全组织提取物检测A-to-I RNA编辑酶活性

目的:建立一种简便、快速、可靠的检测A-to-IRNA编辑酶活性的方法。方法与结果:一步法制备的C57BL/6小鼠十种组织的全组织提取物,在各提取物中检测到A-to-IRNA编辑酶的非特异性编辑活性,不同组织中A-to-IRNA编辑酶活性的强度依次为脑>肺>胸腺>脾>淋巴结>肝>肾>睾丸>心脏>骨骼肌,编辑活性与加入反应体系中的蛋白量成正相关。结论:一步法制备的全组织提取物可用于检测A-to-IRNA编辑酶活性,该方法操作简便、可控、省时。     

辛伐他汀对糖尿病大鼠阿司匹林抵抗的影响及其机制

目的：观察辛伐他汀对糖尿病大鼠阿司匹林抵抗的作用及机制。方法：选取雄性8周龄Wistar大鼠96只,随机分成糖尿病组和正常组（n=48）。糖尿病组大鼠腹腔一次性注射1%链脲佐菌素（STZ） （65 mg/kg,溶于0.l mmol/L、pH 4.5的柠檬酸缓冲液）来诱发糖尿病模型,正常组大鼠注射相同剂量的柠檬酸缓冲液。血糖大于16.8 mmol/L且同时具备多饮、多尿、体重减轻的糖尿病症状的大鼠认为糖尿病造模成功。糖尿病和正常大鼠分别随机分为糖尿病对照组（DM）、糖尿病阿司匹林组（DM-ASA）、糖尿病辛伐他汀组（DM-SIM）、糖尿病阿司匹林联合辛伐他汀组（DM-ASA+SIM）和正常对照组（NC）、正常阿司匹林组（NC-ASA）、正常辛伐他汀组（NC-SIM）、正常阿司匹林联合辛伐他汀组（NC-ASA+SIM）（n=12）。阿司匹林组、辛伐他汀组及阿司匹林联合辛伐他汀组分别给予10 mg/kg阿司匹林、2 mg/kg辛伐他汀、10 mg/kg阿司匹林加2 mg/kg辛伐他汀溶于PBS灌胃,对照组给予等量PBS灌胃。连续灌胃8周后,评价血小板聚集功能和血小板活化指标,检测大鼠血清一氧化氮（NO）、内皮素（ET）、前列环素（PGI2）、脂联素（APN）、血栓素B2（TXB2）水平和血清超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）水平;进行大鼠胸主动脉离体血管张力实验评价内皮功能;检测大鼠胸主动脉血红素氧合酶-1（HO-1）、血红素氧合酶-2（HO-2）、内皮型NO合酶（eNOS）、磷酸化-内皮型NO合酶（p-eNOS）、抗凋亡蛋白（Bcl-2）、环加氧酶-2 （COX-2）等蛋白的表达水平。结果：与对照组大鼠相比,糖尿病大鼠其血小板活化及聚集值增高,且模型组呈现阿司匹林的反应性减低现象（P<0.05）;在糖尿病大鼠,阿司匹林联合辛伐他汀较单用阿司匹林组显著降低血小板活化及聚集值（P<0.05）,其通过上调HO-1、eNOS、p-eNOS、Bcl-2等蛋白的表达水平及升高血清APN水平,下调COX-2蛋白表达水平,通过改善内皮功能,调节TXA2/PGI2水平、增加NO水平,发挥其抗血小板作用。结论：糖尿病大鼠呈现阿司匹林反应性减低,辛伐他汀具有潜在的改善血小板对阿司匹林的反应性的作用。     

LBL联合PBL教学法在临床医学专业药理学教学中的应用

LBL联合PBL的教学模式是一种"教为主导,学为主体,教与学并重"的综合教学方法。在临床医学专业的药理学教学中合理应用LBL联合PBL教学法,即采用LBL教学法讲授完理论知识后开设PBL病例讨论课。选取2011级五年制临床医学专业的学生为实验组,采用LBL联合PBL教学模式,2010级五年制临床医学专业的学生为对照组,采用传统LBL教学模式,对两组进行教学效果评估比较。结果显示与传统LBL教学法相比较,LBL联合PBL的教学法能显著提高学生的学习成绩,问卷调查分析结果显示LBL联合PBL的教学法能明显提高学生的综合能力。药理学授课中应用LBL联合PBL教学法充分调动了学生的积极性,培养了学生自主学习能力,分析问题、解决问题的能力和临床思维能力,对培养创新型医学人才具有重要意义。     

咳喘安胶囊的镇咳祛痰作用及机理研究

目的:观察咳喘安胶囊的镇咳和祛痰作用及对哮喘小鼠肺NF-kB表达的影响,阐述其作用的可能机制.方法:采用小鼠气管酚红排泌实验观察咳喘安胶囊祛痰作用.以氨水诱导的咳嗽实验观察咳喘安胶囊的镇咳作用.采用卵清白蛋白激发小鼠哮喘,然后采用咳喘安胶囊进行干预,免疫组织化学染色方法观察NF-kB在小鼠肺组织中的表达变化.结果:咳喘安胶囊中、高剂量组能显著促进小鼠气管酚红排泌,而低剂量组则没有明显祛痰作用.咳喘安胶囊中、高剂量组对氨水诱导的咳嗽有明显的延长诱导时间和镇咳作用.各哮喘模型对照组小鼠肺支气管壁NF-kB面积及积分光密度值均明显高于正常组(P<0.01).各用药组小鼠支气管壁NF-kB面积及积分光密度值均显著小于模型对照组(P<0.01),且中药高剂量治疗组支气管上皮细胞及肺泡壁炎性细胞胞核阳性的细胞比例显著低于哮喘组(P<0.05).结论:咳喘安胶囊有很好的镇咳祛痰作用.咳喘安胶囊能显著降低哮喘小鼠气道壁细胞内NF-KB的表达.提示抑制NF-KB的表达是咳喘安胶囊治疗哮喘的可能机制.     

表达人胰高血糖素样肽前药工程菌遗传稳定性

通过传代培养的方法,研究高表达重组人胰高血糖素样肽前药(Pro-rhGLPs)的工程菌E.coliBL21(DE3)/pET41a(+)-hGLPs的遗传稳定性,观察菌体和菌落形态,比较在有无选择压力下的质粒稳定性,酶切和测序鉴定重组基因片断的正确性,SDS-PAGE电泳证实重组蛋白质的表达量的稳定性,在C57BL/6小鼠上进行葡萄糖耐量实验检测重组蛋白生物学活性。结果显示:此工程菌连续传代过程中,保持大肠杆菌的典型特征,各代质粒的酶切鉴定和测序正确,重组蛋白表达水平及生物活性也无显著差异。因此,工程菌E.coliBL21(DE3)/pET41a(+)-hGLPs具有良好的遗传稳定性。     

反义锁核酸阻断耐甲氧西林金黄色葡萄球菌agr群体感应系统

目的:利用反义策略,设计、筛选针对agrA mRNA的反义锁核酸,阻断agr群体感应系统,降低MRSA毒力因子的表达,减小细菌生存压力,为抗耐药菌感染提供一种新策略。方法:应用Primer Premier 5.0和RNA structure 4.5两种软件,设计、筛选2条针对agrA mRNA的反义寡核苷酸序列,对其进行锁核酸修饰,并与透膜肽(KFF)3K共价连接,将这两条反义序列导入细菌体内。体外与MRSA共培养,观察细菌生存情况。实时定量PCR检测其对agrA及agr群体感受系统的效应分子RNAⅢ和下游毒力基因hla的转录水平的影响,Western blot检测其是否能抑制α-溶血素的表达。结果:两条反义锁核酸序列PLNA34和PLNA522在体外均无抗菌活性,但都能不同程度的抑制agrA,RNAⅢ和hla的转录水平;相比较而言,PLNA34的抑制效果更佳,并能明显抑制α-溶血素的分泌表达。结论:agrA可作为抗MRSA感染的新靶点,为新型抗MRSA药物的研发提供了理论基础。     

免疫亲和层析法分离纯化含次黄嘌呤核苷mRNA

采用免疫亲和层析法分离纯化含次黄嘌呤核苷的mRNA(I-mRNA）。将Poly-I与BSA交联,并用Poly-I-BSA交联体免疫家兔,获取抗次黄呤核苷抗血清,斑点印迹法检测到该抗体滴度高、选择性强,将抗次黄嘌呤核苷抗体与蛋白A Sapharose交联,并制备抗体亲和层析柱。将小鼠肺mRNA上样于层析柱,淋洗层析柱后,用洗脱液洗脱I－mRNA,并以斑点印迹法在洗脱液中检测到很强的I－mRNA阳性信号;淋洗液中I－mRNA阳性信号的强度则随淋洗液体积的增加而减弱。以上结果表明,应用本方法可以有效分离得到含次黄嘌呤核苷的mRNA。     

交感神经系统内递质共存及其相互作用

在外周交感神经系统内,神经递质或神经肽类物质主要存在于大、小囊泡内;递质共存的现象在交感神经内不断得以发现．去甲肾上腺素和乙酰胆碱、神经肽Y、脑啡肽、P物质、血管活性肠肽、生长抑素、神经降压素、降钙素基因相关肽等物质共存的证实,扩大了交感神经递质的调节范围,递质之间网络式的相互调节作用有着重要的生理意义。     

组胺H3受体研究进展

组胺H3受体作为突触前自身受体和异身受体,广泛分布于中枢和外周组织,抑制组胺的释放和合成,调节多种神经递质的释放,组胺H3受体是G蛋白偶联受体家族成员,激活后由G蛋白介导,通过调控N型Ca^2 通道,产生生物学效应,组胺H3受体在中枢和外周器官有着重要的生理功能,对心功能,胃酸分泌,觉醒的睡眠,认知和记忆,惊厥抽搐等都有调节作用。     

豚鼠心交感神经末梢突触前膜存在组胺H3受体

本文首次报道豚鼠心肌存在一种新型突触前抑制性受体－组胺Ｈ３受体,选择性Ｈ３受体激动剂α－ＭｅＨＡ可抑制电场刺激诱发的离体豚鼠右心房交感性正性变力效应,以及去甲肾上腺素的释放。以上效应可被Ｈ３受体拮剂所拮抗。Ｎ－乙基马来酰亚胺可取消α－ＭｅＨＡ的作用。增加或减少心肌内源性组胺含量,可分别抑制或增强电场刺激诱发的心交感性反应。以上结果表明,组胺Ｈ３受体参与调节心交感神经冲动的传递,Ｈ３受体可能与Ｇ０－