木贼生物碱的提取及其功能的研究

以木贼为研究对象,提取生物碱,并对其体外抗氧化及抑菌功能进行研究,采用乙醇提取法和盐酸提取法确定生物碱的最佳提取条件,并研究木贼生物碱对羟自由基、超氧自由基、DPPH自由基的清除效率及其对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌的抑制效果。当乙醇浓度80%、料液比13 mL/g、浸泡时间18 h、浸提液pH值5时,木贼生物碱的提取含量最高。研究发现,木贼生物碱对羟自由基、超氧自由基、DPPH自由基的清除能力随着生物碱浓度提高而增强,其中对DPPH自由基的清除效果最佳,达到98.1%。木贼生物碱对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌均有一定的抑菌效果,最明显的是大肠杆菌,抑菌浓度为5 mg/mL。木贼生物碱通过乙醇提取效果较好,且体外抗氧化及对大肠杆菌等具有明显的抑制作用。本研究可为广泛应用木贼的药用价值奠定基础。     

灵芝多糖糖供体合成途径中关键酶的异源表达及其酶学性质

【背景】灵芝多糖(Ganoderma lucidum polysaccharide,GLP)是一种具有多种生物活性的大分子物质,已有研究者通过发酵调控优化或菌种改良使灵芝多糖产量得到一定的提高。但由于灵芝多糖糖供体合成途径并未完全明晰,其中关键酶特性解析也不完善,使得灵芝多糖产量的大幅度提高仍存在瓶颈。【目的】通过异源表达大量制备灵芝中含量较少的磷酸葡萄糖变位酶(Phosphoglucomutase,PGM)、UDP-葡萄糖焦磷酸化酶(UDP-glucosepyrophosphorylase,UGPG)和磷酸甘露糖异构酶(Phosphomannose isomerase,PMI),并分别探究和比较其酶学性质,深入了解灵芝多糖的糖供体合成途径中关键酶的特性信息,为灵芝多糖合成发酵策略的高效制定提供依据。【方法】以灵芝菌株CGMCC5.26的c DNA为模板,克隆得到关键酶基因gl-pgm、gl-ugpg和gl-pmi,分别在E. coli BL21(DE3)中诱导表达,产物通过Co-NTA树脂纯化后进行酶学性质研究。【结果】纯化酶GLpgm、GLugpg和GLpmi均在E. coli中实现大量表达。GLpgm的最适反应pH为8.5,GLugpg和GLpmi的最适pH同为7.5;GLpgm、GLugpg和GLpmi最适反应温度依次为35、40和30°C;1mmol/L的Ag+和Cu2+对3种酶均具有强烈抑制作用,Mn2+、Mg2+对GLpgm和GLpmi均有激活作用,其中Mn2+对GLpgm的激活作用高达2.7倍。GLpgm、GLugpg和GLpmi的kcat/Km值分别为196.08、818.60和1 105.22 mmol/(L·s)。【结论】在最适反应pH、温度及金属离子作用方面,GLpgm、GLugpg和GLpmi与植物及真菌来源的这3种酶较为相似,对底物的催化效率相对其他来源的酶高,为基于灵芝多糖合成途径的调控提供了更完善的信息。     

基于灰色关联的苗药红禾麻总黄酮含量影响因子分析

采用Al Cl3比色法对苗药红禾麻42个居群中的总黄酮含量进行分析测定,并用土壤养分测定仪测定对应产地土壤中的铵态氮、速效磷、有效钾、p H值和水分,通过向距产地较近的气象部门查询和以全球卫星定位系统GPS、海拔表等测定地理气候因子,结合42个居群红禾麻ISSR遗传多样性分析结果,运用灰色关联度分析法对红禾麻不同种质资源药材中总黄酮的含量与各影响因子进行相关性分析。结果表明:42个红禾麻不同种质资源药材总黄酮含量为0.42%~2.16%,平均加样回收率为97.86%,RSD为1.5%;环境因子和遗传因子中与总黄酮含量关联度较大的因素分别为无霜期和Shannon信息指数I,而各影响因子与总黄酮含量的关联度中,以Shannon信息指数I(r=1.03)最大,土壤p H(r=0.49)最小,表明遗传因子对红禾麻药材总黄酮含量的影响大于环境因子。该研究结果为红禾麻药材优良种质资源筛选及野生变家种研究提供了依据。     

灵芝UDP-葡萄糖4-差向异构酶酶学性质研究及其应用

【背景】灵芝多糖是灵芝的重要活性物质之一。UDP-葡萄糖4-差向异构酶（UDP-glucose 4-epimerase,UGE,EC 5.1.3.2）是灵芝多糖合成途径中糖供体生成的重要酶,其参与了UDP-葡萄糖与UDP-半乳糖的相互转化,与多糖中半乳糖残基含量密切相关。【目的】通过对来源于灵芝的UGE基因进行异源表达,丰富灵芝多糖糖供体合成途径重要酶的酶学特性信息,深入了解灵芝多糖代谢合成途径。【方法】以灵芝菌株（Ganoderma lingzhi） CGMCC 5.26的cDNA为模板,克隆得到UGE基因GL30389,并在Escherichia coli BL21（DE3）中诱导表达,产物纯化后进行酶学性质、酶动力学、底物专一性及转化率的研究。【结果】灵芝UGE的分子量为45 kDa。最适反应pH值为6.0,在pH 7.0—9.0范围内有较好的稳定性;最适反应温度为30℃,温度在40℃时稳定性最好。Fe²⁺和Mg²⁺对UGE有激活作用。以UDP-葡萄糖为底物时,K_m为0.824 mmol/L,V_max为769.230 μmol/（L·min）,k_cat为1.333 s^—1,k_cat/K_m为1.618 L/（mmol·s）。灵芝UGE对D-葡萄糖、半乳糖醛酸及N-乙酰葡萄糖胺有催化活性。通过优化pH、温度、底物与酶的配比、添加金属离子将转化率从16.0%提升至39.4%。【结论】灵芝UGE与植物来源的UGE酶学性质较为相似,其催化效率优于大部分细菌来源的UGE。本研究丰富了灵芝多糖糖供体合成途径重要酶的酶学特性信息,有利于深入了解灵芝多糖代谢合成途径。     

不同产地蜂胶中氨基酸含量的比较

选择国内外7种不同产地蜂胶,采用氨基酸自动分析仪分别测定其氨基酸含量。结果表明,所测蜂胶均含有17种以上氨基酸,其构成模式比较接近,但氨基酸含量差异较大,北京蜂胶总氨基酸含量最低,为26.96mg·100g-1,杭州蜂胶总氨基酸含量最高,为165.74mg·100g-1,谷氨酸为各产地蜂胶中含量最高的氨基酸,其中杭州蜂胶谷氨酸含量居首,为30.74mg·100g-1,大部分蜂胶中约30%的氨基酸为必需氨基酸。不同产地蜂胶氨基酸含量差异,可能是影响其生物活性的一个重要因素。