褐藻膳食纤维对机体代谢及其肠道菌群调节作用的研究进展

褐藻膳食纤维（海藻酸盐,Alg）是存在于海洋食用藻类中的一种酸性多糖,具有多种生物活性作用。研究表明,褐藻膳食纤维可有效地改善肠道菌群的组成结构,通过菌群代谢膳食纤维发酵产物调节宿主机体的代谢水平,从而改善肥胖、糖尿病等代谢相关性疾病。从作为食品添加剂的角度出发,对褐藻膳食纤维作用于人和动物模型体重、血糖、脂代谢以及肠道菌群的效果加以综述,并探讨其潜在机制,为海洋功能性产品的开发和应用提供科学依据。     

外源ATP对油菜幼苗耐寒性的影响

以“陇油7号”油菜为实验材料,研究了外源ATP对油菜幼苗耐寒性的影响。结果表明:与单独低温胁迫相比,外源ATP预处理再进行低温胁迫后,油菜幼苗MDA含量、O₂^-.含量均显著降低,而叶绿素含量、抗氧化酶活性(SOD、POD、CAT、APX)和RBOHD、RBOHF、CPK4、CPK5基因表达均增加;与外源ATP+低温相比,EGTA+外源ATP+低温处理下,MDA含量显著增加,总叶绿素含量、T-AOC酶活性、RBOHD、RBOHF基因表达均显著下降,DMTU+外源ATP+低温处理下,MDA含量显著增加,总叶绿素含量、Ca²⁺-ATPase酶活性、CPK4、CPK5基因表达均下降,表明外源ATP通过Ca²⁺和H₂O₂依赖性机制影响油菜幼苗的耐寒性。     

Hela细胞HGPRT缺陷型细胞系构建

建立稳定的次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(HGPRT)缺陷的Hela细胞系,为细胞融合相关研究和人源化单克隆抗体制备提供有利于筛选的亲本细胞。通过诱变剂N-甲基-N′-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)对Hela细胞进行诱变,逐步提高培养基中6-巯基鸟嘌呤(6-TG)的浓度,筛选出对6-TG稳定耐受的细胞,在次黄嘌呤-氨基喋呤-胸腺嘧啶(hypoxanthine-aminopterin-thymidine,HAT)培养基中鉴定其敏感性,最后对筛选得到的Hela-HGPRT-进行生物学鉴定。在此基础上,将Hela-HGPRT-细胞系与人淋巴细胞融合,在HAT培养基中筛选杂交细胞。筛选得到了能够长期在含20μg/mL 6-TG培养基中生长的Hela-HGPRT-细胞,并且在HAT培养基中不能存活。Hela-HGPRT-细胞与人淋巴细胞成功融合,获得能够连续传代培养的杂交瘤细胞。经MNNG诱导和6-TG筛选,得到了稳定传代的Hela-HGPRT-细胞系,该细胞系可用于细胞融合相关研究。     

稳定抑制TRPM2基因表达肺微血管内皮细胞系的构建与鉴定

应用短发卡RNA(shRNA)慢病毒表达载体感染小鼠肺微血管内皮细胞(PMVEC),对其M2型瞬时受体电位(TRPM2)基因进行干扰,以建立稳定shRNA TRPM2 PMVEC细胞株。结果表明,正常PMVEC对胰酶的最大耐受浓度和嘌呤霉素最小致死剂量分别为0.4μg/mL和0.6μg/mL;然后加入0.6、2.0、4.0、8.0μg/mL嘌呤霉素筛选稳定抑制TRPM2表达的shRNA TRPM2 PMVEC株,结果在嘌呤霉素达到8μg/mL时该细胞株仍细胞生长良好; Semi-quantitative PCR和Western blot对获得阳性细胞株进行TRPM2基因和蛋白表达的检测显示, shRNA TRPM2阳性PMVEC的TRPM2基因和蛋白表达相对量显著低于阴性对照和正常对照组(P0.01)。该研究通过shRNA慢病毒载体成功建立了稳定shRNA TRPM2 PMVEC细胞株,为进一步开展TRPM2在流感病毒诱导肺微血管内皮细胞损伤的作用机制奠定了基础。     

基于3种线粒体标记探讨中日沿海角木叶鲽遗传多样性差异

角木叶鲽(Pleuronichthys cornutus)是东亚沿海重要的鲽形目经济鱼类, 为更好地保护和开发利用其种质资源, 有必要全面了解其遗传背景。本研究测定了中国和日本沿海7个群体200尾角木叶鲽线粒体控制区(CR) 5'端、细胞色素b (Cytb)和NADH脱氢酶第二亚基(ND2)基因序列, 比较不同标记在解析遗传多样性和种群结构上的可行性与有效性, 阐明中日沿海角木叶鲽群体间出现遗传分化的分子机制。CR序列分析发现中日沿海7个角木叶鲽群体遗传多样性表现出较高的单倍型多样性(H_d = 0.9699)和较低的核苷酸多样性(π = 0.0061); 各群体间无显著的遗传分化(F_ST = -0.0197-0.0184, P > 0.05); 单倍型网络未显示出明显的地理聚群和谱系结构; 分子方差分析(AMOVA)表明变异主要发生在群体内部(> 99.17%)。进一步通过Cytb和ND2基因分别与CR序列对比分析, 结果表明群体遗传多样性均表现为高H_d (0.9683-0.9829)低π (0.0050-0.0063)模式, 仅有ND2基因分析F_ST值(F_ST = 0.0302, P < 0.05)显示了中国碣石(GDJS)和日本明石(JAP)群体间显著的低水平遗传分化现象。CR、Cytb和ND2的单倍型网络图均无明显的地理聚类和谱系结构, AMOVA分析也显示变异主要来源于群体内(> 98.39%)。种群历史动态分析结果显示, 角木叶鲽可能在第四纪中更新世晚期经历了群体扩张事件, 扩张时间分别为31.93-9.58万年前(CR)、27.53-22.02万年前(Cytb)和26.99-18.75万年前(ND2)。综上所述, 中日沿海的角木叶鲽具有较高遗传多样性, GDJS和JAP群体间存在低度分化; ND2基因比CR和Cytb序列更适于分析角木叶鲽种群遗传结构, 选择多个遗传标记可有效弥补单一标记分析遗传多样性的局限性; 推测冰期两大独立避难所的形成及GDJS和JAP群体距离相隔较远是其发生遗传分化的主要原因。研究结果为中日沿海角木叶鲽渔业资源的种质保护与可持续利用提供了理论依据。     

一次性根管治疗联合清胃散口服对牙髓炎的治疗效果及对疼痛程度影响

摘要 目的：探讨一次性根管治疗联合清胃散口服对牙髓炎的治疗效果及对疼痛程度影响。方法：选取我院2021年1月到2022年12月收治的120例牙髓炎患者，分为观察组与对照组，各60例。对照组患者应用一次性根管治疗，观察组患者应用一次性根管联合清胃散口服治疗，对比两组患者的临床治疗效果，治疗前后咀嚼功能与疼痛程度，白细胞计数（WBC）、降钙素原（PCT）、C反应蛋白（CRP）相关炎症因子水平，并对比两组患者的菌斑指数（PLI），龈沟出血指数（SBI）、龈沟探诊深度（SPD）、牙龈指数（GI）相关牙周健康指标水平。结果：观察组总有效率为93.33%明显高于对照组总有效率80.00%（P<0.05）；两组患者治疗前咀嚼功能评分与视觉模拟量表（VAS）评分对比无差异（P＞0.05），治疗后咀嚼功能评分均升高，观察组较对照组高，VAS评分降低，观察组较对照组低（P＜0.05）；两组患者治疗前WBC、PCT、CRP水平对比无差异（P＞0.05），治疗后均降低，观察组较对照组低（P＜0.05）；两组患者治疗前GI、SPD、SBI、PLI水平对比无差异（P＞0.05），治疗后均降低，观察组较对照组低（P＜0.05）。结论：一次性根管治疗联合清胃散口服能够改善牙髓炎的临床疗效，提升患者咀嚼功能，减轻疼痛程度，降低机体炎症因子水平，同时能够进一步改善患者牙周健康程度，值得临床应用推广。     

两湖泊轮虫群落结构的时空动态对水体氮磷含量及“下行效应”的响应

为探讨氮和磷、"上行效应"和"下行效应"在轮虫群落结构时空变动调控中的相对重要性,于2011年7月至2012年6月每月两次采集了芜湖市九莲塘和汀棠湖中的轮虫样品,利用相关分析法和典范对应分析法(CCA)分析了轮虫群落结构的时空变动与水体理化因子及其潜在捕食者密度间的关系。卡尔森营养状态指数表明,两湖均处在富营养化初期。除了总氮和硝态氮的年均浓度、晶囊轮虫(Asplanchna)和剑水蚤(Cyclopoidea)无节幼体的年均密度存在显著差异外(P0.05),两湖泊的其他水环境因子间并未表现出明显的差异(P0.05)。实验室鉴定发现九莲塘中共有轮虫48种,隶属于15科21属;汀棠湖中共有轮虫55种,隶属于15科24属。两湖泊中,疣毛轮虫(Synchaeta)、臂尾轮虫(Brachionus)和异尾轮虫(Trichocerca)均是主要轮虫类群,而密度优势种分别有7种和4种。相关分析结果显示,P含量与九莲塘轮虫群落的均匀度和物种多样性指数间均呈现显著的负相关(P0.05),而N含量却与汀棠湖轮虫群落的物种多样性指数呈现显著的正相关(P0.05);两湖泊中的轮虫物种多样性指数均与水体中的TN∶TP(质量比)间呈现显著的正相关(P0.05)。CCA分析结果显示,九莲塘中桡足类和其无节幼体密度显著高于其他采样批次时的轮虫群落聚成Ⅰ类,汀棠湖中晶囊轮虫密度显著高于其他批次时的轮虫群落聚成Ⅱ类,而其他的轮虫潜在捕食者密度很低或未出现时的轮虫群落聚成Ⅲ类。研究结果表明,湖泊中的TN∶TP(质量比)可能是反映N和P含量对轮虫群落物种多样性影响程度的较为合适的指标。当水体中的轮虫潜在捕食者密度较高时,两湖泊轮虫群落结构的变动均主要取决于"下行效应";而当轮虫潜在捕食者密度很低时,"上行效应"可能是调控两湖泊轮虫群落结构变动的主要因素。     

寡核苷酸芯片研究结核分枝杆菌临床株和无毒株诱导的巨噬细胞U937凋亡相关基因的差异表达

结核病仍然是人类健康的主要威胁,结核分枝杆菌诱导的巨噬细胞凋亡是宿主防御反应之一,研究凋亡相关基因的差异表达有助于认识结核分枝杆菌致病机理和发现新的药物靶标。利用包括19200个基因或基因片段的DNA芯片研究巨噬细胞株U937对临床和实验室菌株感染的差异表达,Northem blotting和RT—PCR验证了芯片研究结果。Mtb H37Rv感染下调bcl—2,vitaminD受体、干扰素调控因子3、细胞色素氧化酶C表达,幅度分别为2-,3-,3-,2．5-倍,临床菌株感染上调SOD2、SOD3、丝氨酸蛋白酶、toll—like受体2、signal transducer and activator(STAT1)、hypoxia—inducible factor22等表达,幅度分别为2．9-,2．5-,2．5-,22-,2．4-,5．9-倍。结果提示,临床菌株感染更多促进凋亡,限制宿主的杀灭机理。该研究为进一步研究导致这些差异表达的结核分枝杆菌成分提供了基础。     

猕猴桃溃疡病流行的生态因子及药剂对病菌的抑菌作用

经5年系统研究得出,影响猕猴桃溃疡病发生流行的特点是,海拔750m以上的果园发病重,向阳坡发病重于背阳坡,不同品种发病差异显著,金丰品种易感病,金魁品种高度抗病;树龄越大,病株率越高;不同枝龄比较,一年生枝条病枝死亡率和枝条死亡率最高.6种药剂以加瑞农和硫酸链霉素抑菌效果最好.     

基于微滴式数字PCR检测肠癌病人游离环状DNA KRAS突变的新方法

基于微滴式数字聚合酶链式反应(Droplet digital polymerase chain reaction,dd PCR)设计一种检测肠癌游离循环DNA(Circulating cell free DNA,cf DNA)中KRAS(V-Ki-ras2 Kirsten ratsarcoma viral oncogene homolog)基因突变的新方法并评估其灵敏度和准确性。根据肠癌病人KRAS基因的突变类型设计并合成,采用dd PCR扩增并评估其灵敏度和准确性;根据AMRS-PCR引物设计原理设计KRAS基因的实时定量PCR扩增引物并评估其准确性,进而比较dd PCR和q PCR二者之间的优缺点;最后针对52例肠癌病人的cf DNA采用dd PCR进行检测,研究dd PCR在cf DNA KRAS基因突变检测的应用。成功使用dd PCR和q PCR两种方法对KRAS野生型及7种突变型建立检测方法,使用质粒标准品及实际样品验证该两种方法可行并对其假阳性率、线性范围及检测下限等性能进行了评价,最后成功对52例临床患者和20例正常人的血浆cf DNA样本进行检测,临床灵敏度为97.64%,临床特异性为81.43%。dd PCR的检测性能优于q PCR,LOD达到个位数DNA拷贝,最低可确认突变浓度达到0.01%–0.04%。样本提取效率在方法学建立中也十分重要,直接影响到灵敏度和Cut Off值的判定。临床患者检测结果显示其KRAS突变率接近报道水平。