Nisin高产菌株的高通量筛选

【目的】乳酸链球菌素(nisin)是一种天然生物活性抗菌肽,对包括食品腐败菌和致病菌在内的许多革兰氏阳性菌具有强烈的抑制作用,而用作食品的防腐剂。本研究通过建立高通量筛选方法,实现高效快速省力的高产菌株筛选,为工业上筛选高产菌株提供研究方案。【方法】通过对Lactococcus lactis ATCC11454菌株进行紫外诱变,获得2511株突变株。利用Biomek FXP自动工作站建立96微孔板的高通量筛选方法,突变株经高通量挑选、菌种培养及菌液稀释后,加入到生长至对数中期的藤黄微球菌中,采用改进后的比浊法快速检测nisin生物活性。用此方法对突变株进行初筛、复筛后可得到nisin高产菌株,并通过摇瓶发酵评估高通量筛选方法。【结果】确定比浊法检测的条件为:nisin活性稀释在10–25 IU/m L范围内,与藤黄微球菌反应2 h后检测藤黄微球菌的菌体量(OD600)。2511株突变株经过2轮高通量筛选,最终获得约50株产量提升的菌株,对其中8株进行摇瓶精确测量,显示产量均有提高,并且其中一株产量提升了30%,成功建立了高通量筛选nisin高产菌株的方法。【结论】利用比浊检测法,在其基础上成功建立高通量筛选高产nisin菌的方法,经过初筛复筛,整个周期由1人耗时5 d即可完成2511株突变株的筛选工作。相较于传统的选育方法,高通量筛选具有快速、稳定、高效的特点,提高了筛选效率,缩短了选育周期,是工业上筛选高产nisin菌的有效手段。     

不同无机碳源对粉核油球藻生长的影响

研究了2种无机碳源对粉核油球藻(Pinguiococcus pyrenoidosus CCMP2078)生长的影响。结果表明,适量添加NaHCO₃和通CO₂对P.pyrenoidosus CCMP2078的生长均有促进作用,NaHCO₃的添加方式对该藻的生长具有显著差异。一次性添加和分批添加NaHCO₃的优化浓度分别为5mmoL·L^-1和20mmoL·L^-1,后者对数生长末期的细胞密度、干重和比生长速率均最高,分别为8.93×10⁶cells·mL^-1,0.247g·L^-1和0.225dL^-1。通入CO₂的体积分数为0.5%时,最有利于藻细胞的生长,对数生长末期的细胞密度、干重和比生长率分别为3.83×10⁷cells·mL^-1、0.42g·L^-1和0.212d^-1。     

虫媒黄病毒亚基因组RNA

黄病毒是一大科人类致病性的单股正链RNA病毒。黄病毒包括登革病毒、西尼罗脑炎病毒及日本脑炎病毒等成员,主要径通过节肢动物的叮咬进行传播,即为虫媒黄病毒。研究发现,在虫媒黄病毒复制过程中,除病毒基因组正链RNA、互补的负链RNA及两者的杂合RNA分子外,在病毒感染细胞后还能产生一种病毒亚基因组RNA(subgenomic RNA,sgRNA)。近年对这种sgRNA展开了比较多的研究,结果表明,其产生机制与已知的其他病毒sgRNA产生机制并不相同。该sgRNA的产生与虫媒黄病毒基因组3’非编码区所形成的保守二级结构有关,同时宿主核酸酶对其的不完全降解亦有重要作用。虫媒黄病毒基因组3’非编码区中带有多个与病毒复制相关的RNA元件,而sgRNA的发现有助于全面地认识病毒RNA与宿主RNA代谢途径间的相互作用,为最终阐明病毒的致病机制奠定基础。     

乐孕宁口服液联合盐酸利托君对晚期先兆流产患者临床症状和血清P、PAPP-A、HCG的影响

摘要 目的：探讨乐孕宁口服液联合盐酸利托君治疗晚期先兆流产的疗效及对临床症状和血清孕酮（P）、妊娠相关蛋白（PAPP-A）、人绒毛膜促性腺激素（HCG）的影响。方法：研究对象选择我院2020年9月-2021年6月期间收治的80例晚期先兆流产患者,根据信封抽签法将患者分为对照组（给予盐酸利托君治疗）和观察组（给予乐孕宁口服液联合盐酸利托君治疗）,各为40例。观察并对比两组患者的疗效、血清指标、临床指标及药物不良反应。结果：观察组的临床总有效率明显较对照组高（P<0.05）。观察组的阴道出血停止时间、住院时间短于对照组,妊娠延长时间长于对照组,保胎成功率高于对照组（P<0.05）。治疗结束后,观察组的血清P、PAPP-A、HCG水平高于对照组（P<0.05）。两组不良反应发生率组间对比无差异（P>0.05）。结论：晚期先兆流产患者采用乐孕宁口服液联合盐酸利托君治疗效果较好,可调高血清P、PAPP-A、HCG水平,改善患者临床症状,且用药安全。     

呼吸科住院患者抗生素药物相关腹泻发生现状及影响因素分析

目的了解呼吸科住院患者抗生素药物相关腹泻发生现状并探讨相关影响因素。方法选取2019年1月-2019年9月我院呼吸科病房收治使用抗生素治疗的患者为研究对象,采用前瞻性队列研究,收集患者基本资料、抗生素使用情况及相关因素,以探讨抗生素药物相关腹泻的影响因素。结果本研究共纳入291例患者,抗生素药物相关腹泻发生率为11.3%。COX回归显示,入院时便潜血(OR=4.730,P0.001)、BMI(OR=0.918,P=0.027)、入院时血红蛋白水平(OR=0.974,P=0.007)、院前抗生素使用(OR=3.246,P=0.011)、单日使用抗生素最大种类数(OR=2.665,P=0.001)为抗生素药物相关腹泻的影响因素,便潜血阳性患者较阴性患者抗生素药物相关腹泻发生率高,入院时BMI、血红蛋白水平低,住院前已开始使用抗生素,单日抗生素使用种类多的患者抗生素药物相关腹泻发生率高。结论抗生素药物相关腹泻为呼吸科住院患者中常见的并发症,临床上对于便潜血阳性患者、BMI和/或血红蛋白水平较低的患者、住院前已开始使用抗生素的患者、感染较重需联合使用抗生素的患者,应在行抗生素治疗方案前做好抗生素药物相关腹泻的预防工作。     

登革2型病毒中国株3′非编码区RNA元件对翻译的影响

[目的]探讨登革病毒(dengue virus,DEN)3′非编码区(untranslated region,UTR)RNA元件(VR、RCS2、CS2、CS1和SL)对基因组翻译的影响.[方法]首先构建登革2′型病毒中国株(DEN2-43)UTR与萤火虫荧光素酶基因(LUC)组成的病毒诱导报告基因(virus induced reportergene,VIRG),在此基础上分别构建包含DEN2-43 3′UTR不同RNA元件的VIRG,并通过LUC检测、实时RT-PCR和Western blot方法分析含有不同元件VIRG对翻译效率的影响.[结果]发现完整的3′UTR缺失可显著抑制翻译,含有病毒VR元件VIRG的翻译水平与完整3′UTR的VIRG相似,RCS2或CS2元件可提高VIRG的翻译效率,CS1或SL元件可降低VIRG的翻译效率.[结论]DEN 2-43病毒基因组3′UTR参与了报告基因的翻译,其不同元件具有可上调和下调报告基因翻译效率的作用.     

碳源对粉核油球藻生长和脂肪酸组成特性的影响

研究了不同碳源类型（CO2、NaHCO3和葡萄糖）及其浓度对粉核油球藻（Pinguiococcus pyrenoidosus CCMP 2078）生长及脂肪酸组成的影响。结果表明：（1）培养液中适量添加碳源促进了粉核油球藻的生长,三种碳源的适宜添加浓度分别是0.5% CO2,5mmol/L NaHCO3和20g/L葡萄糖,对数生长末期的细胞密度分别是对照的3.10倍、1.47倍和2.78倍;（2）除了低浓度葡萄糖外,其他碳源类型和浓度均降低了TPUFA和EPA占总脂肪酸的比例,提高了TSFA的比例,胞内EPA和TSFA含量均下降;（3）低浓度碳源提高了TSFA和EPA产量。通入0.5% CO2培养的EPA和TSFA产量分别是对照的2.30倍和2.69倍,5mmol/L NaHCO3培养的TSFA产量是对照的1.85倍,5g/L和10g/L葡萄糖培养的EPA和TSFA产量最高分别可达对照的2.11倍和1.58倍。因此,通入低浓度CO2最有利于粉核油球藻的生长以及EPA和饱和脂肪酸的生产,EPA和饱和脂肪酸含量的提高主要是通过生物量的增大来实现的。     

鼻咽癌组织miR-20b-5p、miR-325-3p表达水平与放疗敏感性和预后的关系研究

摘要 目的：探讨鼻咽癌组织微小核糖核酸（miR）-20b-5p、miR-325-3p表达水平与放射治疗敏感性和预后的关系。方法：选取2017年11月至2019年6月我院收治的84例确诊为鼻咽癌并拟进行放射治疗的患者设为鼻咽癌组,另选取同期收治的42例慢性鼻咽炎患者为对照组,比较鼻咽癌组织及鼻咽部炎症组织中miR-20b-5p、miR-325-3p表达水平,分析鼻咽癌组织中miR-20b-5p、miR-325-3p表达水平与鼻咽癌患者临床病理特征的关系。根据鼻咽癌患者放疗敏感性评估结果分为敏感组和抵抗组,比较两组miR-20b-5p、miR-325-3p表达水平。随访3年,Kaplan-Meier法及Cox回归分析法分析miR-20b-5p、miR-325-3p表达水平与鼻咽癌患者生存预后的关系。结果：鼻咽癌组miR-20b-5p、miR-325-3p表达水平均高于对照组（P＜0.05）。不同T分期、N分期、临床分期患者在miR-20b-5p、miR-325-3p高表达组与低表达组中的占比比较存在统计学差异（P＜0.05）。完成7~8周放疗后3个月评估患者放疗抵抗率36.90%,抵抗组miR-20b-5p、miR-325-3p表达水平均高于敏感组（P＜0.05）。miR-20b-5p高表达鼻咽癌患者的累积生存时间短于miR-20b-5p低表达患者（P＜0.05）;miR-325-3p高表达鼻咽癌患者的累积生存时间短于miR-325-3p低表达患者（P＜0.05）。单因素、多因素Cox回归分析显示,年龄＞60岁、T3/T4期、miR-20b-5p高表达、miR-325-3p高表达是鼻咽癌患者预后不良的独立危险因素（P＜0.05）。结论：鼻咽癌组织中miR-20b-5p、miR-325-3p均异常高表达,其表达水平与肿瘤浸润深度、淋巴结转移、临床分期及放疗敏感性有关,且miR-20b-5p、miR-325-3p高表达患者放疗后预后不良风险更大。     

气候变化背景下中国冷杉属植物地理分布模拟分析

中国是世界上冷杉属（Abies Mill.）植物种类最为丰富、分布地域最广的国家,也是研究冷杉属植物分布成因与规律的关键地区。本文通过中国数字植物标本馆、全球生物多样性信息数据库和相关文献三种途径收集我国冷杉属植物的地理分布数据,结合当前和未来气候情景,应用最大熵模型（MaxEnt）模拟冷杉属植物的潜在分布,并使用GIS的空间分析功能做生境适宜性分析,评估我国各地区对冷杉属植物的保护能力。结果显示：（1）四川西南部、云南北部、西藏自治区东南部是我国冷杉属植物分布的热点地区;（2）在未来气候变化情景下,我国冷杉属植物的适宜生境面积将明显减少;（3）适宜生境在未来有向北迁移的趋势;（4）就各地区保护能力而言,在当前气候情景下,云南省的保护能力最高,在未来,我国西部地区的保护能力呈上升趋势,中部和东部地区呈下降趋势。本研究可为冷杉属植物的保护工作提供一定的理论依据和参考价值。