制Na~ 、K~ -ATP酶的影响。磷脂不影响哇巴因的抑制作用;但多种磷脂都不同程度地降低菝葜皂甙原对Na~ 、K~ -ATP酶的抑制作用。     

2′—5′寡聚腺苷酸衍生物的研究——Ⅰ.以2′-5′寡聚腺苷酸作为T_4-RNA连接酶的供体和受体合成其衍生物的方法

在干扰素的功能表达中,2′-5′寡聚腺苷酸是一类重要的媒介物。本文研究了T_4-RNA连接酶的专一性及其用于2′-5′寡聚腺苷酸衍生物合成的可能性。1980年,我们曾发现2′-5′寡聚腺苷酸可以作为RNA连接酶的受体。本文对此作了进一步的研究,证实了T_4-RNA连接酶可以将pNp(N=A,G,C,U)、pCpUpC、pCpm_2~2G等供体连到2′-5′P_3A_3受体上去,生成各种相应产物。2′-5′磷酸二酯键连接的寡核苷酸能否作为T_4-RNA连接酶的供体,有人估计不大可能。本文也证实了T_4-RNA连接酶能将供体pA~(2′)p~(5′)A连接到CpUpC、UpCpCpA、Cpm′IpψpG等受体上面去。从而说明T_4-RNA连接酶也可使用2′-5′磷酸二酯键连接的寡核苷酸作为供体。应用T_4-RNA连接酶,可以合成既含有2′-5′又含有3′-5′磷酸二酯键的寡核苷酸。本工作还证明A~(2′)p~(5′)A也可以作为T_4-多核苷酸激酶的底物。