降钙素原的原核表达及单克隆抗体制备

目的:高效表达与纯化可溶性重组人PCT蛋白,制备高灵敏度和高特异性的抗人PCT医用诊断单克隆抗体。方法:大肠杆菌表达重组人PCT蛋白后,利用饱和硫酸铵沉淀和亲和层析方法纯化PCT蛋白后,经质谱、Western blot和间接ELISA法进行性质鉴定和分析重组蛋白的表达与免疫反应性;重组蛋白免疫小鼠,经细胞融合及筛选制备抗PCT单克隆抗体(m Ab)。结果:在大肠杆菌中高效表达了人PCT蛋白;重组人PCT蛋白具有良好的免疫反应性与免疫原性;经筛选获得7株抗PCT单克隆抗体细胞株,经ELISA鉴定,筛选抗体可与PCT抗原有良好的特异性反应。结论:利用重组人PCT蛋白免疫制备了抗人PCT单克隆抗体,为进一步研发PCT快速诊断试剂提供了原料。     

妊娠妇女与无性生活女性阴道分泌物 微生物组学分析

目的探讨妊娠妇女与无性生活女性阴道分泌物中菌群结构差异,为临床女性泌尿生殖系统疾病研究提供可靠的依据。方法运用高通量二代测序技术检测20例妊娠妇女和29例无性生活女性阴道分泌物中微生物;采用秩和检验进行组间显著性差异分析,使用生物信息学软件进行数据处理。结果 49份样本共注释出14个门、23个纲、33个目、28个科、38个属和23个种水平物种。妊娠妇女与无性生活女性阴道分泌物中菌群结构差异显著。妊娠妇女在种水平仅有Atopobium vaginae、Campylobacter ureolyticus、Lactobacillus coleohominis、德氏乳杆菌、瑞氏乳杆菌、惰性乳杆菌、罗伊乳杆菌、白假丝酵母菌和近平滑假丝酵母菌共9个物种。结论妊娠能引起女性阴道分泌物菌群结构发生改变,且菌种数量明显减少。Lactobacillus coleohominis和德氏乳杆菌可能在维持妊娠妇女阴道菌群平衡和自净作用中起到关键性作用。     

高通量二代测序 对感染性新生儿高胆红素血症病原菌的分析

摘要：目的 探讨高通量二代测序技术在筛选感染性新生儿高胆红素血症病原菌中的应用价值。方法 运用高通量二代测序技术筛选22例感染性新生儿高胆红素血症患者的病原菌,同时进行传统细菌培养鉴定,比较二者的区别。结果 高通量二代测序技术检测病原菌阳性率为100.00%,传统细菌培养检测阳性率为0.00%。高通量二代测序技术筛选出的感染性新生儿高胆红素血症主要病原菌为Anoxybacillus kestanbolensis、Geobacillus vulcani、Klebsiella oxytoca和Acinetobacter guillouiae。结论 高通量二代测序技术具有高通量、高特异性、高准确度和快速等特点,适合临床患者病原菌的检测。     

嗜盐古菌中Ⅰ-B亚型CRISPR-Cas系统的分子机制和应用进展

嗜盐古菌是一类应用前景广阔的微生物资源,但由于缺乏高效灵活的遗传操作工具,限制了这类生物在科学研究和工业生产方面的应用。CRISPR-Cas系统存在于绝大多数古菌中,应用其内源性CRISPR-Cas系统进行遗传操作是一种兼具可行性和简便性的策略。近年来,人们对Ⅰ-B亚型CRISPR-Cas系统的研究已从模式古菌沃氏富盐菌(Haloferax volcanii)拓展到其他嗜盐古菌中。本文总结了Ⅰ-B亚型CRISPR-Cas系统的分子机制,并介绍了利用这种内源性CRISPR-Cas系统在嗜盐古菌中进行遗传操作的研究进展。     

江西迷迭香精油的成分分析及抗氧化、抑菌活性研究

为了研究江西迷迭香精油的化学成分及抗氧化、抑菌活性,采用水蒸气蒸馏法提取迷迭香精油,利用气相色谱-质谱联用法(GC-MS)对迷迭香精油成分进行分析,通过对DPPH自由基、羟基自由基的清除活性和还原力来研究迷迭香精油的体外抗氧化活性;通过以枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌和大肠杆菌为供试菌,测定抑菌圈大小和最低抑菌浓度(MIC)来研究迷迭香精油的抑菌活性。实验结果表明,从迷迭香精油中鉴定出40种化学成分,占精油总量的99.46%,其主要化学成分有α-蒎烯(39.05%)和1,8-桉叶素(16.86%),其次是莰烯(4.22%)、D-柠檬烯(3.87%)、龙脑(3.74%)、β-石竹烯(3.11%)等,α-蒎烯的含量高于国内其他产地;迷迭香精油对DPPH、羟基自由基和还原力的半数清除率IC₅₀值分别为76.42、51.40和49.15μL/mL;精油对枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的抑菌圈大小分别为14.40±0.66、11.41±0.19、11.70±0.27 mm,最低抑菌浓度(MIC)分别为2.50、10.00、10.00μL/mL,对枯草芽孢杆菌的抑制作用明显强于金黄色葡萄球菌和大肠杆菌。结果表明迷迭香精油具有较好的抗氧化、抑菌活性。     

抗人甲状腺球蛋白单克隆抗体的制备

目的:制备分泌特异性抗人甲状腺球蛋白(thyroglobulin,Tg)单克隆抗体的杂交瘤细胞株,为建立高灵敏度的Tg检测方法做准备。方法:以天然人源甲状腺球蛋白为抗原经皮下免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合制备分泌抗人甲状腺球蛋白单克隆抗体,并对其进行特异性鉴定,建立检测Tg的双抗体ELISA(enzyme-linked immunosorbent assay)夹心法。结果:获得7株可稳定分泌抗人甲状腺球蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,经ELISA鉴定,筛选抗体可与Tg抗原有良好的特异性反应。建立的双抗体夹心ELISA方法敏感性可达1 ng/mL。结论:成功制备了抗人Tg单克隆抗体并建立了检测人Tg双抗体夹心ELISA方法,为进一步研发Tg快速诊断试剂盒提供了原料。     

妊娠女性阴道中两种德氏乳杆菌亚种的生物学特性

目的 探讨妊娠女性阴道中德氏乳杆菌的生物学特性，以供临床进一步研究。方法 采用质谱鉴定仪初步鉴定菌种，再用16S rRNA基因和一代测序技术进行确认，同时观察德氏乳杆菌在培养基上的生长特征、染色情况、生化反应和抑菌现象。结果 在妊娠女性阴道中首次分离出德氏乳杆菌印度亚种和sunkii亚种。两种细菌16S rRNA基因扩增产物1 438 bp中存在3个碱基的差异。两种细菌均为革兰阳性兼性厌氧长杆菌。德氏乳杆菌印度亚种菌落边缘不整齐、菌落粗糙，而德氏乳杆菌sunkii亚种菌落边缘整齐微凸起且中间凹陷、菌落湿润，都能产生α-溶血环。两种细菌均能产生精氨酸双水解酶1(ADH1)、精氨酸双水解酶2(ADH2s)、丙氨酸芳胺酶（AlaA）、丙氨酸—苯丙氨酸—脯氨酸芳胺酶（APPA），分解蔗糖（SAC）和D-葡萄糖（dGLU），同时奥普托欣耐受试验（OPTO）呈阳性，过氧化氢试验为阴性，能分解葡萄糖产酸。两种菌都能抑制金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌的生长。结论 两种德氏乳杆菌亚种核苷酸序列存在单个碱基差异，直接影响其部分生物学特性。