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一个新的蛋白质剪切系统及其剪切条件的研究 总被引:2,自引:0,他引:2
将含麦芽糖结合蛋白-内蛋白子-几丁质结合区(简称MYB)基因的重组质粒pMYB129转入E.coli2426,在LB培养基中发酵,IPTG低温诱导表达,菌体超声破碎,离心,上清液经直链淀粉糖亲和层析,获得SDS-PAGE电泳纯的前体蛋白MYB.MYB中内蛋白子的N端可被还原剂CySH、DTT、β-巯基乙醇等诱导发生剪切反应.结果表明,三种还原剂中以DTT为最佳.同时对剪切过程中温度、pH值等影响进行了研究 相似文献
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利用内蛋白子剪切功能一步纯化重组人神经营养因子-3 总被引:3,自引:0,他引:3
将人神经营养因子 - 3(h NT3)基因插入含内蛋白子 -几丁质结合区 (Intein- CBD)片段的质粒p TXB1的多克隆位点 ,构建成重组子 p TXB- h NT3,随后转化入 E.coli 2 566并进行融合表达 .表达产物包涵体经 8mol/ L脲变性 ,并在 GSH,GSSG存在下复性 .复性后的融合蛋白经几丁质珠亲和柱吸附 .待洗涤杂蛋白后 ,加入 50 mmol/ L DTT在 4℃或 2 5℃进行剪切反应 48h,再用缓冲液洗脱 ,即得 h NT3.SDS- PAGE分析表明 ,h NT3达电泳纯 .其分子量约为 1 4 k D 相似文献
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