香菇蛋白的分级纯化和结构分析

香菇粉经10℃pH 10的水提取制备香菇蛋白,得率13.1%,其蛋白含量47.5%,多糖含量24.2%.香菇蛋白经DEAE Sepharose CL-6B柱层析分级得5个级分,收集级分F1、F2、F3、F4,它们都是由蛋白和多糖构成的复合物.Sepharose CL-6B凝胶色谱显示,F2和F4的分子量分布较为均匀,且以蛋白为主,多糖含量很低;F3主要由两个分子量不同的蛋白级分构成,含有一定的多糖;F1中多糖含量较高,蛋白含量较少,且多糖分子量分布均匀.香菇蛋白的分子量主要集中在20 kDa～40 kDa之间.F1、F3、F4都属于酸性蛋白质,含有除色氨酸之外的7种必需氨基酸,除蛋氨酸含量较低外,其余必需氮基酸含量接近,且赖氨酸含量较高.红外光谱分析表明,香菇蛋白的二级结构主要为α-螺旋和无规卷曲.     

多糖的甲基化方法及图谱解析

本文对微量多糖的甲基化方法进行了研究。0.1 mg多糖样品用0.3 mL二甲亚砜溶解后,加入10 mg氢氧化钠粉末,室温下超声20 min。冰浴冷却后加入0.1 mL碘甲烷1,8～20℃下超声20 min,再加入0.1 mL碘甲烷,超声20 min。加入1 mL含4 mmol/L Na2S2O3的水,终止甲基化反应。反应液用0.5 mL氯仿提取4次,氯仿提取液用0.5 mL水处理5次。氯仿相用无水硫酸钠脱水后,氮气吹干。该法简便易行,甲基化程度高,适用于易溶(或难溶)于水和二甲亚砜的多糖。此外,本文对部分甲基化的糖醇乙酰酯衍生物的质谱图解析进行了阐述,并对特殊糖类样品的甲基化方法进行了说明。