肝豆汤调控NLRP3炎症小体抑制Wilson病模型神经炎症的机制研究

目的 通过观察肝豆汤对Nod样受体家族含pyrin结构域蛋白3（Nod-like receptor family，pyrin domain-containing protein 3，NLRP3）炎症小体的调控作用，探究其抑制Wilson病（Wilson''s disease, WD）模型神经细胞炎症损伤的机制。方法 体外实验中，采用CuCl2诱导小胶质细胞（BV-2细胞）复制WD神经细胞损伤模型，并将BV-2细胞与海马细胞（HT-22细胞）条件培养，给予不同浓度肝豆汤含药血清。CCK-8法检测BV-2细胞及HT-22细胞活力，酶联免疫吸附法测定炎症因子水平，细胞化学法检测HT-22细胞乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase，LDH）漏出水平及氧化应激水平，Western blot法检测NLRP3炎症小体相关蛋白表达水平。体内实验中，以TX小鼠为模型组，并以DL小鼠为正常组，肝豆汤组给予TX小鼠肝豆汤灌胃4周。采用Barnes迷宫、旷场实验、高架十字实验观察小鼠行为，苏木精—伊红染色法观察小鼠海马组织的损伤程度，Western blot法检测NLRP3炎症小体相关蛋白表达水平。结果 体外实验结果显示，与模型组比较，肝豆汤可抑制小胶质细胞活化，增加HT-22细胞的存活率（P＜0.05），显著降低CuCl2诱导的HT-22细胞LDH漏出水平及氧化应激水平（P＜0.05），抑制CuCl2诱导的BV-2细胞炎症因子分泌（P＜0.05），降低半胱氨酸天冬氨酸酶1、NLRP3、白细胞介素-1β、含CARD结构域的凋亡相关颗粒样蛋白表达水平（P＜0.05）。体内实验研究发现，肝豆汤可减轻WD病模型TX小鼠海马组织神经细胞损伤，改善行为学异常（P＜0.05），抑制TX小鼠海马组织NLRP3炎症小体相关分子表达水平（P＜0.05）。结论 肝豆汤通过抑制铜蓄积诱导的NLRP3炎症小体活化，减轻WD模型神经细胞炎症损伤。