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番茄花叶病毒弱毒疫苗K(ToMV-K)的复制酶基因和运动蛋白基因分别具有乳石和赭石突变的特征. 为了对这一致弱特征进行扩展研究, 用PCR介导的定点突变技术, 对烟草花叶病毒普通株中国分离物(TMV-Cv)复制酶基因和运动蛋白基因分别进行乳石突变(UGA)和赭石突变(UAA), 构建了复制酶单突变体——TMV-Cvrase, 运动蛋白单突变体——TMV-Cvmp和复制酶与运动蛋白双突变体——TMV-Cvrase-mp. 烟草侵染试验发现, TMV-Cvmp和TMV-Cvrase-mp能侵染枯斑(Xanthi NC)和系统(K326)寄主, 后者侵染普通烟K326仅出现少量轻微的花叶症状; 子代病毒的电子显微镜观察、重复接种试验及其核酸的RNA斑点杂交、RT-PCR扩增与测序结果表明, TMV-Cvmp和TMV-Cvrase-mp子代病毒与TMV-Cv的大小和形态基本一致, 具有完整和稳定的侵染、复制和繁殖能力, 且其基因组仍保持着突变, 而复制酶单突变体TMV-Cvrase不能侵染烟草. 以上结果表明, 复制酶与运动蛋白的乳石突变与赭石突变协同致弱TMV-Cv对烟草的侵染症状, 从而暗示ToMV-K基因组的这种突变模式也可以用于其他植物病毒的致弱研究. 相似文献
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烟草花叶病毒及其弱毒疫苗-N14基因组cDNA克隆的构建与侵染性分析 总被引:3,自引:1,他引:2
植物病毒弱毒疫苗在防治植物病毒病害中发挥着重要的作用,但对于其致弱的根本原因和机理仍不十分清楚。弱病毒能够在植物体内生存和繁殖,却不严重危害植物的生长、开花和种子生产,而对外来病毒具有杀灭和防治作用,这种共生和保护宿主的现象是大多数植物弱病毒所具有的共同... 相似文献
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植物病毒弱毒疫苗在防治植物病毒病害中发挥着重要的作用,但对于其致弱的根本原因和机理仍不十分清楚。弱病毒能够在植物体内生存和繁殖,却不严重危害植物的生长、开花和种子生产,而对外来病毒具有杀灭和防治作用,这种共生和保护宿主的现象是大多数植物弱病毒所具有的共同… 相似文献
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以戊型肝炎(Hepatitis)病人高热期血清为原材料,设计特定引物,经RT-PCR扩增获得开放阅读框2(ORF2)1.3kb基因片段,用EcoRI和BamHI插入克隆载体pUC18,测定了该克隆基因片段的核苷酸序列并进行了比较分析。其片段长度为1309bp,其A=249(19.2%),G=318(24.29%),T=339(25.9%),C=403(30.79%);与印度株和缅甸株的同源性在90 相似文献
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戊型肝炎病毒(HEV)开读框架2中1.3 kb cDNA的克隆与序列分析 总被引:1,自引:1,他引:0
以戊型肝炎(Hepatitis E)病人高热期血清为原材料,设计特定引物,经RT-PCR扩增获得开放阅读框2(ORF2)1.3 kb基因片段,用EcoR I和BamH I插入克隆载体pUC18,测定了该克隆基因片段的核苷酸序列并进行了比较分析.其片段长度为1 309 bp,其A=249(19.2%),G=318(24.29%),T=339(25.9%),C=403(30.79%);与印度株和缅甸株的同源性在92%以上,而与乍得和墨西哥株的同源性分别为90.7%和77.4%. 相似文献
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利用DNA重组技术 ,构建霍乱毒素B亚单位与乙肝病毒表面抗原a表位的融合基因 ,并在大肠杆菌表达体系pET 30a BL2 1 (DE3)中获得以包涵体形式的高效表达。免疫印迹表明表达产物具有免疫学活性 ,包涵体复性后 ,表达产物能够象CTB那样形成五体 ,以腹腔注射、灌胃、鼻饲形式免疫小鼠均能产生抗HBsAg抗体 相似文献
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棉铃虫颗粒体病毒增效蛋白基因5'端截短片段的表达及增效活性测定 总被引:3,自引:0,他引:3
将带有棉铃虫颗粒体病毒增效蛋白(HaGV enhancin)基因的重组表达载体pET-30a-En分别用Bal Ⅰ和Dra Ⅰ酶切后连接,构建重组表达载体pET-30a-Ben和pET-30a-Den,其外源基因的开放阅读框分别为HaGV增效蛋白基因5'端的1.7kb和2.2kb.IPTG诱导表达产生66.7kD和85.1kD的多肽并命名为Ben和Den.初步纯化的Ben和Den显示了对棉铃虫核多角体病毒(HaNPV)及Bt的增效活性.Ben可对棉铃虫核多角体病毒增效10.5%~26.5%,LT50缩短0.9d,Den增效10.2%~33.0%,LT50缩短1.2d~1.9d.重组增效蛋白可对Bt(12500稀释)增效20.7%~35.4%,Den增效16.7%~31.5%,Ben增效¨.7%~27.4%.这为进一步研制抗虫工程菌打下了良好的基础. 相似文献
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