柑橘属植物疫霉病菌检测与鉴定的研究进展

在全世界危害柑橘属植物的疫霉有十几种,其中冬生疫霉(Phytophthora hibernalis)和丁香疫霉(P.syringae)为我国规定禁止进境的两种检疫性真菌病害。本文从传统的症状观察、病原菌形态特征和分子检测等方面综述了柑橘属疫霉菌检测与鉴定的研究进展,可为柑橘属植物疫霉菌的口岸检疫提供借鉴。     

家蚕蛹表达乙肝表面抗原中蛋白免疫原性的研究

将含有HBV （adr)的表面抗原中蛋白基因的重组病毒BmPAK-HBV感染家蚕（Bombyx mori)蛹，ELISDA和Western blotting分析表明，家蚕蛹表达产物具有较高的HBsAg抗原性，并能检测到PreS2抗原性。将重组组病感染蛹表达的乙肝表面抗原中蛋白对SD鼠进行注射免疫和口服免疫，注射免疫后的鼠体的内能产生较好的特异性抗－HBs抗体和抗－PreS2 抗体；口服免疫实验表明，连续添食6周后，约40％的鼠体内产生了免疫应答反应，在抗体转阳的鼠体内能同时检测到抗－HBs和抗PreS2抗体。     

李属植物检疫性丁香疫霉和栗黑水疫霉的三重PCR分子检测

为建立我国禁止进境的2种检疫性真菌丁香疫霉Phytophthora syringae和栗黑水疫霉P.cambivora的同步分子检测方法,根据疫霉属的18S rRNA、HSP90和Ypt1基因分别设计通用引物、丁香疫霉和栗黑水疫霉的特异性引物,建立三重PCR检测方法,并进行灵敏度测试和模拟带菌试验。结果表明,可同时检测李属植物上丁香疫霉和栗黑水疫霉的特异三重PCR检测体系为:最佳引物浓度组合18SUF/18SUR、PCSF/PCSR和PSSF/PSSR依次为0.2、0.8、1.0μL,最佳退火温度为63℃,最佳退火时间为20 s。该体系扩增丁香疫霉出现884 bp的18S rRNA条带和683 bp的HSP90基因特异条带,扩增栗黑水疫霉出现884 bp的18S rRNA条带和314 bp的Ypt1基因特异条带,对照菌只出现18S rRNA条带;三重PCR反应体系检测灵敏度低于单重PCR;模拟带菌试验可同时扩增出3个片段。表明该三重PCR检测方法能实现丁香疫霉和栗黑水疫霉的同步特异性检测,可有效改进李属类水果及其种苗上检疫性疫霉的快速检测。     

检疫性柑橘冬生疫霉和丁香疫霉的三重 PCR 同步检测

全世界危害柑橘的疫霉有14种,其中冬生疫霉Phytophthora hibernalis和丁香疫霉Phytophthora syringae为我国规定禁止进境的两种检疫性柑橘真菌病害,目前尚未见有此两种病原菌的同步分子检测报道.该研究根据14种柑橘疫霉的18SrRNA,ITS,heat shock protein 90(HSP 90)等基因分别设计了疫霉属的通用引物和此两种检疫性疫霉的特异引物,通过进行反应体系优化,建立了同时检测柑橘上两种检疫性疫霉的特异三重PCR检测方法,并进行了灵敏度试验.用15个柑橘疫霉菌株与甜橙的混合DNA做模板进行模拟带菌试验,结果表明该三重PCR分子检测能实现两种检疫性疫霉菌的同步特异检测,这两种检疫性柑橘疫霉提供了特异、可靠、便捷、适于口岸应用的检测方法,可有效促进柑橘类水果的快速通关.