抗菌肽牛乳铁蛋白肽衍生肽在毕赤酵母中的表达及活性鉴定

利用巴斯德毕赤酵母系统表达抗菌肽牛乳铁蛋白肽衍生肽简称LfcinBD,获得的表达产物具有较强的抗菌活性.将人工设计的用化学合成法合成的以酵母偏爱密码子编码的LfcinBD基因片段克隆到巴斯德毕赤酵母分泌型表达载体pPIC9K中,获得的重组质粒pPIC9K-LfcinBD通过限制性内切酶Sac Ⅰ酶切线性化,电击法转化毕赤酵母GS115宿主菌,G418抗性筛选,得到高拷贝转化子.经PCR检测,LfcinBD基因与毕赤酵母染色体稳定整合.阳性克隆经甲醇诱导表达LfcinBD,诱导表达5 d,每24 h取上清1 mL,进行抑菌试验.结果表明,抗菌肽牛乳铁多肽衍生肽基因已整合到酵母细胞基因组中并获得表达,经0.5%甲醇在30℃诱导48 h可产生较强抗菌活性的抗菌肽,而且对氨苄青霉素抗性的大肠杆菌亦有较强的抑菌作用.     

基于稳定同位素分析不同蛋白源对大菱鲆生长的影响

实验采用混合植物蛋白(玉米蛋白和大豆浓缩蛋白等氮1:1混合)替代鱼粉蛋白投喂大菱鲆, 通过测定不同饲料组和体组织中氮稳定同位素的值, 估算氮同位素的周转率及不同蛋白源对大菱鲆生长的贡献比例。实验设计了4种配合饲料, 在等氮等能的基础上, 以混合植物蛋白分别替代饲料中0、10%、30%和50%的鱼粉蛋白, 即CS0、CS10、CS30和CS50。将初始体重为(57.720.25) g的大菱鲆分成4组, 每组设3个平行,实验周期为56d。实验开始后的7d、14d、28d、42d和56d采集并测定大菱鲆肌肉和肝脏中氮稳定同位素值(15N)。研究结果表明, 当替代量达到50%时, 大菱鲆摄食率和特定生长率显著低于其他组(P0.05), 而饲料系数显著高于其他组(P0.05)。不同实验组间氮同位素的周转率均存在显著性差异(P0.05), 对照组的周转速度最快。各实验组肝脏的周转率均显著快于肌肉(P0.05)。大菱鲆肌肉中氮同位素的周转半衰期(23.9632.42d)显著高于肝脏的(12.3816.83d) (P0.05)。生长作用对大菱鲆肌肉氮同位素周转的贡献比例为57.33%73.33%,而对肝脏的贡献比例为29.17%36.10%。基于时间的周转模型估算氮同位素分馏系数()为1.832.83。采用Isosource软件计算显示, CS10、CS30和CS50组中鱼粉、玉米蛋白和SPC三种蛋白源对大菱鲆生长的贡献比例分别为80%、7%和13%, 62%、11%和27%, 46%、13%和41%。研究结果表明: 生长作用和代谢作用共同驱动了氮稳定同位素在大菱鲆体组织中的周转代谢; 氮稳定同位素在肝脏组织中的周转速度明显快于肌肉的, 相应的周转半衰期更短; 各实验组中SPC对大菱鲆生长的贡献均优于玉米蛋白。