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1.
一种新的以细胞表面受体为靶向的基因导入系统 总被引:9,自引:0,他引:9
鉴于胰岛素样生长因子Ⅰ号及Ⅱ号的受体 (IGFⅠR ,IGFⅡR)在人原发性肝癌中过量表达 ,以及表皮细胞生长因子受体 (EGFR)在多种人恶性肿瘤过量表达 ,设计和合成了针对IGFⅠR及IGFⅡR的 1 4肽E5和针对EGFR的 1 6肽GE7,以及流感病毒血凝素功能域 2 0肽HA2 0作为内吞小体释放寡肽 (Endosomereleasingoligopeptide,EOP) ,将它们分别与多聚阳离子多肽 (Polycationic polypeptide ,PCP)———多聚赖氨酸 (Polylysine ,PL)或鱼精蛋白 (Protamine,PA)共价连接 ,藉静电效应与DNA形成一个复合体 (E5 PCP/DNA/PCP HA2 0 ,GE7 PCP/DNA/PCP HA2 0 ) ,即构建的新的受体介导的靶向性非病毒型基因导入系统 .体内、外实验结果表明它们相对靶向且高效地将外源基因导入人恶性肿瘤细胞并得到预期表达 相似文献
2.
Some growth factor receptors, such as insulin like growth factor Ⅰ and Ⅱ receptor (IGF Ⅰ R, IGF Ⅱ R) and epidermal growth factor receptor (EGF R), have been proved to be over-expressed in a variety of human cancers derived from different tissue origins. Based on this molecular alteration, a polypeptide conjugate gene delivery system was designed and synthesized. It contains three essential moieties: a ligand oligopeptide (LOP) for receptor recognition, a polycationic polypeptide (PCP) such as protamine (PA) or poly-L-lysine (PL) as a backbone for DNA binding and an endosome-releasing oligopeptide (EROP) such as influenza baenagglutinin oligopeptide (HA20) for endosomolysis. These components are covalently conjugated as LOP-PCP-HA20 or in the form of a mixture of LOP-PCP and HA20-PCP. A 14 amino acid E5 was designed and synthesized as LOP for IGF Ⅰ R and IGF Ⅱ R, and a 16 amino acid GE7 as LOP for EGF R. Both E5 and GE7 systems could form stable complex with the plasmid DNA as E5-PCP/DNA/PCP-HA20 a 相似文献
3.
4.
转甲状腺素蛋白基因在酵母中的表达 总被引:8,自引:0,他引:8
用限制酶BamHI将含人TTR基因的DNA片段(约493bp)从质粒
pSK-TTR上切下后并插入到分泌型载体pHIL-SI的BamHI位点上,经酶切鉴定重组质粒pHIL-SI-TTR上的TTR基因插入方向正确。将pHIL-SI-TTRDNA用BglII酶切后,转入真核表达系统——毕赤氏酵母。得到的转化子经摇瓶发酵,上清液用15%SDSPAGE检测,有TTRF的表达。经DEAESepheroseF.F离子交换柱和SephacrylS200分子筛层析,得到纯化的TTRF。体外实验表明TTRF对肝癌细胞有抑制作用。 相似文献
5.
本文从抗人小细胞肺癌单克隆抗体杂交瘤细胞中抽提总RNA,合成第一链cDNA,直接用PCR技术(polymerase chain reaction)扩增出351bp的重链变区基因(V_H),克隆至pUCV_(NP)-PCR载体上,经筛选得一批插入片段为351bp的阳性克隆,经核苷酸序列分析研究,证实已获得了该单克隆抗体的重链可变区基因。 相似文献
6.
应用聚合酶链反应法体外扩增抗人小细胞肺癌单克隆抗体的变区基因,经核苷酸序列分析,轻链变区基因为324bp,编码108个氨基酸;重链变区基因为351bp,编码117个氨基酸。将重链变区基因克隆至pSV_2△HgptHuγ_3质粒,经一系列克隆、筛选,得一插入方向正确的表达人-鼠嵌合重链抗体的载体-pSV_2△Hgpt2F7VHHuγ_3。用电穿孔方法将该质粒导入鼠源骨髓瘤细胞J558L,用霉酚酸进行初步筛选,最终用兔抗人免疫球蛋白IgGFc片段的抗体筛选得七株阳性克隆,免疫印迹法结果表明在与人IgG相同位置上有一阳性条带。 相似文献
7.
利用研制开发的靶向性非病毒载体GE7基因导入系统转导外源基因pCEP-p21WAF-1,检验其介导p21WAF-1基因进入肝癌细胞后,在体内外抑制肝癌细胞的生长的效率.体外实验证明,导入外源基因后,SMMC-7721和BEL-7402细胞的生长受到抑制,第8天抑制率分别达到56%和66.7%.而体内实验结果是,荷SMMC-7721裸鼠皮下瘤周注射该基因导入系统,转导pCEP-p21WAF-1 3周后,实验组肿瘤的重量(平均为(0.083 ± 0.043)g)与对照组(平均为(0.281± 0.173) g)相比明显减小,且在统计学上有显著差别(P<0.05).以上结果表明,GE7基因导入系统可以介导外源基因pCEP-p21WAF-1进入细胞内,并在体内外抑制肝癌细胞的生长. 相似文献
8.
The EGF receptor-mediated targeting gene delivery system GE7 was used to transduce exogenous gene pCEP-p21WAF-1 into human hepatocellular carcinoma cell both in vitro and in vivo. After in vitro transduction of the exogenous gene, the growth of the cell lines SMMC-7721 and BEL-7402 was significantly inhibited compared with the control. On day 8 the inhibition rates of the above cell lines reached 56.0% and 66.7%, respectively. The in vivo experiment showed that the growth of human hepatoma transplanted in nude mice injected with GE7 gene delivery system subcutaneously once a week for 3 weeks was remarkably inhibited compared with that of untrans-fected control. The average tumor weight of the experiment group was (0.083 ?0.043) g, while that of the control group was (0.28110.173) g. The difference is significant (P<0.05). It was indicated that GE7 gene delivery system could efficiently transduce exogenous gene pCEP-p21WAF-1 into hepatoma cell with high EGF receptor expression, and inhibit the cell growt 相似文献
9.
裸鼠肿瘤动物模型VEGF受体表达及其意义 总被引:5,自引:1,他引:4
目的 通过免疫组织化学染色了解flt 1与flk 1 KDR(VEGF的两个高亲和受体 )在人肿瘤细胞皮下接种肿瘤动物模型的血管内皮细胞与肿瘤细胞中的表达。方法 取荷瘤裸鼠皮下接种瘤块 ,漂洗、固定、石蜡连续切片 ,进行两种受体相应免疫组化检测。结果 在 13种荷瘤裸鼠血管内皮细胞及肿瘤细胞中flt 1的阳性率大部分为强阳性或中阳性 ,而只有在荷人胃腺癌MKN 4 5裸鼠的肿瘤细胞中flt 1的阳性率为弱阳性 ,在荷人卵巢癌SKOv3裸鼠的肿瘤细胞中flt 1的表达为阴性。相比较而言 ,在 13种荷瘤裸鼠血管内皮细胞及肿瘤细胞中KDR的阳性率大部分为中阳性或弱阳性 ,并且在荷人肝癌SMMC 772 1裸鼠 ,荷人胃腺癌SPC A1裸鼠 ,荷人高转移肝癌移植瘤裸鼠 ,荷人卵巢癌SKOv3裸鼠的肿瘤细胞中 ,荷人宫颈癌移植瘤裸鼠和荷人胃腺癌MKN 4 5裸鼠的肿瘤细胞中 ,KDR表达为阴性。结论 VEGF受体共同表达于肿瘤血管内皮细胞与肿瘤细胞 ,提示了VEGF与VEGF受体结合作用在肿瘤演化中的重要性 ,为靶向于VEGF受体的基因治疗策略选择裸鼠动物模型提供了参考依据 相似文献
10.